亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        CRISPR/Cas系統(tǒng)在斑馬魚中的研究進(jìn)展

        2023-08-04 05:42:50王阿利劉江東
        生物技術(shù)進(jìn)展 2023年4期
        關(guān)鍵詞:系統(tǒng)

        王阿利 , 劉江東

        武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,武漢 430072

        與哺乳動(dòng)物不同,斑馬魚通過體外受精繁殖,可以方便地對(duì)其胚胎發(fā)育的各個(gè)階段進(jìn)行研究觀察。斑馬魚的光學(xué)透明特性,使其易于結(jié)合熒光報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)行發(fā)育相關(guān)研究[1]。此外,斑馬魚的快速繁殖能力和胚胎便于基因操作特性,使其與基因組DNA 編輯技術(shù)的結(jié)合成為必然[2]。CRISPR/Cas 系統(tǒng)相較于其他編輯系統(tǒng),在斑馬魚中表現(xiàn)出更高的基因編輯效率和相對(duì)較低的細(xì)胞毒性[3],還具有可靶向編輯甲基化序列[4]以及進(jìn)行多重基因編輯的優(yōu)勢(shì)[5]。因此,近年來(lái)CRISPR/Cas系統(tǒng)在斑馬魚基因編輯領(lǐng)域的應(yīng)用愈加廣泛,并取得了一系列新突破。本文根據(jù)已有的相關(guān)報(bào)道,總結(jié)了CRISPR/Cas 系統(tǒng)在斑馬魚基因敲除或敲入、活細(xì)胞成像、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、多重靶向、疾病模型建立中的研究進(jìn)展,以期從CRISPR/Cas 系統(tǒng)在斑馬魚中應(yīng)用的角度為人類疾病機(jī)制的探索提供新的思路。

        1 CRISPR/Cas系統(tǒng)

        1.1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的基本作用原理

        CRISPR/Cas 系統(tǒng)是一個(gè)在古細(xì)菌和細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)切酶工具,作用是抵抗入侵的外源遺傳物質(zhì),例如噬菌體病毒、外源質(zhì)粒等。同時(shí),類似于哺乳動(dòng)物的二次免疫,CRISPR/Cas 系統(tǒng)可以為細(xì)菌提供獲得性免疫,當(dāng)病毒或者外源質(zhì)粒入侵細(xì)菌時(shí),細(xì)菌會(huì)形成相應(yīng)的“記憶”,從而保護(hù)細(xì)菌免受外源遺傳物質(zhì)的二次入侵[2,6]。CRISPR/Cas系統(tǒng)可以識(shí)別并切斷外源DNA 或RNA,使外源遺傳物質(zhì)的表達(dá)沉默,此原理與真核生物中RNA 干擾(RNA interference,RNAi)非常相似。正是因?yàn)榫哂芯珳?zhǔn)靶向功能,CRISPR/Cas 系統(tǒng)被開發(fā)為一種高效的基因編輯工具并被廣泛應(yīng)用于工程動(dòng)物基因組[6-7]。

        1.2 CRISPR/Cas系統(tǒng)的種類

        CRISPR/Cas系統(tǒng)主要分為2類,分別為Class1和Class2,Class1系統(tǒng)中包含4~7種Cas蛋白,共同作用干擾靶基因表達(dá),目前在斑馬魚基因編輯中應(yīng)用較少;Class2 系統(tǒng)中只有1 種Cas 蛋白,可單獨(dú)行使多種功能,這類Cas 蛋白通常具有多個(gè)復(fù)雜結(jié)構(gòu)域,例如Cas9、Cas12 等。而根據(jù)其剪切元件序列和功能特征,以及輔助元件的組成,Class1分為TypeⅠ、Ⅲ、Ⅳ 3 種類型,Class2 分為TypeⅡ、Ⅴ、Ⅵ 3 種類型[8]。用于斑馬魚基因編輯的主要是Class2系統(tǒng),TypeⅡ、Ⅴ、Ⅵ中的Cas蛋白分別為Cas9、Cas12、Cas13(表1)。其中Cas9 和Cas12 具有基因編輯功能,由crRNA 和tracrRNA 人工組合成單一指導(dǎo)RNA(single guidence RNA,sgRNA),引導(dǎo)Cas9和Cas12定點(diǎn)切割目標(biāo)序列。二者具有通過改變sgRNA 序列即可任意改變切割位點(diǎn)的可控性以及便利性,因此廣泛應(yīng)用于斑馬魚基因組編輯。

        表1 CRISPR/Cas Class2系統(tǒng)的種類及其特征Table 1 Types and characteristics of CRISPR/Cas Class 2 systems

        1.3 CRISPR/Cas系統(tǒng)在斑馬魚中的技術(shù)革新

        雖然CRISPR/Cas 系統(tǒng)在基因編輯中廣泛應(yīng)用,但是由于細(xì)胞內(nèi)修復(fù)結(jié)果的不確定性,研究者對(duì)CRISPR/Cas 系統(tǒng)的編輯精度有更高的追求。在提高CRISPR/Cas 系統(tǒng)編輯精度上的研究有以下幾方面進(jìn)展。

        1.3.1改造Cas 蛋白 Cas 蛋白是CRISPR/Cas 系統(tǒng)的核心組件。在斑馬魚中,通過改變核苷酸堿基從而遵循斑馬魚密碼子規(guī)律,并調(diào)節(jié)GC 含量和二級(jí)mRNA 結(jié)構(gòu),構(gòu)建了斑馬魚密碼子優(yōu)化的Cas9(zCas9)cDNA。再經(jīng)過體外轉(zhuǎn)錄,利用顯微注射到斑馬魚胚胎中,能夠特異性地提高zCas9對(duì)斑馬魚基因編輯的效率[17]。

        1.3.2拓展PAM 序列多樣性 Cas9 能夠識(shí)別的序列范圍受到特定PAM的限制[18-21]。SpCas9是迄今為止使用最廣泛的Cas9,主要識(shí)別NGG PAMs。由于僅限于包含該基序的位點(diǎn)可以被CRISPR/Cas9 系統(tǒng)編輯,SpCas9 很難精確靶向各種基因組序列并引發(fā)基因編輯所必需的雙鏈斷裂(double strain breaks,DSBs)[22]。拓展PAM 序列的多樣性成為擴(kuò)大CRISPR/Cas9 應(yīng)用范圍的研究重點(diǎn)。如今在NGG PAMs 之外,還發(fā)現(xiàn)了多種能夠靶向其他PAM 序列的Cas9。例如,被修飾過的化膿性鏈球菌Cas9(SpCas9)可以在斑馬魚細(xì)胞中特異地區(qū)分非典型NAG 和NGA PAMs[23];SaCas9 和其KKH SaCas9 變體,可以高效率靶向編輯斑馬魚基因組中PAM 為5′-NNNRRT-3′的DNA 序列[24];ScCas9作為一種新發(fā)現(xiàn)的Cas 蛋白,可以靶向基因組序列中更多的NNG PAMs[25]。PAM 的多樣性擴(kuò)大了可用靶位點(diǎn)的選擇范圍,增加了Cas9 的適用性,進(jìn)一步激發(fā)了CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在斑馬魚基因組編輯中的潛力。

        1.3.3優(yōu)化系統(tǒng)存在形式 引導(dǎo)RNA 和靶位點(diǎn)的互補(bǔ)配對(duì),使得Cas9 或Cas12 能夠在指定位點(diǎn)進(jìn)行雙鏈切割,引導(dǎo)RNA 的不穩(wěn)定靶向,大大降低了CRISPR/Cas9 和CRISPR/Cas12 的基因編輯效率。研究表明,sgRNA 5′端多余的鳥嘌呤核苷酸會(huì)導(dǎo)致斑馬魚胚胎內(nèi)CRISPR/Cas9 編輯能力降低[26]。在Cpf1(更名為Cas12a)蛋白缺失的情況下,crRNA(Cpf1 的向?qū)NA)在體內(nèi)不穩(wěn)定并發(fā)生降解[14]。以上2 種情況都可以通過將CRISPR/Cas 系統(tǒng)組裝成核糖核蛋白復(fù)合物以提高其對(duì)基因組編輯的穩(wěn)定性和有效性[26-27]。

        1.3.4改變載體組分 不同的CRISPR/Cas 系統(tǒng)載體構(gòu)成具有不同的編輯效果。在質(zhì)粒載體的CRISPR/Cas 系統(tǒng)中,以組織特異性的啟動(dòng)子啟動(dòng)系統(tǒng)表達(dá),就可以獲得針對(duì)特定組織結(jié)構(gòu)的基因編輯工具,進(jìn)而對(duì)不同的組織進(jìn)行特異性基因編輯操作[28]。

        1.3.5選擇合適的溫度 環(huán)境也會(huì)影響CRISPR/Cas 系統(tǒng)在斑馬魚中的使用效果。有研究表明,降低溫度有利于延緩斑馬魚胚胎早期發(fā)育,提高CRISPR/Cas9的編輯效率[29]。

        2 CRISPR/Cas 系統(tǒng)在斑馬魚基因編輯中的應(yīng)用

        2.1 利用CRISPR/Cas 系統(tǒng)對(duì)斑馬魚進(jìn)行基因敲除或敲入

        Cas9 和Cas12 蛋白都可以用作基因敲除或敲入,通過引入雙鏈斷裂、非同源端連接(non-homologous end joining,NHEJ)修復(fù)或同源定向修復(fù)(homologous directed repair,HDR)均可以誘導(dǎo)目的基因的插入或缺失(indels)[30]。但由于供體和斷點(diǎn)之間的連接是不可預(yù)測(cè)的,修復(fù)后突變的結(jié)果通常并不理想,特別是HDR 介導(dǎo)的基因組編輯敲入方法在斑馬魚中效率更低[31]。因此,研究者提出了很多辦法來(lái)提高插入/缺失效率。

        針對(duì)HDR 導(dǎo)致的突變效率低的問題,在斑馬魚胚胎中引入斑馬魚長(zhǎng)單鏈DNA 模板(zebrafish long single-stranded DNA template,zLOST),利用HDR 和長(zhǎng)單鏈DNA(long single stranded DNA,lssDNA)作為修復(fù)模板可以在斑馬魚中產(chǎn)生更有效、更精確的突變[32]。最近出現(xiàn)的先導(dǎo)編輯(prime editing,PE)系統(tǒng)也是提高修復(fù)后插入成功率的有效途徑。PE 系統(tǒng)包含1 個(gè)pegRNA 和1 個(gè)PE2 蛋白,PE2 蛋白由1 個(gè)nCas9 和1 個(gè)改造的M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase,RT)融合組成。與常規(guī)sgRNA 不同的是,pegRNA 不僅具有靶向作用,自身還帶有“逆轉(zhuǎn)錄模板”,PE2 蛋白會(huì)在pegRNA 引導(dǎo)下結(jié)合到目標(biāo)序列上,然后啟動(dòng)逆轉(zhuǎn)錄酶功能,以pegRNA 上的一段序列為逆轉(zhuǎn)錄模板,合成一段DNA 序列,隨后細(xì)胞內(nèi)的修復(fù)機(jī)制就會(huì)將新合成的序列整合到基因組中[33]。體外純化的PE 核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)復(fù)合物被證實(shí)可以高效地誘導(dǎo)斑馬魚體細(xì)胞突變并進(jìn)行種系傳遞[9]。

        除了進(jìn)行系統(tǒng)構(gòu)成改良之外,優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)也能提高基因插入/缺失效率。例如,在基因組中插入熒光蛋白標(biāo)記時(shí),利用RNA 剪接過程中非編碼序列會(huì)從轉(zhuǎn)錄本中移除的特性,在非編碼區(qū)域(如內(nèi)含子和5′非翻譯區(qū))整合熒光蛋白,這樣即使出現(xiàn)不精確的整合事件也不會(huì)影響標(biāo)記蛋白的表達(dá),從而提高了熒光蛋白精確插入的成功率[34]。除此之外,利用斑馬魚胚胎基因分型(zebrafish embryo genotyping,ZEG)裝置,在受精后72 h 的胚胎中提取少量的基因組DNA,選出敲入率最高的斑馬魚胚胎,再和下一代測(cè)序相結(jié)合,可以使CRISPR/Cas系統(tǒng)獲得17倍的體細(xì)胞編輯能力,大大提高了斑馬魚CRISPR編輯的選擇能力[35]。

        2.2 dCas9 作用于斑馬魚活細(xì)胞成像與轉(zhuǎn)錄調(diào)控

        CRISPR/dCas9 活細(xì)胞成像技術(shù)的基本原理是將dCas9 與熒光基團(tuán)偶聯(lián),在細(xì)胞核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)的引導(dǎo)下穿過細(xì)胞器膜,通過sgRNA 的靶向作用特異性地標(biāo)記染色體基因序列。一般情況下,dCas9 在細(xì)胞中廣泛表達(dá),為了提高信噪比及靶位點(diǎn)的數(shù)量,sgRNA一般靶向重復(fù)序列[36]。利用CRISPR/dCas9活細(xì)胞成像技術(shù),可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)的基因?qū)崿F(xiàn)精確定位,并利用熒光基團(tuán)使其可視化。例如,屬于調(diào)節(jié)母體mRNA清除的microRNA家族中的miR-430,是一個(gè)有54 個(gè)拷貝的重復(fù)基因,將dCas9-3xGFP與定位在內(nèi)源性miR-430 上的gRNAs 共注射入單細(xì)胞中,可以尋找到miR-430 位點(diǎn)在胚胎中最早的轉(zhuǎn)錄時(shí)間點(diǎn)[10]。

        基因的轉(zhuǎn)錄起始和延伸可以被啟動(dòng)子和外顯子中的sgRNA 復(fù)合物干擾,如dCas9(dead Cas9,Cas9 的無(wú)外切酶活性形式)。如果克虜伯相關(guān)盒(krüppel associated box,KRAB)結(jié)構(gòu)域與dCas9 融合,則會(huì)抑制靶基因的表達(dá)。同樣,轉(zhuǎn)錄激活因子如VP16 的融合則可以增加靶基因的表達(dá)[37]。將體外合成dCas9-KRAB 的mRNA 和靶特異性sgRNAs注射到斑馬魚單細(xì)胞期胚胎中,則發(fā)現(xiàn)靶位點(diǎn)基因的表達(dá)水平降低[11]。

        2.3 利用CRISPR/Cas系統(tǒng)靶向斑馬魚RNA

        自發(fā)現(xiàn)C2c2(現(xiàn)被稱為Cas13a)是一種單組分可編程RNA 引導(dǎo)的靶向RNA CRISPR 效應(yīng)器之后[38],研究人員開始運(yùn)用CRISPR/Cas13a 進(jìn)行RNA 示蹤的研究。2023 年1 月,陳玲玲團(tuán)隊(duì)在斑馬魚合子中注射純化的CRISPR/dCas13 熒光蛋白和修飾后的引導(dǎo)RNA,在沒有其他基因工程操作的前提下,從合子基因組激活(zygotic genome activation,ZGA)到早期分節(jié)期(early segmentation period),對(duì)表達(dá)的mRNA進(jìn)行單色和雙色跟蹤,揭示了轉(zhuǎn)錄和mRNP 運(yùn)動(dòng)的特征,為多細(xì)胞生物內(nèi)源性RNA的可視化提供了強(qiáng)大工具[15]。

        CRISPR/Cas13 系統(tǒng)已被用于沉默酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中的RNA,比起RNAi,該系統(tǒng)有更廣泛的適用性和更高的沉默效率[39-41]。研究證實(shí),CRISPR-RfxCas13d(CasRx)是一個(gè)有效且精確的RNA 沉默系統(tǒng),該系統(tǒng)可以有效靶向斑馬魚合子表達(dá)和母體提供的轉(zhuǎn)錄本,使轉(zhuǎn)錄本水平平均下降76%[16]。

        2.4 CRISPR/Cas系統(tǒng)多重靶向斑馬魚基因組

        有些性狀是由多個(gè)基因共同控制的,單位點(diǎn)編輯可能無(wú)法改變性狀。而單基因控制的性狀由于受RNA剪接、RNA無(wú)意義的衰減、mRNA失調(diào)等因素影響[42-45],編輯效果并不理想。CRISPR/Cas系統(tǒng)的一個(gè)優(yōu)勢(shì)就是可操作性靈活,它可以同時(shí)對(duì)多個(gè)基因位點(diǎn)進(jìn)行高效編輯。

        利用Cas 蛋白和sgRNA 的多樣性,可實(shí)現(xiàn)斑馬魚的多重靶向基因編輯。研究表明,化膿性鏈球菌、金黃色鏈球菌、毛螺科細(xì)菌的CRISPR/Cas系統(tǒng)在斑馬魚體內(nèi)能夠同時(shí)運(yùn)行,且編輯效果可疊加[46]。另外,同時(shí)遞送一種Cas 蛋白和多條sgRNA 到斑馬魚胚胎中,也可以達(dá)到多位點(diǎn)共同編輯的目的[47]。在此基礎(chǔ)上,使用來(lái)自斑馬魚的內(nèi)源性tRNA 基因,可以構(gòu)建tRNA-多重sgRNA 載體。利用tRNA的轉(zhuǎn)錄本內(nèi)源性加工,單個(gè)載體的轉(zhuǎn)錄本即可在斑馬魚胚胎中加工出多個(gè)sgRNA,既能為多重sgRNA 的內(nèi)源性加工工具提供更多選擇,又能降低多重靶向系統(tǒng)對(duì)斑馬魚的毒性[48]。除此之外,向斑馬魚胚胎同時(shí)注射4 種靶向單個(gè)基因的CRISPR/Cas9 核糖核蛋白復(fù)合物(Cas9 RNP),也能夠顯著提高對(duì)功能基因的破壞效率[49]。

        CRISPR/Cas 系統(tǒng)的多重靶向功能增加了靶位點(diǎn)數(shù)量,不僅可以同時(shí)完成多基因編輯,還可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)片段和多片段的突變,對(duì)研究相關(guān)的基因或者同一通路的基因功能有重要意義。

        2.5 CRISPR/Cas 系統(tǒng)應(yīng)用于建立斑馬魚疾病模型

        斑馬魚與人類具有很高的遺傳相似性,是人類疾病基因研究的理想模型。特別是其胚胎透明等特點(diǎn),使得斑馬魚在建立疾病模型上具有不可替代的優(yōu)勢(shì),在探索器官發(fā)育、神經(jīng)調(diào)控、譜系追蹤等方面作出了較大貢獻(xiàn)[50-51]。

        除了胚胎透明特性外,斑馬魚還能夠在心血管系統(tǒng)失去功能的情況下通過氧擴(kuò)散生存,允許在發(fā)育后期研究致命的心臟缺陷,以此闡明心臟疾病相關(guān)機(jī)制。在斑馬魚的心臟發(fā)育研究中,通過CRISPR 敲除斑馬魚的WAVE2 復(fù)合物蛋白基因brk1、nckap1 和wasf2 以及小GTPase 信號(hào)中的cul3a 和racgap1 調(diào)控因子,建立了斑馬魚先天性心臟病模型,發(fā)現(xiàn)WAVE2 復(fù)合物蛋白的缺失會(huì)引發(fā)冠心病等先天性心臟病,證明其對(duì)心臟正常發(fā)育具有重要作用[52]。另一項(xiàng)研究表明,斑馬魚缺乏與人類左心發(fā)育不全綜合征(hypoplastic left heart syndrome,HLHS)相關(guān)的RNA 結(jié)合蛋白R(shí)BFOX2,會(huì)顯示出與HLHS患者一致的心血管缺陷重疊,且繼發(fā)于泵功能受損,該研究利用斑馬魚進(jìn)一步闡明了人類HLHS的發(fā)病機(jī)制[53]。

        迄今為止,人類神經(jīng)疾病方面的研究進(jìn)展緩慢,斑馬魚因其遺傳可馴化性、強(qiáng)大的行為特征和易于高通量藥物篩選而成為研究神經(jīng)疾病有價(jià)值的模型。在斑馬魚中利用CRISPR/Cas 系統(tǒng)進(jìn)行神經(jīng)疾病相關(guān)基因的敲除或敲低,可以揭示一系列神經(jīng)疾病的發(fā)病機(jī)制。例如,在斑馬魚中使用CRISPR/Cas9 來(lái)靶向CHD7 內(nèi)多個(gè)位置,構(gòu)建了CHARGE 綜合征相關(guān)的聽覺和視覺行為缺陷模型,發(fā)現(xiàn)CHD7 基因內(nèi)突變位置的改變會(huì)影響CHARGE 綜合征相關(guān)表型的外顯率[54]。利用CRISPR/Cas9 基因編輯技術(shù),構(gòu)建編碼PRC1 復(fù)合物酶成分Ring1b 的rnf2 基因突變體系,發(fā)現(xiàn)其編碼成年大腦中參與突觸結(jié)構(gòu)和功能的基因下調(diào),神經(jīng)嵴和神經(jīng)前體細(xì)胞異常遷移和分化,說明大腦連接不足可能是setd5 突變斑馬魚模型社會(huì)障礙的原因,這為人類自閉癥的研究奠定了基礎(chǔ)[55]。另外,通過斑馬魚模型的篩選等方法,發(fā)現(xiàn)了除草劑利奴隆會(huì)激活I(lǐng)RE1a-XBP1 信號(hào)從而促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥,并可能促進(jìn)多發(fā)性硬化,證實(shí)環(huán)境會(huì)影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的致病活動(dòng)[56]。

        多細(xì)胞生物是由單個(gè)細(xì)胞通過不同的譜系發(fā)展而來(lái)的。在此期間,有限的胚胎細(xì)胞產(chǎn)生人體內(nèi)的所有細(xì)胞。確定這些胚胎細(xì)胞在成人組織中的發(fā)育命運(yùn),需要在單細(xì)胞水平同時(shí)獲取發(fā)育途徑和細(xì)胞身份信息,這一直是譜系追蹤的主要挑戰(zhàn)。CRISPR/Cas9 靶位點(diǎn)受到PAM 序列NGG 的限制,而由于GG 或CC 二核苷酸平均每8 個(gè)堿基對(duì)出現(xiàn)一次,因此偶然且緊湊的CRISPR/Cas9 靶點(diǎn)陣列存在于大多數(shù)基因組,并能夠提供足夠多的信息進(jìn)行譜系追蹤[57]。使用CRISPR/Cas9 技術(shù),在目標(biāo)基因組位點(diǎn)誘導(dǎo)雙鏈斷裂,并在不同位置(疤痕)上引入突變,可以永久且可遺傳地特異性標(biāo)記斑馬魚胚胎中的細(xì)胞,并在多輪細(xì)胞分裂過程中,逐步引入和積累DNA 突變,通過細(xì)胞間共享的突變模式來(lái)闡明譜系關(guān)系,以此將斑馬魚胚胎中的細(xì)胞與成體組織中的克隆細(xì)胞對(duì)應(yīng)起來(lái)[57-60]。

        3 展望

        CRISPR/Cas 系統(tǒng)作為基因組操作工具的出現(xiàn),使斑馬魚的生物學(xué)研究發(fā)生了革命性變化。各種類型的核酸酶及其變體已被開發(fā)用于斑馬魚研究的多個(gè)方面,包括基因敲除或敲入、活細(xì)胞成像、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、多重靶向、建立疾病模型等。

        隨著對(duì)多種斑馬魚疾病模型的研究,CRISPR/Cas 系統(tǒng)可能會(huì)被用于保護(hù)健康和預(yù)防疾病等領(lǐng)域,例如用來(lái)預(yù)防心血管疾病。然而CRISPR/Cas系統(tǒng)缺少直接靶向成體特定組織的能力,并且脫靶率也一直是需要改進(jìn)的問題。因此,未來(lái)需要進(jìn)一步提高其成體適用性,建立高精度靶向的CRISPR/Cas 系統(tǒng),拓展相關(guān)基礎(chǔ)研究和臨床診療手段。同時(shí),由于CRISPR/Cas 系統(tǒng)體積大且?guī)в胸?fù)電荷,Cas 蛋白和sgRNA 的傳遞仍然具有挑戰(zhàn)性。因此,開發(fā)出能夠?qū)RISPR/Cas 系統(tǒng)高效傳遞到細(xì)胞內(nèi)的載體,是未來(lái)實(shí)現(xiàn)該系統(tǒng)理想效果的重要方向。

        未來(lái)CRISPR/Cas 系統(tǒng)的研究和應(yīng)用會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大,同時(shí)需與技術(shù)交叉,例如機(jī)器學(xué)習(xí)、活細(xì)胞成像和更快捷的DNA 測(cè)序等。毫無(wú)疑問,CRISPR/Cas 系統(tǒng)將不斷結(jié)合新的功能元件,成為基因組工程研究中一個(gè)持續(xù)擴(kuò)展的工具箱。

        猜你喜歡
        系統(tǒng)
        Smartflower POP 一體式光伏系統(tǒng)
        WJ-700無(wú)人機(jī)系統(tǒng)
        ZC系列無(wú)人機(jī)遙感系統(tǒng)
        基于PowerPC+FPGA顯示系統(tǒng)
        基于UG的發(fā)射箱自動(dòng)化虛擬裝配系統(tǒng)開發(fā)
        半沸制皂系統(tǒng)(下)
        FAO系統(tǒng)特有功能分析及互聯(lián)互通探討
        連通與提升系統(tǒng)的最后一塊拼圖 Audiolab 傲立 M-DAC mini
        一德系統(tǒng) 德行天下
        PLC在多段調(diào)速系統(tǒng)中的應(yīng)用
        亚洲黄色天堂网站在线观看禁18| 精品人伦一区二区三区蜜桃麻豆| 青青草视频在线视频播放| 国产一区资源在线播放| 国产免码va在线观看免费| 国产99久久久久久免费看| 白浆出来无码视频在线| 日本一区二区高清视频在线| 亚洲午夜狼人综合影院| 色橹橹欧美在线观看视频高清| 美女在线国产| 亚洲国产成人av第一二三区| 极品粉嫩小仙女高潮喷水网站| 黑人巨大精品欧美一区二区| 99成人精品| 蜜桃视频网站在线免费观看| 国产在线视频一区二区天美蜜桃 | 99香蕉国产精品偷在线观看| 97日日碰日日摸日日澡| av男人天堂网在线观看| 国产一区二区三区小说| 国产成人av免费观看| 欧美精品v欧洲高清| 白嫩少妇高潮喷水av| 97碰碰碰人妻无码视频| 精品人妻少妇一区二区不卡| 日本高清中文一区二区三区| 丁香花五月六月综合激情| 欧美a级情欲片在线观看免费| 女人体免费一区二区| 中文字幕精品一区二区三区av| 国产成人精品久久亚洲高清不卡| 丰满人妻无奈张开双腿av| 人妻av午夜综合福利视频| 99精品国产一区二区三区| 日韩人妻无码精品-专区| 欧美 亚洲 国产 日韩 综AⅤ| 亚洲韩日av中文字幕| 乱色精品无码一区二区国产盗| 四虎影视国产在线观看精品| 亚洲av第二区国产精品|