眭玉珍,陳桂珍,左守軍,汪海東,宋鵬濤,栗亮亮,張龍現(xiàn),董海聚,劉 芳

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,鄭州 450046)

近年來,由于老齡化程度加深及疫情影響,人們對犬貓等伴侶動物的情感需求越來越強(qiáng)烈[1]。據(jù)《2021年中國寵物行業(yè)白皮書》統(tǒng)計(jì),2021年,中國城鎮(zhèn)家庭寵物犬、貓的數(shù)量達(dá)到了11 235萬只,其中寵物貓(5 806萬只)的數(shù)量已經(jīng)超過了寵物犬(5 429萬只)且仍在快速上升,如此龐大的寵物貓數(shù)量將會給公共衛(wèi)生安全帶來巨大隱患[2]。由于可感染貓的某些病原體具有人獸共患風(fēng)險(xiǎn),寵物貓一旦感染可能會對寵物主人的健康和生活環(huán)境的公共衛(wèi)生安全造成威脅[3]。

華支睪吸蟲(Clonorchissinensis)是當(dāng)前我國最重要的食源性人獸共患寄生蟲之一,主要寄生于犬、貓等常見終末宿主的肝膽管及膽囊中,常造成各種肝、膽疾病[4]。貓感染華支睪吸蟲的主要途徑是食入生或半生的含有華支睪吸蟲囊蚴的淡水魚蝦,囊蚴進(jìn)入其體內(nèi)發(fā)育為成蟲后產(chǎn)出蟲卵,蟲卵隨糞便不斷向環(huán)境中排出,造成中間宿主螺和魚的感染,增加人等終末宿主感染華支睪吸蟲的風(fēng)險(xiǎn)[5-6]。

既往研究表明華支睪吸蟲感染與宿主的飲食習(xí)慣、生活環(huán)境有關(guān)[7],因此了解寵物貓華支睪吸蟲感染的臨床表現(xiàn)、流行病學(xué)特征和相關(guān)影響因素對于制定有效的防治策略至關(guān)重要。然而,我國中部地區(qū)寵物貓華支睪吸蟲病相關(guān)的流行病學(xué)信息相對較少。本研究于2021年9月—2022年4月對在河南省11個(gè)地區(qū)采集的898份糞便樣品進(jìn)行處理以及腸道寄生蟲顯微鏡檢查,并利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,為寵物貓華支睪吸蟲病的感染控制和健康宣傳教育提供科學(xué)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品的收集

2021年9月—2022年4月,在河南省安陽市(22份)、鄭州市(490份)、焦作市(81份)、開封市(7份)、洛陽市(22份)、漯河市(90份)、平頂山市(15份)、商丘市(82份)、新鄉(xiāng)市(15份)、許昌市(7份)和周口市(67份)的寵物醫(yī)院、寵物店共采集寵物貓糞便樣品898份(圖1),每份為10～20 g。經(jīng)過寵物主人同意使用問卷或醫(yī)療記錄獲取樣品信息,包括性別、年齡、免疫情況(貓三聯(lián)、妙三多疫苗、狂犬疫苗)、驅(qū)蟲情況(大寵愛、拜寵清)和臨床癥狀等。

樣品保存:將樣品分為3份置于4 ℃冰箱,分別用于后續(xù)的形態(tài)學(xué)檢查、分子生物學(xué)檢測(本文不涉及這些數(shù)據(jù))和保存留樣(2.5% 重鉻酸鉀溶液)。

1.2 主要器材

架盤藥物天平(HC-TP11-5),上海精科儀器廠生產(chǎn);生物顯微鏡(編號20023503、20070556、20070557),鄭州遠(yuǎn)中科技有限公司;低速大容量離心機(jī)(TDL-5-A),上海安亭科技儀器廠。蔗糖,購自廣西來賓東糖鳳凰有限公司;氯化碘,購自天津市瑞金特化學(xué)品有限公司;重鉻酸鉀,購自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 離心沉淀法 取5 g糞樣放入小燒杯,加入5倍體積蒸餾水稀釋,經(jīng)40目篩網(wǎng)過濾至50 mL離心管中,3 500 r·min-1離心5 min,取沉淀進(jìn)行顯微鏡檢查。

1.3.2 盧戈氏碘液染色法 取適量糞樣沉淀涂抹于載玻片上,加入1～2滴盧戈氏碘液,混勻后鏡檢。

1.3.3 飽和蔗糖漂浮法 取3 g糞便樣品至50 mL離心管中,加入30 mL飽和蔗糖溶液,混勻后3 500 r·min-1離心10 min,用鐵絲吊環(huán)蘸取離心管表層漂浮物進(jìn)行鏡檢。

1.4 寄生蟲感染鑒定

華支睪吸蟲蟲卵:芝麻狀,形似燈泡,深褐色,上端稍窄且有卵蓋,稍隆起,蓋周圍卵殼增厚形成肩峰,卵后端大而圓,有一似結(jié)節(jié)狀突起。大小為(27.0～35.0)μm×(12.0～20.0)μm。

鉤口線蟲蟲卵:呈橢圓形,卵殼壁光滑,含有4到8個(gè)葡萄樣簇細(xì)胞(桑椹胎)。大小為(52.0～79.0)μm×(28.0～58.0)μm。

賈第蟲包囊:卵圓形,壁較厚,囊壁與囊內(nèi)結(jié)構(gòu)之間存在明顯的間隙。包囊大小為(9～13)μm×(7.5～9)μm。成熟包囊內(nèi)有4個(gè)核,不成熟包囊內(nèi)多含兩個(gè)核,囊內(nèi)可見軸柱、鞭毛、絲狀物等結(jié)構(gòu)。

蛔蟲卵囊:蟲卵呈亞球形,大小為(75.0～85.0)μm×(65.0～75.0)μm,黃褐色,卵殼厚,表面有許多點(diǎn)狀凹陷。

球蟲卵囊:寬卵圓形,卵壁兩層,光滑,無色,無微孔,大小為(38.0～51.0)μm×(27.0～29.0)μm,內(nèi)含原生質(zhì)球。

芽囊原蟲包囊:形態(tài)多種多樣,包括空泡型、顆粒型、阿米巴型、復(fù)分裂型、包囊型、多泡型和無泡型等多種形態(tài)?？张菪褪切迈r糞便和體外培養(yǎng)時(shí)最常見的一種蟲體,形狀為圓形或卵圓形,平均大小4～15 μm,中央有透亮空泡,細(xì)胞質(zhì)在中心體周圍包含細(xì)胞核和其他細(xì)胞器,呈環(huán)狀或月牙形。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS(version 20.0, Chicago, Illinois)軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。若P<0.01,則表示差異極顯著;若0.010.05,為差異不顯著。

2 結(jié) 果

2.1 寵物貓華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲總體感染情況

在898份樣品中,95份存在腸道寄生蟲感染,總感染率為10.58%。所有陽性樣品中共檢測到6種腸道寄生蟲,其中球蟲(49.47%)和華支睪吸蟲(29.47%)為優(yōu)勢蟲種;賈第蟲和蛔蟲感染率最低,均為3.16%。顯微鏡檢查結(jié)果見圖2。

A. 華支睪吸蟲蟲卵;B. 鉤口線蟲蟲卵;C. 賈第蟲包囊;D. 蛔蟲卵囊;E. 球蟲卵囊;F. 芽囊原蟲包囊A. C. sinensis egg; B. Hookworm egg; C. Giardia cyst; D. Ascaris egg; E. Coccidian oocyst; F. Blastocystis cyst圖2 寵物貓腸道寄生蟲蟲卵、卵囊和包囊形態(tài)Fig.2 Intestinal parasite eggs, oocysts, and cysts of pet cats

本研究中89.29%(25/28)的華支睪吸蟲感染病例為單一感染,10.71%(3/28)的感染病例與一種或兩種其他寄生蟲混合感染,感染情況見表1。

表1 寵物貓華支睪吸蟲感染情況Table 1 C. sinensis infection in pet cats

2.2 不同地區(qū)寵物貓華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲感染情況

河南省11個(gè)地區(qū)中有3個(gè)地區(qū)檢出華支睪吸蟲且主要集中在鄭州和焦作地區(qū),其感染率分別為85.71%(24/28)和10.71%(3/28)。11個(gè)地區(qū)中除商丘市外,均檢測出腸道寄生蟲,其中焦作地區(qū)感染率最高,為17.28%(14/81),其次是鄭州地區(qū),為12.24%(60/490)。綜上,各地區(qū)間寵物貓腸道寄生蟲的總感染率存在極顯著差異(P<0.01),具體感染情況見表2。

表2 不同地區(qū)寵物貓華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲感染情況Table 2 C. sinensis and other intestinal parasites infections of pet cats in different regions

2.3 不同年齡和性別的寵物貓華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲感染情況

所有樣品中共檢出華支睪吸蟲陽性28份,其中6月齡及以下組和12月齡及以上組的陽性樣品占比分別為57.14%(16/28)和42.86%(12/28),6～12月齡組未檢出華支睪吸蟲。各年齡段間寵物貓華支睪吸蟲感染率存在極顯著差異(P<0.001;表3)。

表3 不同年齡、性別、免疫、驅(qū)蟲及腹瀉情況的寵物貓華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲陽性個(gè)體分布情況Table 3 Distribution of positive individuals for C. sinensis and other intestinal parasites by age, sex, immunization, deworming and diarrhea of pet cats %

6月齡及以下的寵物貓檢出率最高的蟲種為華支睪吸蟲(7.41%,16/216)和球蟲(7.41%,16/216);6～12月齡、12月齡及以上的寵物貓檢出率最高的蟲種均為球蟲,感染率分別為6.58%(5/76)和4.29%(26/606),各年齡段間寵物貓腸道寄生蟲感染率存在顯著差異(P<0.05;表3)。

在28份華支睪吸蟲陽性樣品中,雄性組與雌性組的占比分別為71.43%(20/28)和28.57%(8/28)。在所有樣品中,雄性組和雌性組華支睪吸蟲的感染率分別為4.02%(20/497)和2.00%(8/401)。不同性別組間寵物貓華支睪吸蟲感染率差異不顯著(P>0.05;表3)。

在雄性組和雌性組中檢出率最高的蟲種均為球蟲,其中雄性組感染率略高于雌性組,分別為5.43%(27/497)和4.99%(20/401)。不同性別組間寵物貓腸道寄生蟲感染率差異不顯著(P>0.05;表3)。

2.4 不同驅(qū)蟲和免疫情況下寵物貓華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲感染情況

在28份華支睪吸蟲陽性樣品中,已驅(qū)蟲組和未驅(qū)蟲組占比分別為3.57%(1/28)和96.43%(27/28);在所有樣品中,已驅(qū)蟲組和未驅(qū)蟲組寵物貓華支睪吸蟲感染率分別為0.17%(1/599)和9.03%(27/299)。不同驅(qū)蟲情況組間寵物貓華支睪吸蟲感染率存在極顯著差異(P<0.001;表3)。

在已驅(qū)蟲組中檢出率最高的腸道寄生蟲為球蟲(5.34%,32/599);未驅(qū)蟲組中檢出率最高的腸道寄生蟲為華支睪吸蟲(9.03%,27/299)?；紫x和華支睪吸蟲在未驅(qū)蟲組中的感染率顯著高于已驅(qū)蟲組(P<0.05;表3)。綜上,不同驅(qū)蟲情況組間寵物貓腸道寄生蟲感染率存在極顯著差異(P<0.01;表3)。

在28份華支睪吸蟲陽性樣品中,未免疫組和已免疫組占比分別為92.86%(26/28)和7.14%(2/28)。在所有樣品中,未免疫組和已免疫組寵物貓華支睪吸蟲感染率分別為7.69%(26/338)和0.36%(2/560)。不同免疫情況組間寵物貓華支睪吸蟲感染率存在極顯著差異(P<0.01;表3)。

在已免疫組和未免疫組中檢出率最高的腸道寄生蟲分別為球蟲(4.82%,27/560)和華支睪吸蟲(7.69%,26/338)?；紫x、芽囊原蟲和華支睪吸蟲的感染率在不同免疫情況組間存在顯著差異(P<0.05;表3),未免疫組寵物貓感染率明顯高于已免疫組。綜上,不同免疫情況組間寵物貓腸道寄生蟲感染率存在極顯著差異(P<0.01;表3)。

2.5 不同臨床表現(xiàn)的寵物貓華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲感染情況

在95份寄生蟲陽性樣品中,有癥狀組占比為48.42%(46/95);無癥狀組占比為51.58%(49/95)。

在有癥狀組中,主要癥狀為腹瀉和消瘦,其中腹瀉和消瘦病例在寄生蟲陽性病例中占比分別為54.35%(25/46)和47.83%(22/46),詳見表4。68.00%(17/25)的華支睪吸蟲單一感染病例及其與其他寄生蟲混合感染的3個(gè)病例中均未出現(xiàn)腹瀉癥狀(表1)。

表4 寵物貓感染華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲的臨床表現(xiàn)情況Table 4 Clinical manifestations of C. sinensis and other intestinal parasites in pet cats

在28份華支睪吸蟲陽性樣品中,腹瀉與未腹瀉病例占比分別為28.57%(8/28)和71.43%(20/28);在所有樣品中,腹瀉與未腹瀉病例的華支睪吸蟲感染率分別為6.90%(8/116)和2.56%(20/782),感染華支睪吸蟲的寵物貓更易表現(xiàn)腹瀉癥狀(P=0.012;表3)。

腹瀉病例樣品中檢出率最高的腸道寄生蟲為球蟲(6.90%,8/116)與華支睪吸蟲(6.90%,8/116);在未出現(xiàn)腹瀉的病例中,檢出率最高的腸道寄生蟲為球蟲(4.99%,39/782)。鉤口線蟲、芽囊原蟲和華支睪吸蟲的感染率在兩個(gè)組間存在極顯著差異(P<0.01;表3),出現(xiàn)腹瀉癥狀的寵物貓感染率明顯高于未腹瀉組,不同腹瀉情況組間寵物貓腸道寄生蟲感染率存在顯著差異(P<0.01;表3)。

在22份存在消瘦癥狀的寵物貓糞便樣品中,77.27%(17/22)為華支睪吸蟲陽性,22.73%(5/22)為其他寄生蟲感染,包括蛔蟲(13.64%;3/22)、鉤口線蟲(9.09%;2/22)和球蟲(4.55%;1/22),相比而言,感染華支睪吸蟲的寵物貓更易出現(xiàn)消瘦癥狀(P<0.01;表4,其中存在1份蛔蟲和華支睪吸蟲共同感染的消瘦癥狀樣品)。

3 討 論

本次調(diào)查通過對河南省11個(gè)地區(qū)采集的898份寵物貓糞便樣品進(jìn)行顯微鏡檢查,共發(fā)現(xiàn)包含華支睪吸蟲在內(nèi)的6種腸道寄生蟲,以球蟲和華支睪吸蟲感染為主,且存在混合感染,總感染率為10.58%(95/898),與莫斯科[8](10.47%)的感染率基本一致,低于澳大利亞[9](18.40%)和意大利[10](22.90%)的感染率;華支睪吸蟲的感染率為3.12%(28/898)遠(yuǎn)低于廣東[11](41.8%)和南寧[12](64.76%)的感染率。這可能與當(dāng)?shù)氐臍夂?、地理位置以及寵物貓的飼喂?xí)慣有關(guān),河南省大部分地區(qū)位于中國北方,冬季寒冷且漫長,本次采樣時(shí)間集中于冬、春季節(jié),寒冷的氣候不利于寄生蟲的繁殖。同時(shí),北方地區(qū)降雨較少不利于淡水魚養(yǎng)殖,當(dāng)?shù)厝撕苌儆薪o寵物貓飼喂生魚蝦的習(xí)慣[13]。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn),6月齡及以下的寵物貓華支睪吸蟲感染率顯著高于6月齡以上的寵物貓。除鉤口線蟲外,其他腸道寄生蟲的感染率也出現(xiàn)幼貓高于成年貓的類似現(xiàn)象。幼貓免疫系統(tǒng)不完善,自身抵抗力弱可能是導(dǎo)致高感染率的主要原因[14]。另外,寵物貓的性別對腸道寄生蟲感染率影響不顯著,這與先前王玉桂等[15]的報(bào)道相一致。

本次調(diào)查中已驅(qū)蟲組檢出率最高的腸道寄生蟲為球蟲,且在驅(qū)蟲組和未驅(qū)蟲組之間球蟲感染率不存在差異性,這可能與寵物臨床上所用的預(yù)防性驅(qū)蟲藥對球蟲無效有關(guān),通常在動物出現(xiàn)球蟲感染的臨床癥狀或在糞便檢查發(fā)現(xiàn)球蟲感染時(shí)才會使用治療球蟲的藥物。未驅(qū)蟲、未免疫的寵物貓華支睪吸蟲和蛔蟲的感染率均顯著高于已驅(qū)蟲、已免疫的寵物貓,這與預(yù)防性驅(qū)蟲有很大關(guān)系。同時(shí),疫苗免疫接種讓寵物貓有足夠的自身抵抗力抵抗感染[16]。然而,本研究中芽囊原蟲的感染率在已驅(qū)蟲、已免疫的寵物貓中相對更高,并且已免疫寵物貓的感染率顯著高于未免疫的寵物貓,通過對芽囊原蟲陽性樣本分析發(fā)現(xiàn)7份陽性樣品中5份均來自鄭州市同一家寵物店,且樣品均采集于免疫接種一周內(nèi)的寵物貓。因此,芽囊原蟲感染率較高可能與飼養(yǎng)環(huán)境差、疫苗免疫初期機(jī)體免疫反應(yīng)大,對芽囊原蟲的抵抗力暫時(shí)下降有關(guān)[17]。但從總體上看,已驅(qū)蟲、已免疫的寵物貓腸道寄生蟲總感染率遠(yuǎn)低于未驅(qū)蟲、未免疫的寵物貓,表明驅(qū)蟲及免疫工作仍需得到重視。

本研究中感染華支睪吸蟲、鉤口線蟲和芽囊原蟲的寵物貓發(fā)生腹瀉的可能性較大,這與先前報(bào)道的結(jié)果一致[18-20]。據(jù)先前報(bào)道,感染華支睪吸蟲后除出現(xiàn)腹瀉外還可能會出現(xiàn)疲勞、消瘦、貧血、腹痛等癥狀,與本試驗(yàn)中感染華支睪吸蟲的貓出現(xiàn)消瘦癥狀相符合[21]。

綜上,河南省寵物貓華支睪吸蟲的感染率相對較低,但6月齡及以下、未驅(qū)蟲、未免疫、腹瀉的寵物貓華支睪吸蟲感染率更高,且感染華支睪吸蟲的寵物貓明顯消瘦;寵物貓的腸道寄生蟲感染率與年齡、免疫情況及驅(qū)蟲情況存在顯著相關(guān)性。提示在臨床實(shí)踐中,當(dāng)未成年貓出現(xiàn)腹瀉、消瘦等癥狀時(shí)應(yīng)考慮存在腸道寄生蟲感染的可能性,即使一直對其寵物貓進(jìn)行預(yù)防性驅(qū)蟲,也應(yīng)該進(jìn)行糞便檢查,以排除其他寄生蟲存在的可能性。也提示人們應(yīng)重視幼貓的科學(xué)飼養(yǎng),定期進(jìn)行免疫和驅(qū)蟲,提高幼貓自身抵抗力,以降低寵物貓感染寄生蟲的風(fēng)險(xiǎn)及人獸共患寄生蟲所引起的公共衛(wèi)生安全隱患。本研究豐富了河南地區(qū)華支睪吸蟲及其他腸道寄生蟲感染的流行病學(xué)資料,為其科學(xué)防控提供了重要依據(jù),但由于疫情等因素的影響,本研究中的樣品采集點(diǎn)未完全分布于河南省的各個(gè)地區(qū),后期將對相關(guān)地區(qū)的情況進(jìn)行進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本研究共檢出6種腸道寄生蟲,總感染率為10.58%,以華支睪吸蟲和球蟲為主。河南省6月齡及以下、未驅(qū)蟲、未免疫、腹瀉和消瘦的寵物貓應(yīng)重點(diǎn)防控人獸共患華支睪吸蟲的感染。提示河南省應(yīng)重視幼貓的科學(xué)飼養(yǎng),做好定期免疫和驅(qū)蟲,提高幼貓自身抵抗力,降低感染寄生蟲的風(fēng)險(xiǎn),減少人獸共患寄生蟲所引起的公共衛(wèi)生安全隱患。