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        飼料添加三黃散對(duì)白蕉海鱸生長(zhǎng)性能的影響

        2023-07-27 03:00:48淮亞紅劉妍郭艷峰唐光華
        水產(chǎn)養(yǎng)殖 2023年7期
        關(guān)鍵詞:鱸魚魚肉白細(xì)胞

        淮亞紅,劉妍*,郭艷峰,唐光華

        (1.中山火炬職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣東 中山 528436;2.中山市強(qiáng)晟水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司,廣東 中山 528467)

        海鱸(Lateolabrax japonicus)屬花鱸科(Lateolabracidae)花鱸屬(Lateolabrax),學(xué)名中國(guó)花鱸,是我國(guó)海水魚中產(chǎn)量第一的魚類,位居珠江流域四大名魚之首[1]。白蕉海鱸養(yǎng)殖起源于珠海市斗門區(qū)白蕉鎮(zhèn),當(dāng)?shù)叵痰}度保持在0.1%~0.5%[2],養(yǎng)殖出的海鱸魚體表皮光亮,背部青色,腹部白色,背肥肚圓,通體肉厚,肉質(zhì)美味嫩滑,深受消費(fèi)者青睞。白蕉海鱸魚主要采用傳統(tǒng)的池塘高密養(yǎng)殖模式[3-4],容易導(dǎo)致水體環(huán)境惡化和致病菌增加[5],在很大程度上增加了白蕉海鱸患病的風(fēng)險(xiǎn)。

        水產(chǎn)品的藥物殘留日益受到消費(fèi)者關(guān)注,為了降低藥物殘留,不易產(chǎn)生抗藥性和毒副作用的中藥制劑,越來(lái)越受到水產(chǎn)養(yǎng)殖者的青睞[6]。三黃散作為國(guó)標(biāo)范圍內(nèi)的水產(chǎn)用藥,是由大黃、黃芩、黃柏和大青葉4 味藥材,經(jīng)粉碎制成,具有清熱解毒效果,其中大黃對(duì)嗜水氣單胞菌抗菌效果最佳[7]。在白蕉海鱸實(shí)際喂養(yǎng)過程中,三黃散的藥效與投喂階段關(guān)系密切。發(fā)病初期投喂三黃散效果最佳;發(fā)病嚴(yán)重后再投喂,則三黃散功效欠佳,需配合抗生素等藥物?,F(xiàn)開展飼料中三黃散不同添加量,對(duì)白蕉海鱸營(yíng)養(yǎng)成分和非特異性免疫力的影響試驗(yàn),擬為三黃散的精細(xì)化使用及其他中藥制劑的科學(xué)投喂,提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 時(shí)間與地點(diǎn)

        2020 年1 月—2022 年12 月。試驗(yàn)地點(diǎn)位于中山市坦洲鎮(zhèn)海鱸養(yǎng)殖基地。

        1.2 材料

        選擇健康的白蕉海鱸120 尾,體質(zhì)量600~700 g。

        1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

        中藥制劑三黃散(獸藥字16274 號(hào)),規(guī)格250 g/袋。設(shè)置3 個(gè)試驗(yàn)組(A、B、C),分別在基礎(chǔ)飼料中添加1.0%(A)、1.2%(B)、1.6%(C)三黃散。以不添加三黃散的基礎(chǔ)飼料組為空白對(duì)照組(D),試驗(yàn)組和對(duì)照組各設(shè)3 個(gè)平行,每個(gè)平行為10 尾魚。

        1.4 儀器

        TA.newplus 質(zhì)構(gòu)儀(上海瑞玢智能科技有限公司);SYSMEXKX-1 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(日本Sysmex 公司);GCMS-QP2020[島津企業(yè)管理(中國(guó))有限公司];L-8900 氨基酸分析儀[日立分析儀器(上海)有限公司];Agilent 1260Ⅱ(安捷倫科技公司)。

        1.5 試驗(yàn)方法

        1.5.1 魚肉樣品的處理

        參照李樂[8]的方法取得樣品。將樣品放進(jìn)密封袋,并置于-20℃的冰箱中保存。檢測(cè)時(shí),需自然解凍,測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo),所有分析均取3 個(gè)平行樣,每個(gè)平行10 條。

        1.5.2 脾臟體指數(shù)

        參照劉青等[9]的方法,取脾臟并稱其質(zhì)量。脾臟體指數(shù)=(脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量)×100%。

        1.5.3 肝臟體指數(shù)

        檢測(cè)方法與脾臟體指數(shù)檢測(cè)方法相同。肝臟體指數(shù)=(肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量)×100%。

        1.5.4 血液的采集與檢測(cè)

        血液采集方法根據(jù)文獻(xiàn)[10-12]。全血細(xì)胞指標(biāo):白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞百分比(LYM)、紅細(xì)胞(RBC)、中性粒細(xì)胞百分比(NEU)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、紅細(xì)胞比容(HCT)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW),采用血液檢測(cè)儀完成檢測(cè)。血清指標(biāo)主要檢測(cè)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)。

        1.5.5 白細(xì)胞吞噬能力測(cè)定

        用1 mL 無(wú)菌注射器,于試驗(yàn)魚的心臟采血,置于抗凝血液采集管中。取100 μL 的抗凝血于玻片上,加入10 μL 墨汁涂均勻后,在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h,于10×物鏡顯微鏡下,觀察并統(tǒng)計(jì)白細(xì)胞的吞噬數(shù)量,計(jì)算吞噬率百分比。白細(xì)胞吞噬百分比(%)=(100 個(gè)白細(xì)胞中參與的白細(xì)胞數(shù)/100)×100%。

        1.5.6 營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的檢測(cè)

        蛋白質(zhì)的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》(GB 5009.5—2016)第一法;脂肪的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測(cè)定》(GB 5009.6—2016)第一法;碳水化合物的檢測(cè)參照《食品營(yíng)養(yǎng)成分基本術(shù)語(yǔ)》(GB/Z 21922—2008);水分的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定》(GB 5009.3—2016)第一法;灰分的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測(cè)定》(GB 5009.4—2016)第一法。

        1.5.7 質(zhì)構(gòu)的測(cè)定方法

        根據(jù)文獻(xiàn)[13]方法,測(cè)定魚肉的硬度、黏著性、彈性、凝聚性、咀嚼性。

        1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

        數(shù)據(jù)處理采用SPSS 27.0 軟件的單因素方差分析(One-Way ANOVA),用LSD 多重比較法進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn),結(jié)果以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤)表示。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 全血細(xì)胞指標(biāo)和血清指標(biāo)

        魚類全血細(xì)胞指標(biāo)可以反映魚體的健康狀況以及生存環(huán)境[14]。添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的全血指標(biāo)見表1。

        表1 添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的全血指標(biāo)

        由表1 可見,白蕉海鱸全血中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量及紅細(xì)胞比容、平均紅細(xì)胞體積隨著三黃散添加比例的增加而減少。平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞體積分布寬度及血小板計(jì)數(shù)隨著三黃散添加比例的增加而上升。

        天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)以心肌含量最豐富,其次是肝臟。當(dāng)肝細(xì)胞出現(xiàn)壞死時(shí),AST 從肝細(xì)胞中釋放出來(lái)導(dǎo)致血清中AST 增高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)同樣也存在于肝細(xì)胞漿內(nèi),肝細(xì)胞被破壞可導(dǎo)致血清ALT 增高。血清指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示(表2),D 組的白蕉海鱸,血清中AST 含量(174.73±54.32)U/L 與A 組的AST 含量沒有差異(P>0.05),當(dāng)三黃散添加量增加至1.2%和1.6%時(shí),血清中AST含量顯著降低(P<0.05)。喂養(yǎng)三黃散,可顯著降低血清中的ALT 含量(P<0.05),表明三黃散有利于提高魚肝臟的健康。

        表2 不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的血清指標(biāo)① U/L

        2.2 非特異性免疫指標(biāo)

        脾臟是重要的淋巴器官,可合成免疫物質(zhì),且能有效清除血液中的病菌及死細(xì)胞[15]。肝臟是魚體中大部分酶進(jìn)行代謝活動(dòng)的主要場(chǎng)所,承擔(dān)著重要的生物轉(zhuǎn)化作用[16-18]。脾臟體指數(shù)、肝臟體指數(shù)都是魚類非特異性免疫功能的重要指標(biāo)之一。

        D 組白蕉海鱸與A、B、C 組的白蕉海鱸在脾臟體指數(shù)和肝臟體指數(shù)上無(wú)差異(P>0.05),該結(jié)果與禹方曉等[14]的研究結(jié)果一致,表明三黃散飼喂對(duì)白蕉海鱸魚無(wú)害。在白細(xì)胞吞噬百分比(PP)方面,D 組與A 組白蕉海鱸的PP 值無(wú)差異(P>0.05),隨著飼料中三黃散添加量的增加,B 組和C 組的白蕉海鱸PP 值顯著高于D 組(P<0.05),表明在基礎(chǔ)飼料中添加一定比例的三黃散,可有效提高白蕉海鱸白細(xì)胞的吞噬活性。隨著B 組和C 組白蕉海鱸體質(zhì)量的增加,魚營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收均得到提高(表3)。

        表3 添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的非特異性免疫功能指標(biāo)①

        2.3 營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)和質(zhì)構(gòu)指標(biāo)

        添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸每100 g 魚肉主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)見表4。

        表4 添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸每100 g 魚肉的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)①

        由表4 可見,D 組的白蕉海鱸魚肉能量為(380.67±7.09)kJ、蛋白質(zhì)含量為(17.70±0.56)g、脂肪含量(1.43±0.06)g,B 組和C 組的三黃散喂養(yǎng)2 個(gè)月后,白蕉海鱸魚肉的能量、蛋白質(zhì)含量和脂肪含量均顯著增加(P<0.05)。D 組碳水化合物的含量則由(1.57±0.25)g 降低至1.43~1.10 g。D 組鈉含量為(26.917±0.780)mg,添加三黃散喂養(yǎng)后,升高至28.21~31.73 mg,其中C 組三黃散喂養(yǎng)的白蕉海鱸魚肉鈉含量最高(31.73±1.10)mg??傊珺 組和C 組的三黃散喂養(yǎng)對(duì)魚肉的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)有顯著影響,其中能量、蛋白質(zhì)含量、脂肪含量隨著三黃散添加比例的增加而增加,碳水化合物隨著三黃散添加比例增加,含量降低;鈉的含量隨著三黃散添加比例增加升高;水分含量隨著三黃散添加比例增加而降低。B 組和C 組的三黃散喂養(yǎng),對(duì)魚肉的灰分指標(biāo)影響差異不顯著。

        魚肉硬度是人體組織的觸覺,主要源于大量存在于魚肉肌纖維間隙結(jié)締組織中膠原蛋白含量,是魚肉保持形狀的內(nèi)部結(jié)合力,膠原蛋白含量低的肉質(zhì)硬度相對(duì)低。魚肉硬度還表現(xiàn)為人在咀嚼試樣組織時(shí)的質(zhì)感[19]。彈性指有外力作用時(shí),試樣變形情況及外力移除后試樣恢復(fù)原來(lái)的性能[19]。黏聚性是魚肉抵抗受損并緊密連接使其保持完整的性質(zhì)。不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸魚肉的質(zhì)構(gòu)指標(biāo)見表5。

        表5 不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸魚肉的質(zhì)構(gòu)指標(biāo)①

        隨著三黃散添加量的增加,魚肉的硬度和脆度逐漸增加。與D 組相比,C 組魚肉的硬度和脆度增加最為明顯(P<0.05)。三黃散喂養(yǎng)對(duì)魚肉彈性和黏聚性影響不顯著(P>0.05)。C 組的魚肉中咀嚼性顯著增加(P<0.05)。B 組和C 組的魚肉回復(fù)性顯著高于D 組和A 組(P<0.05)??傊?,不同添加比例三黃散飼喂,均對(duì)魚肉彈性和黏聚性無(wú)影響,C 組對(duì)魚肉硬度和脆度有顯著影響,B 組和C 組對(duì)魚肉回復(fù)性有顯著影響。

        3 討論

        白細(xì)胞能夠通過胞吞將侵入細(xì)胞內(nèi)的異物進(jìn)行吞噬,是衡量魚類非特異性免疫功能的重要指標(biāo)之一[11-20]。林旋等[11]用黃芪多糖飼料添加劑喂養(yǎng)羅非魚40 d,可不同程度地提高羅非魚血漿中白細(xì)胞的吞噬百分比和吞噬指數(shù),且胞吞噬能力與投喂的黃芪多糖有密切相關(guān)。邢玉娟等[21]在草魚的基礎(chǔ)飼料中添加了黃芪、甘草、板藍(lán)根、大青葉等組成的復(fù)合中草藥,結(jié)果顯示添加復(fù)合中草藥提高了草魚白細(xì)胞的吞噬能力。本試驗(yàn)中,B 組和C 組的三黃散添加量,均有效提高了白蕉海鱸的白細(xì)胞吞噬能力,且血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)含量低于D 組,表明三黃散對(duì)肝臟的保護(hù)作用明顯。

        同時(shí),三黃散可促進(jìn)白蕉海鱸魚體質(zhì)量的增加,提高蛋白質(zhì)含量、肉質(zhì)硬度、脆度和回復(fù)性,繼而提高白蕉海鱸的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、口感和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本試驗(yàn)再次驗(yàn)證了中草藥制劑對(duì)提高魚機(jī)體非特異免疫的效果,為白蕉海鱸精細(xì)化喂養(yǎng)和三黃散的投喂提供了理論依據(jù)。

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