余輝 吳慶能 熊光 胡文帥 溫輝林 趙進(jìn)喜 蔡蔚

骨關(guān)節(jié)炎是一種以軟骨退化、滑膜慢性炎癥、軟骨下骨重塑以及骨贅形成為特點(diǎn)的退行性關(guān)節(jié)病[1]。研究證實(shí)氧化應(yīng)激是骨關(guān)節(jié)炎的一種重要致病因素，活性氧自由基 (reactive oxygen species，ROS)在骨關(guān)節(jié)炎軟骨中含量很高[2]。伴隨著衰老，軟骨細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活性與線粒體功能的顯著下降[3]，關(guān)節(jié)內(nèi) ROS 水平逐漸升高，軟骨細(xì)胞的 DNA 結(jié)構(gòu)受損，端粒長(zhǎng)度明顯下降，導(dǎo)致軟骨基質(zhì)生成大量減少、軟骨細(xì)胞老化或出現(xiàn)凋亡[4]。晚期氧化蛋白產(chǎn)物 (advanced oxidation protein products，AOPPs) 是體內(nèi)重要的氧化應(yīng)激標(biāo)記物，已被證實(shí)參與了多種疾病的發(fā)生與發(fā)展[5-8]。同時(shí) AOPPs 又能誘導(dǎo)各種細(xì)胞發(fā)生呼吸爆發(fā)，產(chǎn)生更多的 ROS[9]，造成惡性循環(huán)。研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血漿中，AOPPs 水平均有顯著提高[10]，且 AOPPs能夠通過不同途徑誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞的凋亡[11-12]，這說明 AOPPs 也是骨關(guān)節(jié)炎極其重要的致病因子。既往對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的研究一直將重點(diǎn)放在關(guān)節(jié)軟骨上，而相關(guān)學(xué)者卻提出軟骨下骨的改變要早于軟骨的改變[13]。雖然軟骨下骨的骨重塑作為骨關(guān)節(jié)炎啟動(dòng)因素的論斷尚缺乏足夠的證據(jù)，但骨關(guān)節(jié)炎病程中軟骨下骨改變的普遍性已被許多報(bào)道證實(shí)[14-16]。而研究發(fā)現(xiàn) AOPPs 能誘導(dǎo)成骨樣細(xì)胞內(nèi) ROS 生成、激活 ROS 敏感核轉(zhuǎn)錄因子 Kappa B (nuclear factor-κB，NF-κB) 信號(hào)，抑制成骨細(xì)胞的增殖與分化[17]，還可以通過還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)氧化酶依賴的、MAPKs 介導(dǎo)的內(nèi)源性凋亡通路誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡[18]。因此，有理由推測(cè)，骨關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中可能存在 AOPPs 蓄積，且 AOPPs 可能是軟骨下骨發(fā)生骨重塑的一種重要因素。本實(shí)驗(yàn)以手術(shù)造模[19]的方式制造出兔骨關(guān)節(jié)炎模型，再由外源性 AOPPs 干預(yù)，最終采用高分辨率 micro-CT 來量化并評(píng)價(jià)軟骨下骨的改變。

材料與方法

一、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn)

本實(shí)驗(yàn)為動(dòng)物對(duì)比實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)于 2013 年 6 月至2014 年 11 月在南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成。

二、實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：5 月齡雄性新西蘭大白兔 24 只，體重 2.0～2.5 kg，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。于室溫 (22±1) ℃、濕度 50%～60% 的環(huán)境下飼養(yǎng)，給予充足的水 (蒸餾水) 和食物 (兔標(biāo)準(zhǔn)化飼料，南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，嚴(yán)格控制光照周期 (晝 12 h，夜 12 h)。在新環(huán)境中適應(yīng) 10 天后，通過隨機(jī)數(shù)字表法對(duì)動(dòng)物進(jìn)行區(qū)組隨機(jī)化分組，將動(dòng)物平均分為晚期氧化蛋白產(chǎn)物組 (AOPPs組)，磷酸鹽緩沖液 (phosphate buffered saline，PBS)組和假手術(shù)組 (Sham組)。本實(shí)驗(yàn)方案通過南方醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)實(shí)施。

三、方法

1.無內(nèi)毒素 AOPPs 制備方法：將兔血清白蛋白粉末用 PBS 溶解配成 20 mg / ml 溶液后與 40 mmol / L的次氯酸等體積混合后，室溫下反應(yīng) 30 min 后立即轉(zhuǎn)移至透析袋中，放入 PBS 中在磁力攪拌器攪拌下連續(xù)透析 24 h，每隔 6 h 更換 PBS 液體，至配制的混合液體中無游離 HCIO。用直徑為 0.22 μm 的細(xì)菌濾器對(duì)配制的液體進(jìn)行過濾后分裝于 50 ml 離心管中備用。為盡可能降低內(nèi)毒素污染，配液過程中所有玻璃器皿都經(jīng)高溫處理。用除菌濾器過濾配制好的 AOPPs 溶液，使其內(nèi)毒素水平低于 0.05 ng / mg 水平。使用試劑、儀器詳情見表1、2。

表1 使用試劑名稱、規(guī)格及生產(chǎn)廠家Fig.1 Reagent name, specification and manufacturer

表2 使用儀器、設(shè)備名稱、型號(hào)及生產(chǎn)廠家Fig.2 Instrument, equipment name, model and manufacturer

2.動(dòng)物造模方法：采用濃度為 30 g / L 的戊巴比妥鈉 (1.0 ml / kg) 與速眠新 Ⅱ (0.3 ml / kg) 進(jìn)行肌內(nèi)注射麻醉新西蘭大白兔后，常規(guī)備皮消毒手術(shù)區(qū)域。其中 AOPPs 組與 PBS 組均行前交叉韌帶橫斷和內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù) (anterior cruciate ligament transection and medial meniscus resection，ACLT +MMx)。Sham 組以同樣手術(shù)入路暴露關(guān)節(jié)腔后逐層縫合。

3.動(dòng)物干預(yù)方法：采用膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射干預(yù)，將兔固定于兔盒中，屈曲膝關(guān)節(jié)，用 1 ml 注射器抽取配制好的干預(yù)藥劑注射入膝關(guān)節(jié)腔中，隔天注射1 次。

4.處死與取材：使用戊巴比妥鈉將兔深度麻醉處死，然后沿大腿外側(cè)中線切開肌肉至小腿遠(yuǎn)端，充分暴露股骨與脛骨，用咬骨鉗將股骨近端與脛骨遠(yuǎn)端剪斷，留取中間含膝關(guān)節(jié)的部分。將整體的膝關(guān)節(jié)標(biāo)本放置在顯微手術(shù)操作臺(tái)上，用眼科剪剪開關(guān)節(jié)囊，分離股骨與脛骨之間的軟組織直到將股骨與脛骨分離開。分離開的脛骨經(jīng)過充分剝離標(biāo)本上殘余軟組織后，用生理鹽水紗布進(jìn)行包埋并放入50 ml 離心管中編號(hào)置入 -80 ℃ 冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

5.大體形態(tài)觀察：用眼科剪將脛骨平臺(tái)周圍軟組織剔除干凈后對(duì)脛骨平臺(tái)軟骨關(guān)節(jié)面進(jìn)行觀察與拍照。

6.組織學(xué)切片番紅 O 染色：取各組脛骨，用體積分?jǐn)?shù) 10% 的多聚甲醛溶液固定 24 h 后采用乙二胺四乙酸螯合劑慢速脫鈣 8 周，石蠟縱向包埋。將脛骨平臺(tái)內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)面標(biāo)本縱向分為 4 個(gè)區(qū)域，取中間2 個(gè)區(qū)域的軟骨及軟骨下骨制作 5 μm 厚切片。切片經(jīng)逐級(jí)脫蠟、脫水、用番紅染色劑染色 2 min，95%酒精沖去浮色并脫水，擦去標(biāo)本以外的多余染料，晾干后以中性樹脂封片。

7.脛骨軟骨下骨的 micro-CT 掃描：將脛骨平臺(tái)標(biāo)本垂直置于樣品套筒中，以泡沫固定防止標(biāo)本晃動(dòng)。然后將套筒固定于 micro-CT 中對(duì)標(biāo)本經(jīng)行預(yù)掃描，在預(yù)掃描的基礎(chǔ)上選擇正式掃描的感興趣區(qū)域后即可開始掃描，掃描參數(shù)：電壓 45 kV，電流90 μA，掃描分辨率 36 μm，掃描完成后將掃描數(shù)據(jù)從主機(jī)導(dǎo)出。

四、主要觀察指標(biāo)

觀察關(guān)節(jié)軟骨損傷程度和軟骨基質(zhì)染色情況。micro-CT 測(cè)量參數(shù)：骨體積分?jǐn)?shù) (bone volume fraction，BV / TV)，即骨體積占總骨組織體積的百分比，單位為 %；骨小梁厚度 (trabecular thickness，Tb.Th)，是指骨小梁的平均厚度，單位為 mm；骨小梁分離度 (trabecular separation，Tb.Sp)，是指骨小梁之間的髓腔平均寬度，單位為 mm；骨小梁數(shù)目 (trabecular number，Tb.N) 是指在給定長(zhǎng)度骨組織與非骨組織的交點(diǎn)數(shù)量，單位為 1 / mm；骨小梁結(jié)構(gòu)模型指數(shù) (structure model index，SMI)，定義骨小梁板狀和桿狀的程度，板狀骨小梁和桿狀骨小梁的SMI 數(shù)值分別為 0 和 3；骨小梁連接密度 (connection density，CD)，是指在給定的空間內(nèi)骨小梁之間交點(diǎn)的數(shù)量，單位為 1 / mm3。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，首先對(duì)各組 micro-CT 測(cè)量參數(shù)行方差齊性檢驗(yàn)，各組間比較在方差齊時(shí)行 One-way ANOVA，LSD 法多重比較。方差不齊時(shí)行 Welch 法，Dunett T3 法多重比較。測(cè)量參數(shù)之間的相關(guān)分析在各組方差齊時(shí)應(yīng)用 Pearson 相關(guān)分析，方差不齊時(shí)采用 Spearman 相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α 值取雙側(cè) 0.05。

結(jié) 果

一、大體觀察結(jié)果

Sham 組脛骨平臺(tái)軟骨關(guān)節(jié)面平整有光澤，關(guān)節(jié)周圍未見骨贅；PBS 組可見關(guān)節(jié)面軟骨出現(xiàn)較小裂紋，關(guān)節(jié)面局部泛紅；AOPPs 組關(guān)節(jié)面負(fù)重區(qū)可見明顯缺損，關(guān)節(jié)色澤變暗，周圍可見骨贅形成(圖1a～c)。

圖1 各組的大體標(biāo)本與組織學(xué)切片觀察 (番紅O 固綠染色 × 200) a：Sham 組脛骨平臺(tái)軟骨關(guān)節(jié)面平整有光澤，關(guān)節(jié)周圍未見骨贅；b：PBS 組可見關(guān)節(jié)面軟骨出現(xiàn)較小裂紋，關(guān)節(jié)面局部泛紅；c：AOPPs 組關(guān)節(jié)面負(fù)重區(qū)可見明顯缺損，關(guān)節(jié)色澤變暗，周圍可見骨贅形成；d：Sham 組可見軟骨表面光滑平整，基質(zhì)染色均勻，軟骨細(xì)胞形態(tài)以及分布正常；e：PBS 組軟骨表面出現(xiàn)裂隙，基質(zhì)染色均勻，軟骨細(xì)胞形態(tài)及分布正常；f：AOPPs 組可見軟骨出現(xiàn)較大范圍損傷，基質(zhì)染色稍淡，部分軟骨淺層部分軟骨細(xì)胞出現(xiàn)死亡Fig.1 Gross image and histological observation of cartilage of tibial plateau (Alcian blue and Picrosirius red staining × 200) a: In the Sham group, the articular surface of tibial plateau cartilage was smooth and shiny, with no osteophytes around the joints; b: In the PBS group, small cracks in the cartilage and osteophytes were visible around the joints; c: In the AOPPs group, conspicuous defects were observed in the weight-bearing area of the articular surface, accompanied by a darkening of joint coloration and the formation of surrounding osteophytes; d: In Sham group, cartilage surface was smooth and flat with uniform matrix staining, and cartilage morphology and distribution were normal; e: In PBS group, cartilage surface cracks were observed with uniform matrix staining, and cartilage morphology and distribution were normal; f: In AOPPs group, matrix staining was slightly weak, and some chondrocytes appeared in superficial layers of cartilage died

二、組織學(xué)切片番紅 O 染色結(jié)果

Sham 組可見軟骨表面光滑平整，基質(zhì)染色均勻，軟骨細(xì)胞形態(tài)以及分布正常；PBS 組軟骨表面出現(xiàn)裂隙，基質(zhì)染色均勻，軟骨細(xì)胞形態(tài)及分布正常；AOPPs 組可見軟骨出現(xiàn)較大范圍損傷，基質(zhì)染色稍淡，部分軟骨淺層部分軟骨細(xì)胞出現(xiàn)死亡(圖1d～f)。

三、micro-CT 掃描參數(shù)比較

脛骨平臺(tái)軟骨下骨的水平截面、冠狀截面 CT表現(xiàn)以及三維重建圖見圖2。

圖2 脛骨平臺(tái)軟骨下骨的水平截面、冠狀截面CT 表現(xiàn)以及三維重建圖a～c：脛骨平臺(tái)下軟骨下骨水平截面 CT 圖，可見 AOPPs 組中 Tb.N 較另外兩組減少，骨小梁連接稀疏；d～f：脛骨平臺(tái)下軟骨下骨的冠狀截面CT 圖，可見在冠狀面上AOPPs 組中亦出現(xiàn)了骨小梁稀疏的情況；g～i：脛骨平臺(tái)下軟骨下骨 CT三維重建圖，同樣可觀察到 AOPPs 組中骨小梁數(shù)目減少Fig.2 Horizontal plane and coronal plane CT images of subchondral bone of tibial plateau and observation of threedimensional reconstruction of subchondral bone a - c:CT chart of the horizontal section under the tibial plateau, showing that the number of trabecules in the AOPPs group decreased compared with the other two groups, and the trabecular connection was sparse; d - f: Coronal cross section CT of the subchondral bone of the tibial plateau, showing the sparse trabecules in the AOPPs group; g - i: 3D CT reconstruction of the subchondral bone in the tibial plateau, showing reduced trabecular bone in the AOPPs group

BV / TV：Sham 組與 PBS 液組 BV / TV 均較AOPPs 組高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜ 0.01) 。

Tb.N：Sham組Tb.N 較 AOPPs 組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜ 0.01)。而 PBS組Tb.N 雖較 AOPPs 組高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞ 0.05)。

Tb.Sp：Sham 組與 PBS組Tb.Sp 均低于 AOPPs組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (前者P＜ 0.01，后者P＜ 0.05) 。

Tb.Th：Sham組Tb.Th 高于 AOPPs 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜ 0.05)。PBS組Tb.Th 也高于 AOPPs組，但差異無統(tǒng)計(jì)意義 (P＞ 0.05)。

CD：Sham組CD 高于 AOPPs 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜ 0.05)。PBS組CD 也高于 AOPPs 組，但差異無統(tǒng)計(jì)意義 (P＞ 0.05)。

SMI：AOPPs 組的 SMI 值更接近 0，其骨小梁形狀更偏向于板狀，而 Sham 組與 PBS 組的 SMI 值在1.0～1.5，其骨小梁形狀并無明顯偏向。

四、BV / TV 與 Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp 及 CD 的相關(guān)性

骨小梁數(shù)目與 BV / TV 之間呈正相關(guān)關(guān)系 (R2=0.5275，P＜ 0.05)，兩者之間存在顯著的相關(guān)關(guān)系；Tb.Th 與 BV / TV 之間呈正相關(guān)關(guān)系 (R2= 0.2102，P＜ 0.05)，兩者之間存在顯著的相關(guān)關(guān)系；Tb.Sp 與BV / TV 之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系 (R2= 0.5491，P＜ 0.05)，兩者之間存在顯著的相關(guān)關(guān)系；CD 與 BV / TV 之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系 (R2= 0.4097，P＜ 0.05)，兩者之間存在顯著的相關(guān)關(guān)系。

圖3 各組之間脛骨平臺(tái)軟骨下骨 micro-CT 掃描參數(shù)的比較。*表示與 AOPPs 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜ 0.05)；**表示與 AOPPs 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜ 0.01)；SMI 為骨小梁結(jié)構(gòu)模型指數(shù)，數(shù)值取 0～3 之間，0 表示骨小梁呈板狀，3 表示骨小梁呈桿狀Fig.3 Comparison of Micro-CT scanning parameters among three groups.*Represented a statistically significant difference compared to AOPPs(P ＜ 0.05); **Indicated a significant difference compared to AOPPs (P ＜ 0.01); SMI was the index of trabecular structure (0 - 3), 0 represented trabecular plate and 3 represented trabecular rod

圖4 BV / TV 與骨小梁數(shù)目、Tb.Th、Tb.Sp 以及 CD 的相關(guān)性分析，R2 為決定系數(shù)，決定系數(shù)越大，自變量對(duì)因變量的解釋程度越高，自變量引起的變動(dòng)占總變動(dòng)的百分比越高；P ＜ 0.05 表示兩者存在顯著相關(guān)關(guān)系Fig.4 The correlation between bone fraction and trabecular number, trabecular thickness, trabecular separation and trabecular connection density separately.R2 was the coefficient of determination, the larger the coefficient of determination, the higher the interpretation degree of the dependent variable, the higher the percentage of the independent variable in the total change; P ＜ 0.05 indicated a significant correlation between the two

討 論

本研究在實(shí)驗(yàn)中觀察動(dòng)物大體標(biāo)本切片發(fā)現(xiàn)：PBS 組大體標(biāo)本以及軟骨切片均可以觀察到異于Sham 組的改變，如軟骨裂隙和軟骨色澤的改變，而在 AOPPs 組中觀察到較 PBS 組更為嚴(yán)重的軟骨退變，說明外源性 AOPPs 加速了骨關(guān)節(jié)炎軟骨的退變速度。

本研究的主要目的是通過 micro-CT 觀察外源性AOPPs 在骨關(guān)節(jié)炎早期進(jìn)程中對(duì)軟骨下骨骨重塑的影響，而描述軟骨下骨骨重塑最常用的 micro-CT 指標(biāo)分別是 BV / TV、Tb.Th、Tb.Sp、Tb.N、SMI 以及CD。除此之外，筆者還對(duì) micro-CT 掃描的軟骨下骨各截面圖片以及三維重建圖進(jìn)行了收集與觀察，從最直觀的角度來說明軟骨下骨的改變。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)無論是從水平面還是冠狀面觀察，AOPPs 組軟骨下骨的 Tb.N 明顯較另外兩組減少，且在三維重建圖中觀察到了相同的情況。這一現(xiàn)象初步證實(shí)了筆者的假設(shè)，即外源性 AOPPs 在兔骨關(guān)節(jié)炎早期病程中對(duì)軟骨下骨的骨重塑產(chǎn)生了影響。在進(jìn)一步對(duì)各組軟骨下骨相關(guān)掃描參數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中發(fā)現(xiàn)，Sham 組與 PBS 組的 BV / TV 較 AOPPs 組高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，Sham 組骨小梁數(shù)目較 AOPPs 組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這一結(jié)果說明了外源性 AOPPs加速了骨關(guān)節(jié)炎早期進(jìn)程中軟骨下骨的骨吸收過程。而軟骨下骨骨量以及骨小梁數(shù)目的減少又會(huì)導(dǎo)致軟骨下骨生物力學(xué)特性的改變，從而加速軟骨的退變。既往研究亦證實(shí) OA 早期關(guān)節(jié)軟骨退變之前，軟骨下骨已經(jīng)出現(xiàn)彈性模量減低、骨量減少的改變[20]。Tb.Sp 是指骨小梁之間的髓腔平均寬度，Sham組與 PBS 組的 Tb.Sp 均較 AOPPs 組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說明 Sham 組與 PBS 組的骨小梁排列較AOPPs 組更為致密緊湊，在外源性 AOPPs 干預(yù)下，軟骨下骨的骨小梁的排列出現(xiàn)了紊亂，出現(xiàn)了類似于骨質(zhì)疏松的改變。同時(shí) Sham 組的 Tb.Th 較 AOPPs高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而 PBS組Tb.Th 雖高于AOPPs 組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說明在骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)程中，骨小梁本身的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，即厚度減小。CD 同樣是 Sham 組與 PBS 組均高于 AOPPs，但只有 Sham 組與 AOPPs 組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明經(jīng) ACLT + MMx 造模的兔骨關(guān)節(jié)炎早期即出現(xiàn)了軟骨下骨骨小梁連接的斷裂，即軟骨下骨的微損傷。關(guān)于 SMI，其主要是在骨質(zhì)疏松的研究中被用到，本研究發(fā)現(xiàn) Sham 組與 PBS 組的 SMI 值趨于正常，而 AOPPs 組的 SMI 值則接近 0，顯示其骨小梁更趨向與板狀結(jié)構(gòu)。既往研究發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松患者的骨小梁形狀更接近于桿狀[21]，說明雖然 AOPPs 組的骨量及骨小梁數(shù)目減少，出現(xiàn)類似骨質(zhì)疏松的改變，但其本質(zhì)上又與骨質(zhì)疏松卻不盡相同。

上述 micro-CT 掃描參數(shù)在骨重塑的過程中并不是相互獨(dú)立的，筆者將其它參數(shù)指標(biāo)與最為主要的指標(biāo)即 BV / TV 進(jìn)行了相關(guān)分析，以探求哪些指標(biāo)與 BV / TV 的改變聯(lián)系最為緊密。最終結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp 以及 CD 與 BV / TV 都存在顯著的相關(guān)關(guān)系，且除了 Tb.Sp 以外，其余三項(xiàng)指標(biāo)均與BV / TV 相關(guān)性較高。其中 Tb.Sp 與 BV / TV 呈負(fù)相關(guān)，其余三項(xiàng)指標(biāo)與 BV / TV 均呈正相關(guān)。值得指出的是通過對(duì)決定系數(shù)R2的分析，發(fā)現(xiàn)在骨重塑的過程中，骨小梁數(shù)目 (R2= 0.5275)、Tb.Sp (R2= 0.5491)與 CD (R2= 0.4097) 可能是導(dǎo)致 BV / TV 改變的主要因素，Tb.Th 為次要因素。

綜上所述，本研究證實(shí)了在外源性 AOPPs 的干預(yù)下，兔骨關(guān)節(jié)炎早期病程中關(guān)節(jié)軟骨的退變和軟骨下骨的重吸收速度均有顯著加快，也從側(cè)面印證了 AOPPs 作為一種內(nèi)源性致病介質(zhì)，可能參與了骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生與發(fā)展。這一結(jié)論為骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制提供新方向，從而為臨床發(fā)展新的疾病干預(yù)方式打下理論基礎(chǔ)。同時(shí)，為研究蛋白質(zhì)修飾產(chǎn)物在骨關(guān)節(jié)炎中的致病機(jī)制提供新線索和新視角。