陳慶，張妮，胡曉琴，張欣，謝秀英

1.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西西安 710004；2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安710004

關(guān)鍵字：重組人干擾素α2a；人乳頭瘤病毒；炎性因子；化學(xué)發(fā)光法；宮頸黏液

宮頸人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是女性常見(jiàn)婦科疾病，HPV 持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生的主要因素［1］。宮頸炎性反應(yīng)可引起生殖道上皮變薄，降低其屏障保護(hù)作用，進(jìn)一步促進(jìn)HPV 感染［2］。維持宮頸局部正常免疫微環(huán)境對(duì)于機(jī)體清除或阻斷HPV 持續(xù)感染十分重要。因此，積極治療宮頸HPV 感染及炎性反應(yīng)對(duì)于預(yù)防宮頸癌的發(fā)生具有重要意義。

重組人干擾素α2a（recombinant human interferon α2a，rhIFNα2a）栓是一種抗病毒栓劑，近年來(lái)，常被用于治療宮頸HPV感染。此外，有研究表明，rhIFNα2a還具有抗腫瘤、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用［3］。前期研究發(fā)現(xiàn)，rhIFNα2a 栓治療宮頸HPV 感染具有較好的臨床療效，但目前對(duì)于其抗HPV感染的機(jī)制尚不明確。因此，本研究通過(guò)觀察rhIFNα2a 栓治療對(duì)宮頸HPV感染患者宮頸黏液中炎性相關(guān)因子的影響，從免疫調(diào)節(jié)角度探討rhIFNα2a栓的抗HPV作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 選取2022 年3—8 月西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院門(mén)診收治的60例宮頸HPV感染陽(yáng)性患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①30 ～60 歲有性生活史的女性患者；②HPV 高危型檢測(cè)為陽(yáng)性；③經(jīng)薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)（thin-cytologic test，TCT）或病理檢測(cè)未見(jiàn)上皮內(nèi)瘤變或癌細(xì)胞；④心、肝、腎功能及凝血功能正常；⑤無(wú)免疫系統(tǒng)及重大系統(tǒng)性疾?。虎? 個(gè)月內(nèi)無(wú)抗HPV藥物治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①處于妊娠期、哺乳期、產(chǎn)后3個(gè)月內(nèi)；②伴有生殖道惡性腫瘤；③嚴(yán)重肝腎功能不全；④對(duì)本研究所用藥物過(guò)敏。按隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對(duì)照組，每組30 例。兩組基線資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。本研究經(jīng)西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2021009），所有患者及家屬均簽署知情同意書(shū)。

表1 兩組患者基線資料比較（x±s，n=30）Tab.1 Comparison of baseline data between patients of two groups（x±s，n=30）

1.2主要試劑及儀器 重組人干擾素α2a栓（國(guó)藥準(zhǔn)字S19991019，規(guī)格50萬(wàn)IU／枚）由長(zhǎng)春生物制品研究所有限責(zé)任公司提供；化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒、IMMULITE 1000全自動(dòng)免疫分析儀購(gòu)自西門(mén)子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品（上海）有限公司。

1.3治療方法 觀察組患者在月經(jīng)干凈3 d 后，睡前將rhIFNα2a 栓置陰道深部，1 粒／次，隔日1 次，1 個(gè)月連用10 次為1 個(gè)療程，連續(xù)3 個(gè)療程。對(duì)照組不使用藥物。

1.4宮頸分泌物采集 用窺陰器充分暴露患者宮頸，將取樣器觸及宮頸管，直至遇到阻力（5 ～6 mm），旋轉(zhuǎn)2 ～4 圈后緩慢退出，置裝有保存液的試管中，2 ～8 ℃保存。

1.5炎性因子檢測(cè) 將樣本15 000×g離心10 min，分離上清液，用IMMULITE 1000全自動(dòng)免疫分析儀，采用化學(xué)發(fā)光法分別檢測(cè)IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8、IL-10及腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量，具體操作按化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

治療前，觀察組與對(duì)照組患者宮頸黏液中炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；治療后，觀察組與對(duì)照組比較，IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者治療前后炎性因子水平比較（pg／mL，x ± s，n=30）Tab.2 Comparison of levels of inflammatory factors before and after treatment between patients of two groups（pg／mL，x ± s，n=30）

兩組患者治療前后自身相比較顯示，觀察組治療后與治療前相比，IL-1β、IL-6、IL-8 及TNF-α 水平均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）；對(duì)照組治療后與治療前相比，各炎性因子水平雖出現(xiàn)輕度降低，但僅IL-8水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而IL-1β、IL-6 及TNF-α 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。此外，由于兩組患者IL-2R 及IL-10水平除個(gè)別患者外基本在檢測(cè)限以下，因此未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

3 討論

近年來(lái)，宮頸高危型HPV 感染已成為女性常見(jiàn)的一類生殖系統(tǒng)疾病。最常見(jiàn)的高危型HPV主要包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35 等。高危型HPV 感染常常會(huì)導(dǎo)致宮頸出現(xiàn)癌前病變，甚至有可能發(fā)展為宮頸癌，給女性生命及健康帶來(lái)威脅。據(jù)報(bào)道，約15%宮頸高危型HPV 持續(xù)感染患者可能在2 年內(nèi)進(jìn)展為宮頸上皮內(nèi)瘤變，甚至可能進(jìn)一步發(fā)展為宮頸癌［4］。HPV 具有雙鏈閉合DNA 結(jié)構(gòu)，可長(zhǎng)期潛伏在人體內(nèi)，潛伏期的HPV 以游離基因及質(zhì)粒方式存在。在免疫力較低情況下，可導(dǎo)致宮頸病變組織及黏膜發(fā)生感染。此外，HPV 感染具有復(fù)發(fā)率高、難以治愈等特征，可對(duì)患者生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響［5］。

慢性炎癥是HPV 感染后微環(huán)境的主要特征，據(jù)報(bào)道，宮頸HPV感染患者常伴有陰道炎及宮頸炎［2，6］。事實(shí)上，初始感染時(shí)的炎性反應(yīng)通過(guò)募集先天性免疫細(xì)胞及啟動(dòng)獲得性免疫反應(yīng)來(lái)有助于清除HPV及病毒感染細(xì)胞［7］。HPV有多種方法來(lái)逃避免疫監(jiān)視，且游離HPV 的缺失可能導(dǎo)致早期蛋白E2表達(dá)下調(diào)，加速整合了高表達(dá)E6和E7病毒基因組的細(xì)胞選擇［8］。除致癌功能外，這些HPV 癌蛋白也已被確定為慢性炎癥發(fā)生的主要原因。HPV 癌蛋白可導(dǎo)致各種促炎介質(zhì)（如細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子和特定類型的miRNAs）產(chǎn)生。這些因子的上調(diào)進(jìn)一步增加了病毒感染后炎癥的發(fā)生率及隨后腫瘤的進(jìn)展。研究報(bào)道，HPV 感染可引起炎性相關(guān)因子水平改變［9］，血清中IL-6 水平升高與宮頸癌患者不良預(yù)后相關(guān)，已被認(rèn)為是宮頸癌患者預(yù)后的潛在指標(biāo)［2］。梁秀蘭等［10］通過(guò)Logistic回歸分析證實(shí)，炎性因子IL-2、IL-10 及TNF-α 是影響宮頸癌惡性病變程度的危險(xiǎn)因素。提示一些炎性因子水平的改變可能是HPV感染促進(jìn)宮頸病變的重要一環(huán)。

rhIFNα2a是一類由體細(xì)胞合成和分泌的高生物活性蛋白多肽，可通過(guò)結(jié)合病毒表面IFN受體抑制蛋白質(zhì)合成，進(jìn)而有效阻礙病毒復(fù)制，改善患者病情［11］。前期研究已經(jīng)證實(shí)，經(jīng)rhIFNα2a 栓治療可明顯提高宮頸高危型HPV感染者轉(zhuǎn)陰率，有效清除HPV 感染，具有較好的治療效果［12］。近來(lái)的研究表明，rhIFNα2a不僅能夠抗病毒，而且也具有免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用。IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α是參與炎性反應(yīng)的重要細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)活性。其中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8及TNF-α是促炎因子，而IL-10為抗炎因子。IL-1β 由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和滑膜細(xì)胞等產(chǎn)生，具有較強(qiáng)的促炎活性，并可誘導(dǎo)自身及TNF-α產(chǎn)生［13］。TNF-α 的主要作用是調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，使毛細(xì)血管通透性增加，出現(xiàn)微循環(huán)障礙，激活炎性系統(tǒng)，進(jìn)一步誘導(dǎo)其他炎性因子釋放；TNF-α 信號(hào)的不適當(dāng)或過(guò)度激活與慢性炎性有關(guān)，并最終導(dǎo)致病理性并發(fā)癥的發(fā)展，如自身免疫性疾病等［14］。IL-2R 是一種細(xì)胞膜上的受體，通過(guò)與IL-2 結(jié)合，參與免疫應(yīng)答過(guò)程［15］。IL-6 是炎性反應(yīng)的促發(fā)劑，能誘導(dǎo)B 細(xì)胞分化和產(chǎn)生抗體，并誘導(dǎo)T 細(xì)胞活化增殖、分化，參與機(jī)體免疫應(yīng)答［16］。這些炎性因子均參與人體生理調(diào)節(jié)，涉及炎癥、細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤發(fā)生發(fā)展等眾多過(guò)程。

有研究報(bào)道，高危型HPV 感染促進(jìn)宮頸慢性炎癥的進(jìn)展，導(dǎo)致炎性因子IL-1β、IL-4、IL-6 及IL-8 升高［17］，rhIFNα2a 栓治療可降低其血清中IL-1β、IL-6、超敏C 反應(yīng)蛋白（hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP）、TNF-α 等炎性因子水平［18-20］。本研究檢測(cè)了宮頸黏液中炎性因子水平，結(jié)果顯示，rhIFNα2a栓治療3 個(gè)月后，與對(duì)照組相比，觀察組患者宮頸黏液中炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；各自與治療前相比，觀察組患者宮頸黏液中IL-1β、IL-6、IL-8 及TNF-α水平均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），而對(duì)照組患者炎性因子水平出現(xiàn)輕微降低，僅IL-8 水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明rhIFNα2a 栓治療后宮頸局部炎性因子水平顯著下調(diào)，但具體機(jī)制尚不清楚，究竟是rhIFNα2a 清除病毒所致，還是與rhIFNα2a免疫調(diào)節(jié)相關(guān)，尚需進(jìn)一步研究。

綜上所述，rhIFNα2a 栓治療宮頸高危型HPV 感染可顯著降低宮頸局部炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平，為探索rhIFNα2a的作用機(jī)制提供了新思路。但本研究納入的病例數(shù)較少，且為單一中心研究，下一步將擴(kuò)大樣本數(shù)，開(kāi)展多中心的隨機(jī)對(duì)照研究。