王乾麗，簡銀池，周人材，扶 勝，宋光林

（1.貴州省檢測技術(shù)研究應(yīng)用中心，貴州 貴陽 550000；2.食品安全與營養(yǎng)（貴州） 信息科技有限公司，貴州 貴陽 550008；3.貴州省分析測試研究院，貴州 貴陽 550000））

豬在飼養(yǎng)過程中直接食用噴灑過農(nóng)藥的農(nóng)作物、農(nóng)藥濫用導(dǎo)致環(huán)境、水、空氣、土壤污染等直接或間接原因?qū)⑹罐r(nóng)藥進入動物身體[1-2]，長期食用農(nóng)藥殘留的食物會損害人體的血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等，從而引發(fā)多種疾病[3]。因此，動物源食品中農(nóng)藥殘留備受監(jiān)管部門關(guān)注，《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》 （GB 2763—2021）中制定了嚴格的農(nóng)藥殘留限量標準。因此建立準確、可靠、高通量豬肉中農(nóng)藥殘留檢測方法有重要意義。

目前，食品中農(nóng)藥殘留的檢測方法主要有液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[4]、氣相色譜法[5]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6]等、但極性強和熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥不宜用氣相色譜法[7]，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有滿足不同極性化合物高通量檢測及定性定量的特點，EMR-lipid作為QuEChERS 法的一種凈化材料，對脂類含量特別高的樣品除脂效果較好，能減少基質(zhì)干擾，從而增強靈敏度和準確度[8-9]。

QuEChERS 法結(jié)合超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉中農(nóng)藥殘留適用于大批量檢測，可靠準確[10]。以期為豬肉中農(nóng)藥殘留的風險評估和監(jiān)測提供科學依據(jù)，有助于完善豬肉中最大殘留限量的農(nóng)藥參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標準品：克百威、嘧菌酯、涕滅威亞砜、滅多威、甲萘威、氧樂果、嘧霉胺、噠螨靈、氯唑磷、異丙威、樂果、丙環(huán)唑、氯吡脲、殺蟲脒、氟甲腈、3-羥基克百威、氟蟲腈砜、吡蚜酮（1 000.0 μg/mL）、甲霜靈、多菌靈（100.0 μg/mL），天津阿爾塔科技有限公司提供。

主要試劑：乙腈、丙酮、十八烷基鍵合硅膠C18吸附劑、乙二胺-N- 丙基硅烷（Primary secondary amine，PSA）、石墨化碳黑（Graphitizing of carbon black，GCB） dSPE EMR-Lipid 凈化管，上海安普實驗科技股份有限公司提供；多壁碳納米管（MWCNTs），中國科學院成都有機化學公司提供。

1.2 主要儀器設(shè)備

6470 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（配有ESI 源）、1290 型超高效液相色譜儀，美國Agilent 公司產(chǎn)品；LT2002 型電子天平，常熟市天量儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液配置

用移液管準確移取計算體積的20 種農(nóng)藥標準溶液于10 mL 的棕色容量瓶中，乙腈定容，分別配置濃度為10.0 μg/mL 的混合標準儲備液和質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL 的混合標準工作液備用；經(jīng)提取、凈化后獲得基質(zhì)溶液稀釋1.0 μg/mL 的混合標準工作液，配成0.25，0.50，1.00，2.00，4.00，8.00，10.00，25.00 ng/mL 空白基質(zhì)標準工作曲線。

1.3.2 樣品前處理

稱取2.00 g 已制樣的樣品（精確至0.01 g） 于50 mL 離心管中，加入10.0 mL 乙腈振蕩提取10 min后離心；然后取5.0 mL 上層澄清液到EMR-Lipid dSPE 管中振搖渦旋2 min 后離心，取出上清液到離心管中，加入QuEChERS 鹽析包后混勻離心；移取2 mL 上層溶液至試管中，40 ℃下氮吹干，乙腈水溶液定容至1.0 mL，然后倒入2.0 mL 離心管中，以轉(zhuǎn)速15 000 r/min 離心5 min，取上層液檢測。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus-C18反相色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.8 μm，美國Agilent 公司）；流動相A：0.1%甲酸水（含2 mmol/L 乙酸銨） 溶液，B：乙腈；流速：0.3 mL/min；柱溫：40 ℃；進樣體積：2.0 μL，梯度洗脫。

1.3.4 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI），正負離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；毛細管電壓4.5 kV；干燥氣溫度300 ℃；鞘氣流速6 L/min；鞘氣溫度300 ℃。

質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。

表1 質(zhì)譜分析參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取試劑的優(yōu)化

提取溶劑選擇需要綜合考慮對目標化合物提取效果和對油脂的溶解性，經(jīng)試驗對比，乙腈的提取效果最佳，因降低提取溶劑pH 值能破壞樣品的組織結(jié)構(gòu)，使目標物從組織中游離出來，加快提取效率。試驗考查了乙腈、0.1%甲酸乙腈、1%甲酸乙腈和丙酮的提取效果。

不同提取溶劑對20 種農(nóng)藥殘留的提取效果見圖1。

圖1 不同提取溶劑對20 種農(nóng)藥殘留的提取效果

0.1 %甲酸乙腈、1%甲酸乙腈和丙酮對多菌靈、異丙威、氯吡脲、 丙環(huán)唑、噠螨靈的回收效果不理想（回收率＜70%），其中丙酮對殺蟲瞇、噠螨靈、氟蟲腈砜的回收效果較差（回收率＜60%），0.1%甲酸乙腈對噠螨靈、氟蟲腈砜的回收率為17%和48%，1%甲酸乙腈對噠螨靈、丙環(huán)唑的回收率為55%和60%，乙腈對20 種目標化合物的提取效果最佳（回收率為81%~107%），因此，選擇乙腈為試驗的提取溶劑。

2.2 QuEChERS 法優(yōu)化

根據(jù)提取化合物的性質(zhì)和基質(zhì)特點，選擇最優(yōu)的凈化劑，對于減少基質(zhì)效應(yīng)、提高被測化合物靈敏度和回收率及其重要。試驗中考查了QuEChERS方法常用凈化材料C18、PSA、MWCNT、EMR-Lipid的不同組合和用量，以期提高目標化合物提取效率同時減少基質(zhì)效應(yīng)的影響。

凈化材料C18、PSA 對回收率的影響見圖2，MWCNT、EMR-Lipid 對回收率的影響見圖3。

圖2 凈化材料C18、PSA 對回收率的影響

圖3 MWCNT、EMR-Lipid 對回收率的影響

試驗數(shù)據(jù)顯示，選用PSA 作為凈化劑時，大部分目標化合物的回收效果較好（回收率為76%~121%），但噠螨靈的回收率較差為33%，氟甲腈受到基質(zhì)增強效應(yīng)影響回收率為131%；選用C18為凈化劑時，部分目標化合物受到基質(zhì)增強效應(yīng)影響較大，其中氯唑磷回收率為168%，噠螨靈回收率為165%，嘧菌酯回收率為137%；選用二者混合作為凈化劑時4 個目標化合物的回收率不理想，克百威回收率為143%，氯唑磷回收率為194%，丙環(huán)唑回收率為163%，嘧菌酯回收率為155%；MWCNTs 和PSA 的凈化效果顯示，MWCNTs 及MWCNTs 和PSA組合對目標化合物多菌靈（回收率為0）、嘧霉胺（回收率＜10%）、甲萘威（回收率＜60%）、3 -羥基克百威（回收率＜35%）、氯吡脲（回收率為0） 的回收效果差。

2.3 方法學評價

2.3.1 方法的線性范圍、檢出限

試驗采用基質(zhì)曲線來消除基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明，20 種目標化合物在0.25~25.00 μg/L 的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R2） 在0.995 以上，適用于定量分析。通過向陰性樣品中添加目標物來考查方法的檢出限（LOD，S/N=3），最終確定方法的檢出限（LOD） 為0.2 μg/kg，定量限（LOQ）為0.7 μg/kg，該方法有較好的靈敏度。

20 種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)（R2）、檢出限（LOD）、回收率和相對標準偏差（RSD） （n=6） 見表2。

表2 20 種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)（R2）、檢出限（LOD）、回收率和相對標準偏差（RSD） （n=6）

2.3.2 回收率和相對標準偏差（RSD）

在2.5，5.0，10.0 μg/kg 三水平考查加標回收率和相對標準偏差（RSD）。由表2 可知，回收率為82.3%~109.5%，相對標準偏差（RSD） 為1.9%~8.2%，該方法的準確度和精密度能滿足豬肉中農(nóng)藥殘留檢測的要求。

3 結(jié)論

試驗的樣品前處理步驟簡單省時，具有易用性和較高分析效率，該方法回收率高、檢出限低、靈敏度和重現(xiàn)性好，14 min 內(nèi)完成豬肉中20 種高毒性農(nóng)藥的檢測，能夠滿足豬肉中20 種高毒性痕量農(nóng)藥殘留的快速、準確、大批量檢測要求。