朱莉莉 李巖

（1.河南科技大學(xué)附屬許昌市中心醫(yī)院健康管理中心，河南 許昌 461000；2.河南科技大學(xué)附屬許昌市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 許昌 461000）

腫瘤是機體細(xì)胞異常增生形成的一類疾病。結(jié)直腸癌作為一類較為常見的惡性腫瘤，近年來發(fā)病率和死亡率均呈現(xiàn)出明顯上升趨勢，而惡性腫瘤的早期篩查是發(fā)現(xiàn)和治療的重要手段[1]。

體檢作為人們篩查潛在疾病的一種常用手段，能夠提高認(rèn)門早期識別疾病風(fēng)險并進(jìn)行治療，但在常規(guī)體檢項目中，對腫瘤風(fēng)險篩查的項目較少。結(jié)腸鏡雖作為檢測結(jié)直腸癌的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但由于其侵入性操作使得其很少作為健康人群的篩查腫瘤的方式，而糞便隱血試驗由于方便自身的性狀以及容易受其余疾病影響大的特點也無法滿足早期結(jié)直腸癌的篩查。

YKL-40作為一種潛在的腫瘤標(biāo)志物，已有眾多研究證實了其在篩查結(jié)腸癌中的價值[2-3]。Septin9基因的結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系，能作為結(jié)直腸癌的特異性腫瘤標(biāo)志物[4]，因兩種檢測樣本僅需抽取體檢人群的外周靜脈血，無需健康體檢人群進(jìn)行其他有創(chuàng)操作使得其接受度較高，能夠?qū)⑵渥鳛榻】刁w檢人群篩查結(jié)直腸癌的體檢項目，無需健康體檢人群進(jìn)行其他有創(chuàng)操作使得其接受度較高。

為了進(jìn)一步研究兩種檢測方法在健康人群中的應(yīng)用價值，其本文將進(jìn)一步對在我院實施Septin9基因甲基化和血清YKL-40檢測的健康人群篩查結(jié)直腸癌的數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究由本院醫(yī)學(xué)倫理會批準(zhǔn)。選取2021年5月～2022年8月于本院健康管理中心行Septin9基因甲基化檢測的健康體檢人群462例為研究對象，其中男256例，女206例。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18～80歲。體檢人群均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已確診的腫瘤患者；②合并其他嚴(yán)重心、肺功能疾病的患者；③合并血液系統(tǒng)以及凝血功能的疾病。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

在早晨體檢人群空腹時用K2EDTA真空10 mL抗凝管（紫帽）和EDTA管分別采集外周靜脈血10 mL和4 mL。

1.2.2 Septin9基因甲基化檢測

將用K2EDTA管采集的10 mL血液標(biāo)本在2-8℃的條件下保存并在4 h內(nèi)進(jìn)行血漿制備，血漿制備采用離心機，以1350±150 g的相對離心力離心全血標(biāo)本12 min最終完成血漿分離，將離心后的血漿使用移液管轉(zhuǎn)移3.5 mL至另一全新離心管中，該血漿標(biāo)本于-15至-25℃的條件下保存，4 w內(nèi)完成檢驗。

嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行血漿樣本提取、DNA硫化處理、洗脫以及PCR反應(yīng)等步驟對血漿樣本進(jìn)行檢測，最后依據(jù)定量結(jié)果的Ct值進(jìn)行判斷，當(dāng)3次平行PCR反應(yīng)中2次結(jié)果Septin9基因Ct值＜45時判斷結(jié)果為陽性。本研究所用Septin9基因甲基化檢測試劑盒由上海羽哚生物科技有限公司生產(chǎn)的人Septin9基因甲基化DNA檢測試劑盒（PCR熒光法）。

1.2.3 血清YKL-40檢測

將用EDTA管采集到的4 mL血液標(biāo)本先靜置10 min，接著采用由上海昀冠機電設(shè)備有限公司生產(chǎn)的H/T12MM型血液離心機分離出血清，并將其先置于—70℃的條件下保存。接著用使用酶聯(lián)免疫吸附法實驗方法進(jìn)行血清YKL-40檢測并選擇河北柏世林科技公司生產(chǎn)的人YKL-40試劑盒，根據(jù)說明書步驟嚴(yán)格進(jìn)行操作，最后根據(jù)繪制出的吸光濃度以及標(biāo)準(zhǔn)品濃度繪制曲線并計算出兩者的回歸方程，最后算出血清YKL-40的檢測值，最后以131.27 μg·L-1為臨界值[5]，血清YKL-40值小于131.27 μg·L-1為陰性和血清YKL-40值大于131.27 μg·L-1為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）兩種方法檢出陽性率比較；（2）兩種方法與腸鏡結(jié)果符合率比較；（3）兩種檢測方法在不同年齡人群之中的差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

本研究所有數(shù)據(jù)均用SPSS19.0分析，計數(shù)資料百分?jǐn)?shù)（%）表示，卡方檢驗；計量資料（±s）表示，t檢驗，等級資料用秩和檢驗，P＜0.05時即差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢出陽性率比較

分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用顯示Septin9基因甲基化的陽性檢出率為14.07%（65/462例）大于YKL-40檢出率為9.09%（42/462例），Septin9基因甲基化的陽性檢出率優(yōu)于YKL-40陽性檢出率（P＜0.05)，見表1。

表1 兩種檢測方法在不同年齡人群中的篩查差異[n（%)]

表1 兩種方法檢出陽性率比較兩種檢測

2.2 兩種方法與腸鏡結(jié)果符合率比較

Septin9基因甲基化檢測65例陽性人群之中23例進(jìn)行腸鏡檢查，有13人顯示結(jié)果異常，其符合率為56.52%；CEA檢測42例陽性人群之中14例進(jìn)行腸鏡檢查，有3人顯示結(jié)果異常，其符合率為21.43%。Septin9基因甲基化檢測方法與腸鏡的符合率大于血清YKL-40檢測與腸鏡的符合率（P＜0.05)，見表2。

表2 兩種檢測與腸鏡符合率比較[n（%)]

2.3 兩種檢測方法的特異性和靈敏度比較

比較兩種檢測方法在不同年齡人群中的篩查差異。根據(jù)年齡將篩查人群分為低齡組（＜50歲）193人和高齡組（≥50歲）269人。Septin9檢測在高齡組的檢查率高于低齡組（P＜0.05)，而CEA檢測在不同年齡的篩查人群中差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，具有較高的死亡率[6]。因其早期無明顯癥狀，大多數(shù)患者僅表現(xiàn)出腹瀉、便秘以及排便時里急后重等非特異癥狀，所以只有極少部分患者會在早期確診，而早期診斷結(jié)直腸癌是有效改善其預(yù)后并降低死亡率的重要舉措。

體檢是對未病和將病的健康人群早期發(fā)現(xiàn)疾病線索和健康隱患的重要手段，對患者早期診斷疾病具有重要意義。

電子纖維腸鏡檢查雖然是結(jié)直腸癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但存在許多缺點：

① 要求受檢人群進(jìn)行長時間腸道準(zhǔn)備；

② 作為一項侵入性操作，對患者的身體具有較大的損傷；

③ 存在一定的局限性，有禁忌癥的人群并不能進(jìn)行此項檢查。

因此該檢查在人群中接受度較小，不能用于健康人群的體檢篩查。

Septin9基因甲基化作為結(jié)直腸癌的重要生物學(xué)特征且具有采樣方便、無創(chuàng)傷以及依從性好等特點，將其應(yīng)用于健康人群體檢項目作為早期篩查結(jié)直腸癌成為可能。Septin基因家族是能在胞質(zhì)分裂和細(xì)胞極化發(fā)揮重要作用且具有 GTP酶活性的基因家族[7]。

當(dāng)Septin9基因甲基化程度升高，基因表達(dá)將被抑制，導(dǎo)致編碼蛋白數(shù)量減少、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性減弱，最終促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生癌變[8]。外周血中Septin9基因發(fā)生的甲基化可以通過DNA的特異擴增而被檢測到。在多個經(jīng)腸鏡確診的結(jié)直腸癌病例和陰性對照的研究報道中，均表明在結(jié)直腸癌病人的血漿中通過檢測Septin9基因的甲基化可有效檢測到早期癌細(xì)胞的DNA。

因此，Septin9基因甲基化能夠作為篩查結(jié)直腸癌的重要指標(biāo)，在健康人群中的篩查具有重要意義。其優(yōu)勢之處在于：相比傳統(tǒng)檢查更為私密，接受度更高。采樣方便快捷且創(chuàng)傷小，只需采集一管外周血。

本研究發(fā)現(xiàn)Septin9基因甲基化對結(jié)直腸病變的陽性檢出率高于YKL-40陽性檢出率?？赡苁且驗椋簩Ρ仍诎Y狀較重時血清YKL-40水平才會有較大的差異大，Septin9作為大腸癌的特殊生物學(xué)標(biāo)記，在早期結(jié)直腸病變癥狀不顯著時其血液中的Septin9水平也會存在明顯不同。調(diào)查結(jié)果還顯示Septin9基因甲基化檢測結(jié)果與腸鏡檢查結(jié)果的符合率高于YKL-40檢測與腸鏡檢查的符合率。

文獻(xiàn)[9]報道Septin9基因甲基化改變在多數(shù)早期結(jié)直腸癌患者中就已發(fā)生，甚至存在于息肉、腺瘤等癌前病變階段，其陽性檢出率也會隨著結(jié)直腸癌分期的增加明顯升高，所以應(yīng)用S9基因甲基化檢測法能夠幫助健康群進(jìn)行早期的腫瘤風(fēng)險篩查，本篇研究數(shù)據(jù)結(jié)果證實了這一觀點。

在對兩種檢測結(jié)果的年齡分析中發(fā)現(xiàn)Septin9檢測在高齡組的檢查率高于低齡組，而CEA檢測在不同年齡的篩查人群中差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明將Septin9基因甲基化作為高齡健康人群的篩查項目更有更高的價值，提高早期識別高齡人群患病的風(fēng)險。

綜上所述，通過Septin9基因甲基化檢測結(jié)果與腸鏡結(jié)果檢查結(jié)合，發(fā)現(xiàn)Septin9基因甲基化檢測能夠作為健康人群的體檢項目，特別是適用于高齡健康人群早期發(fā)現(xiàn)腫瘤與提高結(jié)直腸癌的風(fēng)險篩查上具有重要的意義。