楊月君,孫坤鈺,余蘭,戴海琳,王麗

缺血性腦卒中是常見的致死性突發(fā)疾病,嚴(yán)重威脅人們生活質(zhì)量及生命健康[1-2]。血管鈣化是動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程的一部分,而動(dòng)脈粥樣硬化是缺血性腦卒中發(fā)生的主要原因[3]。頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化是指血管鈣化發(fā)生在頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段,與缺血性腦卒中關(guān)系密切[4]。研究顯示,頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化是缺血性腦卒中復(fù)發(fā)、死亡的影響因素,增加患者預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)[5]。因此,探究頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的相關(guān)機(jī)制有利于改善缺血性腦卒中患者預(yù)后?；|(zhì)Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)是一種維生素K依賴性蛋白質(zhì),是血管鈣化抑制劑,其以維生素K為輔酶的谷氨酸羧化酶羧化活化,發(fā)揮調(diào)節(jié)血管鈣化功能。無(wú)活性的血清去磷酸化未羧化基質(zhì)Gla蛋白(dephosphorylated-uncarboxylated matrix Gla protein,dp-ucMGP)與心血管疾病的動(dòng)脈硬化密切相關(guān)[6]。另外有研究報(bào)道,血清dp-ucMGP是血液透析患者發(fā)生心臟瓣膜鈣化的危險(xiǎn)因素[7]。骨鈣素(osteocalcin,OC)是一種由成骨細(xì)胞合成的非膠原蛋白,對(duì)人體血管鈣化具有重要調(diào)節(jié)作用[8]?，F(xiàn)檢測(cè)缺血性腦卒中患者血清dp-ucMGP、OC水平,并評(píng)估其與頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的關(guān)系,報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020年12月—2022年10月河北省保定市第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治的缺血性腦卒中患者172例為研究對(duì)象,男99例,女73例,年齡48～78(63.37±11.11)歲。根據(jù)血管壁鈣化評(píng)分[9]將缺血性腦卒中患者分為無(wú)鈣化組(0分)37例,輕度鈣化組(1～2分)95例,重度鈣化組(≥3分)40例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(臨床倫審2020-061),患者或家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①符合缺血性腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)[10];②首次發(fā)病,且發(fā)病后48 h內(nèi)入院;③臨床檢查資料完整。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①合并心、肺、肝、腎功能不全患者;②因動(dòng)脈夾層疾病、血液系統(tǒng)疾病導(dǎo)致腦卒中;③因下丘腦病變導(dǎo)致的后循環(huán)系統(tǒng)腦卒中。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 臨床資料收集:收集缺血性腦卒中患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、吸煙史、飲酒史、高血壓史、糖尿病史等臨床資料。

1.3.2 血清生化指標(biāo)及dp-ucMGP、OC水平檢測(cè):采集缺血性腦卒中患者入院后24 h內(nèi)空腹肘靜脈血10 ml,離心留取血清,儲(chǔ)存于-70℃冰箱待測(cè)。采用7170A型全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司)測(cè)定血清鈣(Ca)、磷(P)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。采用DXI 800型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)檢測(cè)血清甲狀旁腺激素(PTH)、25-羥基維生素D[25(OH)D]、OC水平。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)血清dp-ucMGP水平,dp-ucMGP ELISA試劑盒購(gòu)自南京卡米洛生物工程有限公司。

1.3.3 CT血管成像掃描及鈣化評(píng)分:對(duì)缺血性腦卒中患者進(jìn)行CT血管成像掃描,采用128層螺旋CT(荷蘭飛利浦公司,型號(hào)Philips Ingenuity),掃描參數(shù)120 kV,300 mA,重建間隔0.5 mm,層厚1 mm,螺距0.8∶1,以4 ml/s流速肘靜脈注射造影劑60 ml,掃描范圍自動(dòng)脈弓至顱頂,并檢測(cè)頸動(dòng)脈,利用CT血管成像軟件分析掃描數(shù)據(jù),存儲(chǔ)最佳圖像。由具有5年以上經(jīng)驗(yàn)的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師和影像科醫(yī)師,采用圖像處理軟件對(duì)影像圖片進(jìn)行分析,評(píng)估頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化程度,以顱內(nèi)動(dòng)脈無(wú)鈣化為0分,顱內(nèi)動(dòng)脈點(diǎn)狀鈣化為1分,顱內(nèi)動(dòng)脈薄而連續(xù)的鈣化或碎片狀厚而不連續(xù)的鈣化為2分,顱內(nèi)動(dòng)脈厚而連續(xù)的鈣化為3分,顱內(nèi)動(dòng)脈血管壁鈣化呈雙軌征為4分,最終鈣化評(píng)分取兩側(cè)評(píng)分的高者[9]。

2 結(jié) 果

2.1 3組臨床資料比較 3組患者性別、BMI、飲酒史、高血壓史、糖尿病史、Ca、P、TC、TG、LDL-C、HDL-C、PTH比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與無(wú)鈣化組比較,輕度鈣化組和重度鈣化組年齡、吸煙史比例升高,25(OH)D水平降低(P<0.05);與輕度鈣化組比較,重度鈣化組25(OH)D水平降低(P<0.05),見表1。

表1 無(wú)鈣化組、輕度鈣化組、重度鈣化組缺血性腦卒中患者臨床資料比較Tab.1 Comparison of clinical data of ischemic stroke patients in the non calcification group, mild calcification group, and severe calcification group

2.2 3組血清dp-ucMGP、OC水平比較 無(wú)鈣化組、輕度鈣化組、重度鈣化組血清dp-ucMGP、OC水平依次升高(P均<0.05),見表2。

表2 無(wú)鈣化組、輕度鈣化組、重度鈣化組缺血性腦卒中患者血清dp-ucMGP、OC水平比較Tab.2 Comparison of serum dp-ucMGP and OC levels among patients with ischemic stroke in the non calcification group, mild calcification group, and severe calcification group

2.3 血清dp-ucMGP、OC水平與患者年齡、吸煙史、25(OH)D相關(guān)性分析 血清dp-ucMGP、OC水平與缺血性腦卒中患者年齡、吸煙史、25(OH)D無(wú)相關(guān)性(r/P=0.251/0.193、0.212/0.172,0.177/0.256、0.196/0.213,-0.208/0.229、-0.225/0.205),而血清dp-ucMGP與OC呈正相關(guān)(r=0.563,P<0.001)。

2.4 Logistic回歸分析影響缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的危險(xiǎn)因素 以缺血性腦卒中患者是否發(fā)生頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化為因變量,以年齡、吸煙史、25(OH)D、dp-ucMGP、OC為自變量,進(jìn)行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,dp-ucMGP高、OC高是影響缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),見表3。

表3 影響缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析Tab.3 Logistic regression analysis of risk factors for intracranial carotid artery calcification in patients with ischemic stroke

2.5 血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度鈣化的價(jià)值 繪制血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度鈣化的效能ROC曲線,并計(jì)算曲線下面積(AUC),結(jié)果顯示,血清dp-ucMGP、OC水平及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度鈣化的AUC分別為0.857、0.825、0.913,二者聯(lián)合的AUC大于dp-ucMGP、OC各自單獨(dú)預(yù)測(cè)的AUC(Z/P=2.869/0.004、2.861/0.004),見表4、圖1。

圖1 血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度鈣化的ROC曲線Fig.1 Receiver operating characteristic of serum dp-ucMGP and OC levels predicting mild calcification in the intracranial segment of internal carotid artery in patients with ischemic stroke

表4 血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度鈣化的價(jià)值比較Tab.4 Comparison of serum dp-ucMGP and OC levels in predicting mild calcification of the intracranial segment of the internal carotid artery in patients with ischemic stroke

2.6 血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段重度鈣化的價(jià)值 繪制血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段重度鈣化的效能ROC曲線,并計(jì)算AUC,結(jié)果顯示,血清dp-ucMGP、OC水平及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段重度鈣化的AUC分別為0.876、0.809、0.945,二者聯(lián)合的AUC大于dp-ucMGP、OC各自單獨(dú)預(yù)測(cè)的AUC(Z/P=2.314/0.021、3.012/0.003),見表5、圖2。

圖2 血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段重度鈣化的ROC曲線Fig.2 Receiver operating characteristic of serum dp-ucMGP and OC levels predicting severe calcification in the intracranial segment of internal carotid artery in patients with ischemic stroke

表5 血清dp-ucMGP、OC水平預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段重度鈣化的價(jià)值比較Tab.5 Comparison of serum dp-ucMGP and OC levels in predicting severe calcification of the intracranial segment of the internal carotid artery in patients with ischemic stroke

3 討 論

頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段的狹窄、閉塞性病變?cè)斐傻难鞴嘧⒔档蜁?huì)加重顱內(nèi)缺血,從而造成腦小血管病的形成。顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化是缺血性腦卒中發(fā)生的重要原因,而動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生病理基礎(chǔ)是血管鈣化[11-13]。隨著年齡增加,患者合并高血壓、糖尿病的發(fā)生率也明顯上升,高血壓、糖尿病是顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄的危險(xiǎn)因素[14]。吸煙首先會(huì)損傷患者肺部,肺部受損后,造成機(jī)體血液供應(yīng)不足,最終造成機(jī)體表現(xiàn)出缺血性疾病[15]。本研究結(jié)果顯示,輕度鈣化組和重度鈣化組年齡、吸煙史比例高于無(wú)鈣化組,與張彩賓等[16]的研究結(jié)果一致,表明年齡越大、吸煙越久的缺血性腦卒中患者發(fā)生頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的幾率越高。

MGP是由動(dòng)脈壁血管平滑肌細(xì)胞分泌的維生素K依賴性血管壁鈣磷及晶體形成的抑制劑[17-18]。dp-ucMGP是未活化的MGP形式,與血管壁鈣磷沉積親和力低[19]。OC與能量代謝、記憶和急性應(yīng)激反應(yīng)有關(guān),研究發(fā)現(xiàn)其在缺血性腦卒中患者血清中異常表達(dá)[20]。本研究顯示無(wú)鈣化組、輕度鈣化組、重度鈣化組血清25(OH)D水平依次降低,dp-ucMGP、OC水平依次升高,提示缺血性腦卒中患者發(fā)生頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化可能與25(OH)D、dp-ucMGP、OC水平變化有關(guān),且鈣化越嚴(yán)重,血清25(OH)D水平越低,dp-ucMGP、OC水平越高。方向南等[21]研究顯示,2型糖尿病患者血清中dp-ucMGP水平與OC密切相關(guān),且dp-ucMGP、OC可能參與2型糖尿病合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者冠狀動(dòng)脈粥樣硬化形成。為進(jìn)一步明確血清dp-ucMGP、OC與缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的關(guān)系,進(jìn)行了相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)血清dp-ucMGP與OC水平呈明顯正相關(guān),與方向南等[21]研究結(jié)果一致。提示缺血性腦卒中患者體內(nèi)dp-ucMGP可能與OC共同影響頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的發(fā)生,但具體機(jī)制尚不清楚。已證實(shí)dp-ucMGP水平變化是影響慢性腎臟病患者血管鈣化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[22]。本研究Logistic分析顯示, dp-ucMGP高、OC高水平是影響缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的危險(xiǎn)因素,再次提示二者與頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化形成有關(guān),檢測(cè)二者水平變化能夠?yàn)轭i內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化提供預(yù)警作用。韋有欣等[23]研究報(bào)道,維持性血液透析患者血清dp-ucMGP水平與血管鈣化相關(guān),且對(duì)冠狀動(dòng)脈鈣化有一定的診斷意義。另有研究發(fā)現(xiàn),OC可影響2型糖尿病患者動(dòng)脈硬化和血管鈣化過(guò)程[24]。本研究ROC曲線顯示,血清dp-ucMGP、OC水平及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度鈣化的AUC分別為0.857、0.825、0.913,預(yù)測(cè)重度鈣化的AUC分別為0.876、0.809、0.945,且二者聯(lián)合預(yù)測(cè)均優(yōu)于dp-ucMGP、OC各自單獨(dú)預(yù)測(cè),提示血清dp-ucMGP、OC對(duì)缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度、重度鈣化有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。因此在全人群中應(yīng)用血清dp-ucMGP、OC診斷缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段輕度、重度鈣化有較好的臨床應(yīng)用前景,但仍需要后續(xù)擴(kuò)大樣本量證實(shí)。

綜上所述,缺血性腦卒中患者血清dp-ucMGP、OC水平隨頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化程度的升高而升高,對(duì)頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化程度有一定預(yù)測(cè)價(jià)值,有成為缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化嚴(yán)重程度分子標(biāo)志物的潛力。但本研究納入樣本量較少,且部分指標(biāo)并未納入研究,dp-ucMGP、OC參與缺血性腦卒中患者頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段鈣化的具體作用機(jī)制尚不明確,后期將擴(kuò)大樣本量通過(guò)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)等進(jìn)一步深入研究。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

楊月君:課題設(shè)計(jì),設(shè)計(jì)研究方案,實(shí)施研究過(guò)程,論文撰寫;孫坤鈺:提出研究思路,分析試驗(yàn)數(shù)據(jù),論文審核;余蘭、戴海琳:實(shí)施研究過(guò)程,資料搜集整理,論文修改;王麗:進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析