楊 杰 鄭喜勝 王 偉

肺癌為臨床常見惡性腫瘤,其主要起源于氣管、支氣管黏膜或腺體組織,隨著病情進(jìn)展可引起咳嗽、咯血、胸痛等癥狀。肺癌早期預(yù)后多較好,若腫瘤細(xì)胞已發(fā)生轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散,則預(yù)后欠佳,患者生存率較低[1-2]。手術(shù)為肺癌的重要治療手段,但術(shù)后仍存在較高轉(zhuǎn)移及復(fù)方風(fēng)險(xiǎn),部分患者5年生存率低?？紤]與臨床缺乏精準(zhǔn)評(píng)估患者預(yù)后的特異性標(biāo)志物關(guān)系密切。從分子生物學(xué)角度分析,肺癌的發(fā)病與癌基因激活、抑癌基因失活等關(guān)系密切,細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制基因(CDKN2A)則屬于腫瘤抑制基因,正常情況下可參與細(xì)胞周期調(diào)控,阻止細(xì)胞增殖[3-4]。相關(guān)研究顯示[5-6],CDKN2A基因失活與肺癌惡性生物學(xué)行為關(guān)系密切。但關(guān)于CDKN2A基因在肺癌中的具體影響及與患者預(yù)后間的關(guān)系尚存在較多爭(zhēng)議。鑒于此,本研究旨在分析CDKN2A基因突變?cè)诜伟┲械挠绊懠芭c預(yù)后的關(guān)系,為肺癌的診治及療效評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年8月至2017年8月我院收治的79例肺癌患者作為研究對(duì)象,其中男性42例,女性37例;年齡44～72歲,平均年齡(56.81±5.36)歲;體質(zhì)量指數(shù)19～26 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(22.89±1.46)kg/m2;分化程度:14例低分化,46例中分化,19例高分化;肺癌類型:51例鱗癌,28例腺癌;復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況:50例無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,29例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移;腫瘤大小:29例>3 cm,50例≤3 cm。納入標(biāo)準(zhǔn):均經(jīng)手術(shù)病理確診;精神狀態(tài)正常;患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):預(yù)計(jì)生存期不足3個(gè)月;入組前接受過放化療;心肝腎嚴(yán)重障礙。

1.2 方法

所有患者均于術(shù)前采集癌變組織及癌旁組織樣本,其中癌旁組織為距離腫瘤5 cm處組織,且經(jīng)病理診斷為正常組織。免疫組化檢測(cè):先以免疫組化SP法進(jìn)行染色,切片后脫蠟水處理,抗原修復(fù)后,滴入一抗、二抗,標(biāo)本DAB顯色處理后,行染色、脫水、透明處理,最后封片;陽性判定標(biāo)準(zhǔn):每次取5個(gè)鏡下高倍視野,取平均值,陽性為呈棕褐色或棕黃色染色顆粒,并計(jì)算陽性表達(dá)情況,以染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞占比為標(biāo)準(zhǔn),染色強(qiáng)度為0～3分,陽性細(xì)胞占比分為0～4分,總分為兩者均數(shù)乘積,6分及以上為高表達(dá),6分以下為低表達(dá)。CDKN2A基因突變檢測(cè):提取總RNA,使用RT-PCR試劑盒擴(kuò)增?？偡磻?yīng)體系共25 μL,之后先在95 ℃下進(jìn)行5 min預(yù)處理,再熱變性95 ℃下處理30 s,之后延伸72 ℃下處理30 s,后設(shè)置60 ℃、61 ℃、59 ℃條件下進(jìn)行30個(gè)循環(huán),待擴(kuò)增完畢后電泳,檢測(cè)結(jié)果分析參考二代測(cè)序原理。所有患者均行3年長(zhǎng)期隨訪,記錄其生存情況,第一年3個(gè)月隨訪1次,后兩年6個(gè)月隨訪1次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 CDKN2A基因表達(dá)情況

肺癌組織CDKN2A基因高表達(dá)率較癌旁組織低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見表1。

表1 CDKN2A基因表達(dá)情況(例,%)

2.2 CDKN2A基因突變情況

肺癌組織CDKN2A基因突變率較癌旁組織高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見表2。

表2 CDKN2A基因突變情況(例,%)

2.3 CDKN2A基因突變與肺癌臨床病理特征的關(guān)系

基因突變患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移發(fā)生率與基因野生患者相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見表3。

表3 CDKN2A基因突變與肺癌臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.4 影響肺癌患者術(shù)后生存期危險(xiǎn)因素單因素及多因素分析

基因突變型患者3年生存率為46.67%(14/30),低于基因野生型患者的77.55%(38/49),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.890,P=0.005);基因突變型患者中位生存時(shí)間為(22.72±3.13)個(gè)月,短于基因野生型患者的(34.25±4.11)個(gè)月,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=13.189,P=0.000),見表4。

表4 影響肺癌患者術(shù)后生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素COX回歸分析

3 討論

肺癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,臨床認(rèn)為是多因素綜合作用促使正常細(xì)胞內(nèi)基因發(fā)生突變或失活所致[7-8]。臨床對(duì)于肺癌多以早診斷、早治療為原則,通過早期手術(shù)切除病灶能改善患者預(yù)后生存質(zhì)量,提高整體生存率。但長(zhǎng)期隨訪發(fā)現(xiàn),仍有較多肺癌患者術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況,導(dǎo)致中位生存時(shí)間降低。若能尋找到一種能夠精準(zhǔn)評(píng)估療效及預(yù)測(cè)預(yù)后的標(biāo)志物對(duì)改善患者預(yù)后尤為重要。相應(yīng)研究顯示[9-10],抑癌基因與肺癌發(fā)生關(guān)系密切,能抑制細(xì)胞生長(zhǎng),具有抑癌功能,能參與細(xì)胞周期調(diào)控,加快細(xì)胞凋亡。因此,通過監(jiān)測(cè)抑癌基因的狀態(tài)對(duì)評(píng)估肺癌患者預(yù)后至關(guān)重要。

CDKN2A基因則屬于抑癌基因,當(dāng)其處于高水平狀態(tài)下可對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖起到抑制作用,一旦CDKN2A基因發(fā)生突變或失活后則可降低對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制能力,使得腫瘤細(xì)胞快速增殖分化[11-12]。本研究結(jié)果顯示,肺癌組織CDKN2A基因高表達(dá)率為13.92%(12/79),低于癌旁組織的84.81%(68/79),基因突變率為37.97%(30/79),較癌旁組織的7.59%(6/79)高;基因突變患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與基因野生患者相比具有差異性,基因突變患者3年生存率為46.67%(14/30),較基因野生患者的77.55%(38/49)低,中位生存時(shí)間短于CDKN2A基因野生型患者;COX回歸分析顯示,腫瘤大小、CDKN2A基因突變、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移為影響肺癌患者術(shù)后生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;提示CDKN2A基因突變?yōu)橛绊懛伟┗颊咝g(shù)后生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,通過監(jiān)測(cè)其狀態(tài)能預(yù)測(cè)患者預(yù)后,且基因突變患者整體預(yù)后較差。賀小威等[13]研究也指出,CDKN2A基因一旦缺失則喪失會(huì)抑癌作用,使得腫瘤細(xì)胞快速增殖、分化,預(yù)后存活率低。分析原因?yàn)?正常細(xì)胞分裂周期主要依靠G1期-S期順利轉(zhuǎn)化,CDKN2A基因則能經(jīng)磷酸化作用調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,并對(duì)Cdk4活性進(jìn)行抑制,阻斷細(xì)胞進(jìn)入S期;若此過程中基因發(fā)生突變、缺失,則會(huì)喪失有源抑癌作用,還可促使細(xì)胞過度增殖,最終加速惡性腫瘤發(fā)生,故CDKN2A基因突變患者腫瘤體積更大,易發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致患者預(yù)后欠佳[14-15]。但本研究受樣本量小等因素影響,所得研究結(jié)果方面仍可能存在一定偏倚,相信隨著未來對(duì)CDKN2A基因的不斷深入研究,能夠更為明確其在肺癌中的影響。

綜上所述,CDKN2A基因與肺癌關(guān)系密切,可作為預(yù)后術(shù)后生存率的重要指標(biāo),一旦CDKN2A基因發(fā)生突變,則提示患者整體預(yù)后欠佳。