葉 坤，閆云杰，王秋榮，王志勇，陳慶凱，謝仰杰

(1.集美大學水產(chǎn)學院，福建廈門 361021；2.農業(yè)農村部東海海水健康養(yǎng)殖重點實驗室，福建廈門 361021；3.福建省寧德市水產(chǎn)技術推廣站，福建寧德 352100 )

0 引言

黃姑魚Nibeaalbiflora(Richardson)屬鱸形目石首魚科黃姑魚屬，分布于東海、臺灣海峽和南海。其肉質鮮美，對環(huán)境適應性與大黃魚(Larimichthycrocea)相似，生長速度較快，不易患刺激隱核蟲病，近年來已成為我國沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖的重要海水魚類。有關黃姑魚人工繁殖和育苗技術等方面的研究雖然開展較早，但人工育苗成活率仍較低下。

在魚類人工育苗生產(chǎn)上，一般采用微藻、雙殼類受精卵、擔輪幼蟲、輪蟲、鹵蟲無節(jié)幼體(Artemianauplii)、橈足類和枝角類等作為仔稚魚的生物餌料[1]。眾多研究表明，餌料的營養(yǎng)對仔稚魚的存活和生長影響很大。通過對海水魚投喂經(jīng)營養(yǎng)強化的輪蟲、鹵蟲或橈足類，可以提高海水魚仔稚魚的存活率，并促進其生長[2]。劉忠優(yōu)等[3]研究了濃縮小球藻、深海魚油和魚肝油3種強化劑對龍虎斑仔稚魚生長、存活率、消化酶及體成分的影響，結果表明這3種強化劑均可用于龍虎斑仔稚魚生物餌料的強化，其中深海魚油提高的存活率最顯著；邱小琮等[4]研究了營養(yǎng)強化的輪蟲、鹵蟲對牙鲆(Paralichthysolivaceus)仔魚的成活、生長及體脂肪酸組成的影響，結果表明用強化的輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體投喂牙鲆仔魚，可以提高牙鲆仔魚的生長速度和成活率。對于海水魚類，仔魚前期靠吸收自身卵黃營養(yǎng)物質滿足生長需要，成活率高，但在開口后，從內源性營養(yǎng)轉為外源性營養(yǎng)，一些重要營養(yǎng)物質的缺乏和不足是導致仔魚大量死亡的一個重要原因[5]。眾多學者[4，6-7]認為，生物餌料中缺少海水魚必需的高度不飽和脂肪酸等重要營養(yǎng)物質是導致海水魚類育苗成活率低、生長緩慢的重要原因。因此，為仔稚魚提供營養(yǎng)豐富的餌料生物是保證海水魚類仔稚魚高存活率和生長率的前提。

本文通過給黃姑魚仔稚魚投喂經(jīng)不同強化劑強化的餌料，比較各組仔稚魚的生長性能及抗逆性，探究餌料營養(yǎng)強化對黃姑魚仔稚魚生長性能和抗逆性的影響，以期為黃姑魚的育苗生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗用仔魚系寧德市橫嶼島水產(chǎn)科技有限公司培育的黃姑魚親魚經(jīng)人工催產(chǎn)所得。仔魚在室內水泥池進行常規(guī)培育，開口后的前3天用牡蠣受精卵作為餌料，開口后第4天開始投喂經(jīng)濃縮小球藻強化的輪蟲，培育至10 dhp(days post hatching)時全長平均3.86 mm，體重平均0.16 mg。

實驗期間所用輪蟲為室外池塘培養(yǎng)的褶皺臂尾輪蟲(Brachionusplicatilis)(以下簡稱輪蟲)，用50 μm孔徑的篩絹網(wǎng)收集后暫養(yǎng)于室內水泥池中備用，暫養(yǎng)期間投喂?jié)饪s小球藻。

實驗期間所用鹵蟲無節(jié)幼體由鹵蟲卵孵化獲得。采用0.5 m3的圓錐形玻璃鋼孵化桶進行孵化，孵化水溫28 ℃，鹽度30，孵化過程連續(xù)強充氣，經(jīng)24 h孵出，再停氣、遮光、靜置10 min，使空殼浮于水面，然后打開底部排水孔，在排水口用篩絹網(wǎng)收集鹵蟲無節(jié)幼體。分離后的無節(jié)幼體置玻璃缸孵化桶中備用，連續(xù)充氣增氧。

乳化魚油：由福建高龍實業(yè)有限公司提供的精煉魚油，按40 mL魚油+300 mL淡水+1個雞蛋黃的比例，通過食物攪拌機攪拌制成乳化魚油，置4 ℃保存?zhèn)溆?限2 d內使用)。

裂殖壺菌(Schizochytrium)干粉：購自山東青島微藻生物技術有限公司，使用前用孔徑約50 μm的篩絹網(wǎng)搓洗分散后潑灑使用。

濃縮小球藻(Chlorellasp.)：濃縮小球藻購自山東集大生物科技有限公司。

1.2 餌料營養(yǎng)強化

用濃縮小球藻、乳化魚油、裂殖壺菌等強化劑分別強化輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體。用容積為100 L的塑料桶作為強化桶，實際水體80 L，輪蟲密度1000 ind/mL，鹵蟲無節(jié)幼體密度100 ind/mL，水溫21 ℃，鹽度30，每桶放一個散氣石進行充氣增氧，每次強化12 h。

強化劑的用量：每個強化桶每次用乳化魚油40 mL或裂殖壺菌4 g或濃縮小球藻40 mL。

1.3 實驗方法

實驗設計：實驗共設7組，用A、B、C、D、E、F和G表示。其中A組(對照組)投喂未強化的輪蟲；B組(小球藻強化輪蟲組)全程投喂?jié)饪s小球藻強化的輪蟲；C組(魚油強化輪蟲組)全程投喂乳化魚油強化的輪蟲；D組(裂殖壺菌強化輪蟲組)全程投喂裂殖壺菌強化的輪蟲；E組(小球藻強化鹵蟲組)10～22 dph(前期)投喂?jié)饪s小球藻強化的輪蟲，20～25 dph(后期)投喂小球藻強化的鹵蟲無節(jié)幼體；F組(魚油強化鹵蟲組)前期投喂乳化魚油強化的輪蟲，后期投喂乳化魚油強化的鹵蟲無節(jié)幼體；G組(裂殖壺菌強化鹵蟲組)前期投喂裂殖壺菌強化的輪蟲，后期投喂裂殖壺菌強化的鹵蟲無節(jié)幼體。每組設3個平行組。采用容積為1000 L的玻璃鋼圓桶為養(yǎng)殖桶，每桶分別裝海水900 L。實驗開始時每桶放入常規(guī)培育至10 dph的黃姑魚仔魚12 000 尾。實驗期間每日換水50%，定時吸污。每桶放1個氣石進行適量充氣。按時投餌及補充餌料，投餌前計算餌料密度，輪蟲密度維持在3～5 ind/mL，鹵蟲無節(jié)幼體密度維持在0.5～2 ind/mL。實驗期間水溫保持在22～24 ℃，鹽度30。

生長情況測定：于10、13、16、19、22、25 dph對仔稚魚的生長情況進行測定，每次從各桶中隨機取30尾用解剖鏡測定全長，用電子天平測定30尾仔魚的體重，再計算出各組仔魚的平均全長、平均體重。

成活率測定：于25 dph隨機取樣計數(shù)，計算各桶中存活的魚苗數(shù)。根據(jù)實驗開始時的魚苗數(shù)量計算成活率。

抗應激實驗：于25 dph進行抗應激實驗。從各桶中用撈網(wǎng)隨機撈取稚魚30尾，分別在干露刺激一定時間后(10 s、20 s、30 s、1 min、2 min、3 min、5 min、10 min)，放回海水中，1 h后記錄死亡尾數(shù)，根據(jù)存活率來評判稚魚的抗應激能力。

耐饑餓實驗：于25 dph進行耐饑餓實驗。從各桶中隨機取50尾稚魚放入50 L的塑料桶中，實際水體30 L，靜水培育，每天觀察記錄各桶中的魚苗死亡情況，根據(jù)存活情況以及無給餌生存活力指數(shù)ISA(survival activity index，SAI)評判魚苗的耐饑餓能力。

1.4 計算公式

增重率(weight gain rate，WGR)RW=(Wt-W0)÷W0×100%；

特定生長率(specific growth rate，SGR，d-1)RG=(lnWt-lnW0)÷t×100%；

成活率(survival rate，SR)RS=Nt÷N0×100%；

肥滿度(condition factor，CF)CF=Wt÷Lt×100%。

其中：Wt為終末體重(g)；W0為初始體重(g)；t為養(yǎng)殖天數(shù)(d)；Nt為終末尾數(shù)；N0為初始尾數(shù)；Lt為終末全長(cm)。

1.5 數(shù)據(jù)分析和處理

結果以平均值±標準差表示，應用SPSS 20軟件對實驗結果進行單因素方差分析，采用Duncan法對各實驗組之間進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 餌料營養(yǎng)強化對黃姑魚仔稚魚生長性能的影響

用不同強化劑強化的餌料投喂黃姑魚仔稚魚后，其體重和全長的生長差異見圖1、圖2。

無論是輪蟲還是鹵蟲經(jīng)過營養(yǎng)強化后投喂給黃姑魚仔稚魚，黃姑魚仔稚魚的體重和全長的增加都高于對照組，隨著投喂天數(shù)的增加，這種差異越來越顯著(P<0.05)。16～25 dph，C、D、F和G組的體重顯著大于A組(對照組)，B組和E組的體重也大于對照組；19～25 dph，D組和G組的全長顯著大于A組(P<0.05)，其他組的全長也大于A組。

用不同強化劑強化的輪蟲和鹵蟲投喂黃姑魚仔稚魚后，各實驗組之間的黃姑魚仔稚魚體重和全長也有差異。全程用輪蟲投喂，各組黃姑魚仔稚魚的體重和全長差異為D組>C組>B組，D組顯著大于B組和C組(P<0.05)；前期用輪蟲和后期用鹵蟲投喂，各組黃姑魚仔稚魚的體重和全長差異為G組>F組>E組，G組顯著大于E組和F組(P<0.05)；黃姑魚仔稚魚投喂鹵蟲后的組，仔稚魚體重和全長的增加顯著大于未投喂鹵蟲的組(P<0.05)。

投喂用不同強化劑強化的輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體，黃姑魚仔稚魚的生長性能差異顯著(見表1)。C、D、E、F、G組的增重率、特定生長率、肥滿度和成活率顯著大于對照組(P<0.05)，B組的增重率、特定生長率、肥滿度和成活率也大于對照組，但差異并不顯著。

表1 不同強化餌料對黃姑魚仔稚魚生長性能的影響Tab.1 Effect of different enhanced diets on growth performances of larva and juveniles of Nibea albiflora during the experiment

不同時期用不同強化劑強化的輪蟲和鹵蟲投喂黃姑魚仔稚魚后，各組之間的黃姑魚仔稚魚生長性能也有差異。全程用輪蟲投喂，各組黃姑魚仔稚魚的增重率、特定生長率、肥滿度和成活率差異為D組>C組>B組，且D組顯著大于B組和C組(P<0.05)；前期用輪蟲和后期用鹵蟲投喂，各組黃姑魚仔稚魚的增重率、特定生長率、肥滿度差異為G組>F組>E組，且G組顯著大于E組和F組(P<0.05)。

與未投喂鹵蟲的實驗組相比，投喂鹵蟲的實驗組黃姑魚仔稚魚的增重率、特定生長率、肥滿度、成活率等生長性能顯著提高(P<0.05)。

2.2 餌料營養(yǎng)強化對黃姑魚稚魚抗逆性的影響

2.2.1 強化餌料對黃姑魚稚魚抗干露能力的影響

各實驗組稚魚在干露刺激10 s后，1 h內除了A組死亡1尾，其余均未出現(xiàn)死亡。干露刺激20 s后，1 h內出現(xiàn)一些死亡，各實驗組黃姑魚稚魚的存活率都比A組高，且C、D、E、F和G組的存活率顯著高于A組(P<0.05)。干露刺激30 s后，1 h內的死亡數(shù)明顯增加，D組和G組的存活率顯著高于A組(P<0.05)，E組和F組的存活率也高于A組，但差異不顯著(P>0.05)。干露刺激1 min后，1 h內的死亡數(shù)量顯著增加，除B組外，其他實驗組的稚魚存活率顯著高于A組(P<0.05)。干露刺激2 min后，1 h內除E組外其他實驗組稚魚的存活率顯著高于A組(P<0.05)。干露刺激3 min后，1 h內的死亡率均高于50%，除E組外其他實驗組黃姑魚稚魚的存活率都比A組高，且C、D、F和G組的存活率顯著高于A組(P<0.05)。干露刺激5 min后，1 h內各實驗組稚魚的存活率高于A組(P<0.05)。干露刺激10 min后，A組和B組在1h內全部死亡，其余各組的存活率也均低于10%，成活率較低(見圖3)。

不同強化劑強化的輪蟲和鹵蟲投喂黃姑魚稚魚后，各實驗組的黃姑魚稚魚在經(jīng)歷不同時間干露刺激后的存活率也有差異。全程用輪蟲投喂，各實驗組黃姑魚稚魚在經(jīng)歷不同時間干露刺激后的存活率差異為D組>C組>B組，D組顯著大于B組(P<0.05)；前期用輪蟲和后期用鹵蟲投喂，各組黃姑魚稚魚在經(jīng)歷不同時間干露刺激后的存活率差異為G組>F組>E組，且G組顯著大于E組(P<0.05)；投喂鹵蟲的實驗組(E、F、G組)黃姑魚稚魚在經(jīng)歷不同時間干露刺激后的存活率都高于未投喂鹵蟲的實驗組(B、C、D組)。

2.2.2 強化餌料對黃姑魚稚魚耐饑餓能力的影響

經(jīng)過15 d不同餌料的投喂，各組黃姑魚稚魚對饑餓的耐受能力存在差異(見圖4)。

停飼后的第1天和第2天，各組黃姑魚稚魚均出現(xiàn)少量死亡。停飼后第3天，各組出現(xiàn)大量死亡，但各實驗組黃姑魚稚魚的存活率顯著高于A組(P<0.05)，其中存活率最高的是F組和G組，其次是E組，都顯著高于B、C、D組(P<0.05)。停飼后第4天，F(xiàn)、G、E組的存活率顯著高于其他4組(P<0.05)，而F組和G組的存活率顯著高于E組(P<0.05)，A組全部死亡，B、C、D組稚魚也所剩無幾。停飼后第5天，E、F、G組的存活率顯著高于其他4組(P<0.05)，且F、G組稚魚存活率顯著高于E組(P<0.05)，B、C、D組稚魚全部死亡。停飼后第6天，E、F、G組的存活率也大幅下降，F(xiàn)組存活率顯著高于其他2組(P<0.05)。停飼后第7天，所有稚魚全部死亡。各組黃姑魚稚魚生存活力指數(shù)(SAI)存在差異，除C組外，其他實驗組的SAI顯著高于A組(P<0.05)，且D、E、F、G組的SAI顯著高于B組和C組(P<0.05)，D、E、F、G組之間的SAI差別不顯著(P>0.05)。此外，投喂鹵蟲實驗組(E、F、G組)的黃姑魚稚魚在停飼后不同時間的存活率高于未投喂鹵蟲的實驗組(B、C、D組)。

3 討論

3.1 餌料營養(yǎng)強化對黃姑魚仔稚魚生長性能的影響

大多數(shù)海水魚自身不能合成n-3系列高度不飽和脂肪酸(n-3HUFA)，其生長發(fā)育所需n-3HUFA只能從餌料中獲得[8-9]。對海水魚仔稚魚的生物餌料(輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體)進行營養(yǎng)強化，主要是為了提高輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體的n-3HUFA含量，尤其是DHA的含量。當仔稚魚對n-3HUFA攝入不足時，仔稚魚會出現(xiàn)生長緩慢、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育不良、脊椎彎曲、對不良環(huán)境的耐受力低、抵抗力低、死亡率高等癥狀。輪蟲體內n-3HUFA的含量與其培養(yǎng)方式密切相關，用面包酵母培養(yǎng)的輪蟲，n-3HUFA的含量非常低，鹵蟲無節(jié)幼體也缺乏n-3HUFA[10-11]，對大多數(shù)海水魚類的投喂效果不理想。研究[12-16]表明，采取一定的營養(yǎng)強化措施，可以提高餌料的營養(yǎng)價值，進而促進海水魚仔稚魚的生長并提高其成活率。

本實驗中，輪蟲和鹵蟲經(jīng)裂殖壺菌、乳化魚油以及濃縮小球藻強化后投喂黃姑魚仔稚魚，除小球藻強化輪蟲組之外，其他組黃姑魚仔稚魚的體重、全長、增重率、特定生長率、肥滿度及成活率顯著高于對照組(P<0.05)，這表明黃姑魚仔稚魚所需的餌料經(jīng)過營養(yǎng)強化后，可以提高黃姑魚仔稚魚的生長速度和成活率，這與歐洲狼鱸(Dicentrarchuslabrax)[12]、條紋鱸(Moronesaxatilis)[13]、花尾胡椒鯛(Plectorhinchuscinctus)[17]研究的結果一致。

不同強化劑的強化效果也各有差異，從輪蟲和鹵蟲投喂情況及不同時間段的生長差異來看，裂殖壺菌的強化效果最好，其次是乳化魚油，而濃縮小球藻最差。裂殖壺菌能夠有效提高黃姑魚仔稚魚的生長性能與它含有豐富的DHA有關。朱路英等[18]對裂殖壺菌營養(yǎng)成分分析結果表明，其細胞主要組分為脂類、蛋白質和總糖，而脂肪比例占到細胞干重的55%～75%，且多為不飽和脂肪酸，其中n-3HUFA含量達20%以上。裂殖壺菌中的DHA等不飽和脂肪酸包藏于細胞內，相對不容易氧化[19]。本實驗結果與馬靜等[20]、宋曉金等[21]的研究結果基本一致。Yamasaki等[22]也指出經(jīng)裂殖壺菌營養(yǎng)強化的輪蟲、鹵蟲、橈足類等餌料生物，可促進魚、蝦、貝幼體的生長，提高存活率。

用乳化魚油對生物餌料進行營養(yǎng)強化，在許多海產(chǎn)魚類的苗種生產(chǎn)中得到應用，效果顯著[23-24]。本研究中，用乳化魚油強化的輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體投喂的黃姑魚仔稚魚的生長速度、成活率均較高。乳化魚油除了可增加輪蟲和鹵蟲的DHA和EPA含量，還可以增加卵磷脂含量[25-26]。許多研究[27-30]表明，在餌料中添加適當比例的卵磷脂能在不同程度上提高仔稚魚的生長率和存活率，降低畸形率。但是魚油容易氧化變質，尤其是其中的DHA和EPA處于游離狀態(tài)，在曝氣及較高溫度下易發(fā)生自然氧化，而氧化脂肪對餌料生物是有毒的，加上餌料生物用乳化魚油強化后容易造成水質惡化，不利于黃姑魚仔稚魚的生長和存活，這可能就是乳化魚油比裂殖壺菌強化效果差的原因。

有研究[31]表明，小球藻中EPA含量較高，但缺乏DHA。胡珅華等[32]的研究也指出，經(jīng)小球藻強化的輪蟲體內EPA含量顯著提高，但是DHA含量與強化前沒有明顯的差異。本研究中，用小球藻強化輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體的效果相對裂殖壺菌和乳化魚油差，但能提高黃姑魚仔稚魚的生長性能。張利民等[15]也指出單用小球藻強化輪蟲效果不佳，需多種強化劑聯(lián)合強化，才能達到更好的強化效果。

投喂鹵蟲的實驗組(E、F、G組)黃姑魚仔稚魚的生長性能相對于未投喂鹵蟲的實驗組(B、C、D組)顯著提高，這可能與營養(yǎng)狀況有關。輪蟲的個體大小和營養(yǎng)可以滿足黃姑魚仔魚階段的生長與營養(yǎng)需求，而隨著黃姑魚仔魚的生長，輪蟲偏小的個體無法滿足魚苗的生長與營養(yǎng)需求，需要及時轉換個體較大且能滿足黃姑魚仔稚魚生長與營養(yǎng)需求的鹵蟲。因此，在黃姑魚育苗過程中，不僅要保證充足的餌料，還要及時轉換不同的餌料，以滿足黃姑魚仔稚魚的生長與營養(yǎng)需求。

3.2 餌料營養(yǎng)強化對黃姑魚稚魚抗逆性的影響

魚類幼體的抗逆性與體內的脂肪酸組成相關，n-3HUFA含量高低會影響幼體的生長和存活，因此抗逆性是評價魚類幼體的生物質量指標之一[33]。本實驗中，餌料經(jīng)過營養(yǎng)強化后投喂給稚魚，稚魚在干露刺激后的存活率顯著高于餌料未經(jīng)營養(yǎng)強化組，各實驗組的稚魚成活率差異為D組>C組>B組、G組>F組>E組；各實驗組稚魚在停飼后不同時間的存活率和SAI高于對照組，各實驗組黃姑魚稚魚存活率和SAI表現(xiàn)為G組>F組>E組>D組>C組>B組。這表明餌料經(jīng)營養(yǎng)強化后可以提高稚魚在干露刺激后的存活率以及停飼后不同時間的存活率，即投喂經(jīng)營養(yǎng)強化的餌料后，可以顯著增強黃姑魚稚魚的抗逆性。這與Cavalli等[33]、王春琳等[34]的研究結果相一致。本實驗結果表明，無論是輪蟲還是輪蟲+鹵蟲投喂方式，經(jīng)不同強化劑強化后，黃姑魚稚魚的抗逆性差異顯著，裂殖壺菌強化組(D組和G組)的黃姑魚稚魚抗逆性最強，其次是乳化魚油，而濃縮小球藻最差。由于投喂鹵蟲的實驗組黃姑魚稚魚生長性能提高顯著，稚魚的個體增大顯著，魚體更健壯，因此其抗逆性也就明顯增強。

綜上所述，對黃姑魚仔稚魚的餌料(輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體)進行營養(yǎng)強化，可以顯著提高黃姑魚仔稚魚的生長性能和抗逆性，其中，采用裂殖壺菌強化的效果最好，其次是用魚油強化，再次是用濃縮小球藻強化。在適宜的養(yǎng)殖階段(20～22日齡)進行餌料轉換有利于提高黃姑魚仔稚魚的生長速度和抗逆性。