高彥琳, 成 威, 朱夢(mèng)宇, 劉定紅, 戎 李, 趙 勝

急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)是冠心病的常見類型,發(fā)病機(jī)制主要是冠脈內(nèi)斑塊破裂或血栓形成引起急性心肌供血減少或中斷,在臨床中具有較高的發(fā)病率和致殘率[1-2]。近年來(lái),隨著冠脈介入技術(shù)的應(yīng)用,ACS患者預(yù)后得到顯著改善,然而仍有部分患者在正規(guī)治療之后發(fā)生主要心血管不良事件(major adverse cardiovascular events,MACE)[3-4]。目前,學(xué)者們還在對(duì)ACS的病理、生理學(xué)機(jī)制進(jìn)行研究,探尋對(duì)本病診斷和預(yù)后評(píng)估敏感的預(yù)測(cè)指標(biāo),從而指導(dǎo)臨床工作。微小RNA(micro ribonucleic acids,miRNAs)是由核苷酸組成的非編碼單鏈小分子RNA,能與目標(biāo)mRNA結(jié)合,通過調(diào)控蛋白質(zhì)合成控制細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化和凋亡[5]。有證據(jù)表明,miR-139-5p與內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞增殖密切相關(guān),在內(nèi)皮和間充質(zhì)干細(xì)胞中,miR-139-5p可通過CD44/miR-139-5p通路調(diào)控血管增殖[6]。在內(nèi)皮細(xì)胞中,miR-139-5p過表達(dá)可抑制內(nèi)皮細(xì)胞功能及定向分化[7]。Wang等[8]研究發(fā)現(xiàn),miR-139-5p與急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)密切相關(guān),其可通過血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-1(vascular endothelial growth factor receptor-1,VEGFR-1)調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞功能,促進(jìn)心肌梗死病程進(jìn)展,但miR-139-5p和VEGFR-1在ACS患者中的表達(dá)水平及其預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)價(jià)值仍未得到闡明。鑒此,本研究通過檢測(cè)ACS患者血清miR-139-5p、VEGFR-1的表達(dá)水平,分析兩者在不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris,UAP)和AMI中的表達(dá)水平及與患者預(yù)后的關(guān)聯(lián)性,從而為ACS患者的病情評(píng)估、預(yù)后判斷和個(gè)體化治療提供理論基礎(chǔ)。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 招募2021年1月至2021年9月安徽省第二人民醫(yī)院收治的因胸痛入院的ACS患者176例。根據(jù)患者病史、冠脈造影檢查及其他臨床檢查結(jié)果將其分UAP組(100例)和AMI組(76例)。納入標(biāo)準(zhǔn):符合《急性冠脈綜合征急診快速診治指南(2019)》中關(guān)于UAP或AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)冠脈造影檢查明確診斷[9-10]。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并嚴(yán)重電解質(zhì)紊亂及嚴(yán)重感染性疾病者;(2)合并急性腦出血或急性腦梗死者;(3)合并嚴(yán)重肝腎功能不全、惡性腫瘤者。選擇同期因胸痛入院,并經(jīng)冠脈造影檢查排除冠心病的28例患者為對(duì)照組。研究獲醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2治療方法 根據(jù)《急性冠脈綜合征急診快速診治指南(2019)》[9]中ACS的治療原則進(jìn)行治療。本研究中,需急診手術(shù)者僅處理梗死相關(guān)血管,血栓抽吸或糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抑制劑的使用由醫(yī)師根據(jù)術(shù)中情況決定。其余患者的手術(shù)治療方案由具有造影資質(zhì)的醫(yī)師根據(jù)實(shí)際情況制定。

1.3一般臨床資料收集 記錄患者年齡、性別、慢性病史(高血壓病、糖尿病、血脂異常等)等資料。冠狀動(dòng)脈造影由我院心血管內(nèi)科專業(yè)醫(yī)師操作完成,依據(jù)造影檢查結(jié)果及血管病變狹窄程度計(jì)算Gensini評(píng)分[11-12]。

1.4血液檢查及心臟彩超檢查 于入院后次日清晨或急診冠脈介入術(shù)前抽取患者肘靜脈血送檢驗(yàn)科檢測(cè)。應(yīng)用SYSMEX XN1000全血自動(dòng)分析儀檢測(cè)白細(xì)胞(white blood cell,WBC)、紅細(xì)胞(red blood cell,RBC)水平;應(yīng)用LABOSPECT 008AS全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿酸(uric acid,UA)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)水平。應(yīng)用ACUSON SC2000行心臟彩超檢查,獲取左室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction,LVEF)值。

1.5實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法檢測(cè)血清miR-139-5p水平 取凍存血清,解凍后采用Trizol法提取總RNA,通過反轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海優(yōu)選生物科技有限公司)將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,并以cDNA為模板進(jìn)行qRT-PCR。miR-139-5p引物序列[13]:上游,5′-GTACACTCTGTGACTCTCAG-3′;下游,5′-ATCGTAC-TTGATACAC-3′。以U6為內(nèi)參,通過2-ΔΔCt法計(jì)算miR-139-5p的相對(duì)表達(dá)量。

1.6酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測(cè)血清VEGFR-1表達(dá)水平 取凍存血清,解凍后采用ELISA法檢測(cè)血清VEGFR-1表達(dá)水平,試劑盒購(gòu)自上海優(yōu)選生物科技有限公司,實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.7隨訪 患者出院后每月通過電話或門診方式進(jìn)行隨訪,記錄MACE發(fā)生情況。AMCE包括再發(fā)胸痛、心力衰竭、腦卒中、再發(fā)心肌梗死、臟器出血、再次血運(yùn)重建、支架內(nèi)血栓、支架內(nèi)再狹窄、死亡等事件[14-15]。隨訪時(shí)間6個(gè)月。

2 結(jié)果

2.1三組臨床資料比較 三組WBC、SCr、TG、LDL-C和LVEF水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與對(duì)照組相比,AMI組WBC、SCr、TG、LDL-C水平更高,LVEF降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。AMI組WBC、TG、LDL-C和Gensini評(píng)分高于UAP組,LVEF水平低于UAP組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 三組臨床資料比較

2.2三組血清miR-139-5p和VEGFR-1表達(dá)水平比較 與對(duì)照組比較,UAP組和AMI組血清miR-139-5p表達(dá)水平更高,VEGFR-1表達(dá)水平更低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且AMI組血清miR-139-5p表達(dá)水平較UAP組顯著升高(P<0.05),但兩組血清VEGFR-1表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

?三組血清miR-139-5p水平比較(F=42.594,P<0.001);?三組血清VEGFR-1水平比較(F=15.164,P<0.001);與對(duì)照組比較,*P<0.05;與UAP組比較,#P<0.05

2.3ACS患者血清miR-139-5p表達(dá)水平與VEGFR-1表達(dá)水平的相關(guān)性分析結(jié)果 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示,ACS患者血清miR-139-5p表達(dá)水平與VEGFR-1表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.189,P=0.010)。見圖2。

圖2 ACS患者血清miR-139-5p、VEGFR-1表達(dá)水平的散點(diǎn)圖

2.4MACE組與非MACE組臨床資料比較 176例ACS患者失訪2例。在隨訪期間,發(fā)生MACE 29例(MACE組),其中再發(fā)胸痛13例,心力衰竭6例,再次血運(yùn)重建5例,卒中2例,臟器出血2例,支架后再狹窄1例;未發(fā)生MACE 145例(非MACE組),兩組出院后的用藥情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與非MACE組比較,MACE組血清miR-139-5p、Gensini評(píng)分、SCr升高,LVEF降低(P<0.05),但VEGFR-1水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 MACE組與非MACE組臨床資料比較

2.5血清miR-139-5p表達(dá)水平與MACE發(fā)生的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果 以MACE發(fā)生情況為因變量(發(fā)生=1,未發(fā)生=0)進(jìn)行Cox回歸分析,經(jīng)不同風(fēng)險(xiǎn)校正后結(jié)果顯示,較高的血清miR-139-5p表達(dá)水平是促進(jìn)MACE發(fā)生的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3。

表3 血清miR-139-5p表達(dá)水平與MACE發(fā)生的Cox回歸分析結(jié)果

2.6血清miR-139-5p表達(dá)水平預(yù)測(cè)ACS患者術(shù)后發(fā)生MACE的效能分析結(jié)果 ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清miR-139-5p表達(dá)水平能有效預(yù)測(cè)術(shù)后MACE發(fā)生[AUC(95%CI)=0.81(0.73～0.89),P<0.001],其最佳截?cái)嘀禐?.08,對(duì)應(yīng)的靈敏度為82.83%,特異度為66.28%。見圖3。進(jìn)一步通過K-M曲線分析發(fā)現(xiàn),血清miR-139-5p表達(dá)水平≥2.08的ACS患者的無(wú)MACE生存時(shí)間較血清miR-139-5p表達(dá)水平<2.08者更短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見圖4。

圖3 血清miR-139-5p表達(dá)水平預(yù)測(cè)ACS患者術(shù)后MACE發(fā)生的ROC曲線圖

圖4 miR-139-5p表達(dá)水平≥2.08者與miR-139-5p表達(dá)水平<2.08者的K-M曲線圖

3 討論

3.1近年來(lái),miRNAs在心血管疾病中的作用逐漸受到關(guān)注,研究不同疾病狀態(tài)下相關(guān)miRNAs的表達(dá)情況及調(diào)控機(jī)制對(duì)心血管疾病的診治及進(jìn)展評(píng)估具有重要意義。大量研究證實(shí)miRNAs與冠心病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[16-18]。作為其中的一員,miR-139-5p可調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡[19],近期研究發(fā)現(xiàn),miR-139-5p與內(nèi)皮及平滑肌細(xì)胞增殖、遷移,以及心肌細(xì)胞凋亡、血管再生等心血管病理過程關(guān)系密切[5-7]。Zhang等[20]研究發(fā)現(xiàn),miR-139-5p與血管生成密切相關(guān)。在平滑肌細(xì)胞模型中,miR-139-5p可抑制胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)表達(dá)而促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖并抑制其凋亡[6]。在缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡模型中,孟憲玉等[21]發(fā)現(xiàn),miR-139-5p可促進(jìn)缺氧狀態(tài)下心肌細(xì)胞凋亡。在頸動(dòng)脈粥樣硬化中,miR-139-5p水平與頸動(dòng)脈厚度密切相關(guān)[22]。在心肌梗死患者中,Wang等[8]發(fā)現(xiàn),miR-139-5p在AMI中呈高表達(dá),并可通過抑制VEGFR-1表達(dá)調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞功能,進(jìn)而影響AMI病情進(jìn)展。VEGFR-1作為一種跨膜蛋白,可與內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子特異結(jié)合,在內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞增殖、白細(xì)胞活化、血管生成等方面發(fā)揮重要作用。相關(guān)研究顯示VEGFR-1可被miR-139-5p靶向激活并發(fā)揮功能[23]。

3.2目前,關(guān)于miR-139-5p在心血管疾病中的表達(dá)情況尚未定論。有研究發(fā)現(xiàn),在大腦缺血再灌注損傷中,miR-139-5p表達(dá)水平升高能夠減輕缺氧引起的腦損傷,從而發(fā)揮負(fù)向調(diào)控作用[24-25]。與既往研究相似,本研究結(jié)果顯示ACS患者血清miR-139-5p表達(dá)水平升高,VEGFR-1表達(dá)水平降低,且兩指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),血清miR-139-5p表達(dá)水平對(duì)預(yù)測(cè)ACS患者術(shù)后發(fā)生MACE具有應(yīng)用價(jià)值,當(dāng)miR-139-5p表達(dá)水平≥2.08時(shí),ACS患者發(fā)生MACE的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。筆者猜測(cè)當(dāng)冠脈血管狹窄或閉塞時(shí),miR-139-5p被激活釋放進(jìn)入循環(huán)中,并可能通過以下途徑來(lái)調(diào)控相關(guān)病理過程:(1)通過c-jun/血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)/血小板衍生生長(zhǎng)因子-B(platelet-dervied growth factor-B,PDGF-B)通路降低內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷徙和修復(fù)能力[26],未被修復(fù)的內(nèi)皮細(xì)胞更容易受到級(jí)聯(lián)反應(yīng)影響,從而加重血管阻塞;(2)通過影響GLP-1和VEGFR-1功能而促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖、遷徙,加重動(dòng)脈粥樣硬化[6,8];(3)促進(jìn)缺氧狀態(tài)下心肌細(xì)胞凋亡,增加受損心肌面積,從而加重病情進(jìn)展[21]。

3.3目前,關(guān)于miR-139-5p對(duì)ACS發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制尚不明確。有關(guān)研究顯示,在心肌缺血再灌注損傷中,miR-139-5p具有潛在的心臟保護(hù)作用[27],在心肌組織中高水平的miR-139-5p可通過蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)信號(hào)通路消除細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激產(chǎn)物,并發(fā)揮抗凋亡作用[28]。而在H9C2心肌母細(xì)胞中,miR-139-5p可受lncRNA H19調(diào)控,通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子Sox8的活性減輕心肌細(xì)胞損傷[29]。在大腦缺血再灌注損傷模型中,miR-139-5p也可通過調(diào)控叉頭框蛋白O1/Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1/核轉(zhuǎn)錄因子紅素2相關(guān)因子2軸發(fā)揮抗焦亡和血管保護(hù)作用[30]。因此,關(guān)于miR-139-5p在心血管疾病中的具體作用及調(diào)控機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

綜上所述,血清miR-139-5p和VEGFR-1表達(dá)水平與ACS關(guān)系密切,可能是影響ACS患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但本研究也有一定的局限性:(1)本研究?jī)H為單中心研究,納入研究對(duì)象代表性有限;(2)未能根據(jù)患者的治療方案進(jìn)行分層分析;(3)隨訪時(shí)間較短;(4)miR-139-5p的具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。