張曉燦，康 倩，李煥君，王莉莉，王 麗，馬鳳霞，劉曉蓮，馬寧寧

（河北冀衡藥業(yè)股份有限公司，河北 衡水 053000）

0 引 言

安乃近（Metamizole sodium） 為老牌解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)原料藥，由于其療效好，使用方便，價(jià)格低廉，在醫(yī)學(xué)上發(fā)揮了重大作用。可用于頭痛、神經(jīng)痛、偏頭痛、肌肉痛、關(guān)節(jié)痛和痛經(jīng)等癥狀；如出現(xiàn)高熱，可用于解熱，安乃近極易溶于水，作用較為迅速，解熱鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)而快，在解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥中是為數(shù)不多的既能口服又可注射的品種；還可以用于滴鼻，尤其小兒鼻腔內(nèi)毛細(xì)血管豐富，藥液接觸面大，易于吸收，使用時(shí)藥效快，作用強(qiáng)。

安乃近合成工藝一般以吡唑酮為基礎(chǔ)原料，經(jīng)甲基化反應(yīng)制得安替比林，再經(jīng)亞硝化還原成4-氨基安替比林，然后經(jīng)甲酰化和甲基化得4-甲氨基安替比林，最后經(jīng)縮合反應(yīng)得到安乃近。生產(chǎn)過(guò)程中用到的甲醇會(huì)殘留到安乃近中，但各國(guó)藥典均沒(méi)有關(guān)于安乃近殘留溶劑甲醇的檢測(cè)方法的報(bào)道，按照國(guó)際制藥指南ICHQ3C，甲醇屬于對(duì)人體有害的有機(jī)溶劑，故應(yīng)對(duì)殘留溶劑給予控制，本實(shí)驗(yàn)開(kāi)發(fā)了安乃近殘留溶劑甲醇的定量檢測(cè)方法，為安乃近生產(chǎn)提供重要的理論依據(jù)，同時(shí)也達(dá)到了提高安乃近質(zhì)量的目的。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀 器

QUINIX124-1CN 分析天平，賽多利斯。

Clarus 580 氣相色譜儀，PE 氣相色譜儀。

SPN-300 高純度氮?dú)獍l(fā)生器，北京中惠普分析技術(shù)研究所。

SPH-300 高純度氫氣發(fā)生器，北京中惠普分析技術(shù)研究所。

SPB-3 全自動(dòng)空氣源，北京中惠普分析技術(shù)研究所。

1.1.2 試 劑

N,N-二甲基甲酰胺，天津大茂。

安乃近，河北冀衡藥業(yè)股份有限公司。

甲醇，默克。

1.2 色譜條件

色譜柱，Agilent DB-WAX，30 m×0.32 mm×0.50 μm。

載氣。

氮?dú)狻?/p>

檢測(cè)器，F(xiàn)ID。

柱溫，起始溫度55 ℃，以每分鐘3 ℃的速率升溫至80 ℃，然后以5.0 ℃的速率升溫至140 ℃保持5 min。

檢測(cè)器溫度，230 ℃。

進(jìn)樣器溫度，200 ℃。

流速，20 mL/min。

進(jìn)樣量，1.0 μl。

量程，1。

載氣流速，3。

計(jì)算方法，外標(biāo)法。

2 結(jié)果與討論

2.1 定性分析

2.1.1 溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱(chēng)取0.05 g 甲醇于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

供試試液：精密稱(chēng)取2 個(gè)0.5 g 樣品分別于10 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.1.2 操作步驟

分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 μL，重復(fù)進(jìn)樣5 次；分別吸取樣品溶液1.0μL 進(jìn)樣。

計(jì)算式如下：

式中：As樣品溶液中甲醇的峰面積；Ar 標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的峰面積；Wr 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液稱(chēng)取甲醇的質(zhì)量；Ws 稱(chēng)取樣品的質(zhì)量。

2.2 氣相色譜方法學(xué)考察

2.2.1 檢測(cè)方法的系統(tǒng)適用性

對(duì)照液：精密稱(chēng)取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

取對(duì)照溶液1.0 μL 重復(fù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖，6 次結(jié)果的平均值為77 353.5，RSD 為1.55%，＜5.0%，符合規(guī)定。系統(tǒng)適用性檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 系統(tǒng)適用性檢測(cè)結(jié)果Table 1 Testing result of system suitability test

2.2.2 檢測(cè)方法的專(zhuān)屬性

吸取DMF1.0 μL 進(jìn)樣，記錄色譜圖。與系統(tǒng)適用性中的溶液1 進(jìn)行比較。從溶劑圖譜未檢測(cè)到甲醇，對(duì)甲醇的測(cè)定沒(méi)有影響，專(zhuān)屬性符合規(guī)定。

2.3 甲醇檢測(cè)限和定量限的測(cè)定

2.3.1 定量限

吸取系統(tǒng)適用性項(xiàng)下對(duì)照液1.0 mL 于10 mL量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定量限的儲(chǔ)備液；吸取定量限儲(chǔ)備液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻。吸取1.0 μL 重復(fù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖。

定量限重復(fù)性，甲醇面積平均值為190，面積RSD 為7.6%，＜10.0%；甲醇的信噪比均介于8～15，此時(shí)的濃度0.742 4 μg/mL 為甲醇定量限濃度。

2.3.2 檢測(cè)限

精密稱(chēng)取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照液。吸取對(duì)照液1.0 mL 于10 mL 量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定量限的儲(chǔ)備液；吸取定量限儲(chǔ)備液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定量限溶液。吸取定量限溶液2.5 mL 于10 mL 容量瓶中，用DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻作為檢測(cè)限溶液。吸取檢測(cè)限溶液1.0 μL 注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，甲醇峰的信噪比為3.04，介于2～4，保留時(shí)間為1.810 min，此時(shí)的濃度0.19 ug/mL 為甲醇檢測(cè)限濃度。

2.4 線(xiàn)性及線(xiàn)性范圍的測(cè)定

在甲醇?xì)埩羧軇┑亩肯拗良状細(xì)埩羧軇┫薅鹊?50%之間，相關(guān)系數(shù)R≥0.999，依次配制溶液，分別用DMF 配制成6 個(gè)不同濃度的溶液，甲醇 在 濃 度0.7424 ～721 μg/mL（LOQ- 限度 的150%） 具有良好的線(xiàn)性，線(xiàn)性方程為Y=171.24x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液不同濃度峰面積見(jiàn)表2。

表2 甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液不同濃度峰面積Table 2 Table of different concentration peak areas of methanol standard solution

甲醇溶液線(xiàn)性關(guān)系如圖1 所示。

圖1 甲醇溶液線(xiàn)性關(guān)系Fig.1 Linear relationship of methanol solution

2.5 重復(fù)性的測(cè)定

吸取溶劑1.0 μL 注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。

吸取檢測(cè)限下的對(duì)照液1.0 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。

甲醇對(duì)照的平均值為82 546.4，RSD 為0.94%，＜5.0%，符合規(guī)定。甲醇對(duì)照液重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 甲醇對(duì)照液重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果Table 3 Testing result of methanol standard solution repeatability test

取一批安乃近樣品，稱(chēng)取6 個(gè)樣，各0.5 g，分別于10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。分別吸取1.0 μL，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。計(jì)算樣品中檢測(cè)到甲醇的平均值為40×10-6，RSD 為7.62%，＜10%，符合規(guī)定。安乃近樣品的甲醇檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 安乃近樣品的甲醇檢測(cè)結(jié)果Table 4 Methanol testing result of three samples of metamizole sodium samples

2.6 樣品溶液穩(wěn)定性

吸取1.0 μL DMF 注入氣相色譜儀中，精密稱(chēng)取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

分別稱(chēng)取安乃近樣品二個(gè)樣，各0.5 g，分別于10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、對(duì)照溶液、樣品溶液各1.0 μL，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。

標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液、溶劑分別在0、4、8 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。

溶劑、樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液在0、4、8 h 比較穩(wěn)定；對(duì)照溶液的RSD 為1.5%，樣品中甲醇檢測(cè)結(jié)果的RSD 為3.5%，＜5.0%，符合規(guī)定。

2.7 準(zhǔn)確度的測(cè)定

在甲醇?xì)埩羧軇┫薅鹊?0%、100%、120%3個(gè)水平項(xiàng)下。

（1） 空白溶劑，吸取1.0μL DMF 注入氣相色譜儀中，空白溶劑中未檢測(cè)到甲醇。

（2） 空白樣品，精密稱(chēng)取安乃近0.5 g 于10 mL 量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。吸取1.0 μL 注入氣相色譜儀中，樣品中未檢測(cè)到甲醇。

（3） 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，精密稱(chēng)取甲醇對(duì)照0.25 g于50 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

（4） 進(jìn)一針樣品+ 標(biāo)準(zhǔn)溶液（甲醇限度的80%、100%、120%3 個(gè)水平）。

（5） 進(jìn)一針標(biāo)準(zhǔn)溶液(甲醇限度的80%、100%、120%3 個(gè)水平)。

分別吸取各溶液1.0 μL 注入氣相色譜儀，進(jìn)一針樣品+標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液（相應(yīng)雜質(zhì)限度的80%、100%、120%3 個(gè)水平），每個(gè)濃度取3 次，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，以平均回收率做為甲醇測(cè)定的準(zhǔn)確度，各組分定量的準(zhǔn)確度應(yīng)在92%～108%之間，RSD 不得＞10.0%。

然后用（4） -（2） /（5） - （1） 來(lái)計(jì)算各個(gè)殘留溶劑的回收率。

注：（4）：樣品+標(biāo)準(zhǔn)品（2）：樣品（5）：標(biāo)準(zhǔn)品（1）：空白。

平均回收率100.27%介于90%～108%； RSD為0.84%＜10.0%，符合規(guī)定。分別檢測(cè)甲醇?xì)埩羧軇┑?0%、100%、120%，樣品加標(biāo)準(zhǔn)溶液80%、100%、120%中的甲醇，最后測(cè)得甲醇的平均回收率為100.27%，RSD 為0.84%，符合規(guī)定。

2.8 耐用性

精密稱(chēng)取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取1.0 μL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5 次。

精密稱(chēng)取安乃近0.781 3-0.281 2=0.500 1 g、0.781 7-0.281 6=0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

吸取溶劑、標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液各1.0 μL，檢測(cè)器、進(jìn)樣器、色譜柱、載氣流速、柱溫在正常條件下，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖，耐用性項(xiàng)下正常條件檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 耐用性項(xiàng)下正常條件檢測(cè)結(jié)果Table 5 Testing result of robustness test on normal condition

2.8.1 柱溫58 ℃

吸取2.8 項(xiàng)下溶液各1.0 μL，在其他條件不變，柱溫58 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項(xiàng)下柱溫58℃檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6。

2.8.2 柱溫62 ℃

精密稱(chēng)取甲醇0.046 8 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

精密稱(chēng)取安乃近0.500 1 g、0.500 0 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液各1.0 μL，在其他條件不變，柱溫62 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項(xiàng)下柱溫62 ℃檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 耐用性項(xiàng)下柱溫62 ℃檢測(cè)結(jié)果Table 7 Robustness testing result of column temperature 62 ℃

由表7 可知，柱溫在60、58 和62℃條件下，樣品均未檢測(cè)到甲醇，甲醇的RSD＜5.0%，符合規(guī)定。

2.8.3 進(jìn)樣口溫度

進(jìn)樣口溫度在200、195 和205 ℃條件下進(jìn)行。

2.8.3.1 進(jìn)樣口195 ℃

分別吸取柱溫62 ℃項(xiàng)下的溶劑、標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液各1.0 μL，在其他條件不變，進(jìn)樣口溫度195 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項(xiàng)下進(jìn)樣口195℃檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 耐用性項(xiàng)下進(jìn)樣口195℃檢測(cè)結(jié)果Table 8 Robustness testing result of injection port 195 ℃

2.8.3.2 進(jìn)樣口200 ℃（同柱溫60 ℃）

精密稱(chēng)取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

精密稱(chēng)取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液各1.0 μL，在正常條件下，注入氣相色譜儀中，標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項(xiàng)下進(jìn)樣口200 ℃檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表9。

表9 耐用性項(xiàng)下進(jìn)樣口200 ℃檢測(cè)結(jié)果Table 9 Robustness testing result of injection port 200 ℃

2.8.3.3 進(jìn)樣口205 ℃

精密稱(chēng)取甲醇0.044 7 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

精密稱(chēng)取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液各1.0 μL，在其他條件不變，進(jìn)樣口205 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項(xiàng)下進(jìn)樣口205 ℃檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 耐用性項(xiàng)下進(jìn)樣口205 ℃檢測(cè)結(jié)果Table 10 Robustness testing result of injection port 205 ℃

由表10 可知，進(jìn)樣口溫度在200 ℃、195 ℃和205 ℃條件下，樣品中均為檢測(cè)到甲醇，甲醇的RSD 為0，＜5.0%，符合規(guī)定。

2.9 3 批樣品的測(cè)定

取3 批樣品，按照2.1.1 項(xiàng)下描述的方法進(jìn)行檢測(cè)，3 批樣品殘留甲醇測(cè)定的結(jié)果分別為28×10-6，16×10-6，22×10-6。安乃近樣品中殘留甲醇含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表11。

表11 安乃近樣品中殘留甲醇含量檢測(cè)結(jié)果Table 11 Residual methanol content in the metamizole sodium samples

3 結(jié) 語(yǔ)

本文以DB-WAX 柱（30 m×0.32 mm×0.50 um），F(xiàn)ID 檢測(cè)器，在程序升溫條件下進(jìn)行檢測(cè)安乃近殘留溶劑甲醇的含量，具有操作簡(jiǎn)單、誤差小，方便實(shí)驗(yàn)室操作的優(yōu)點(diǎn)。使用DMF 作溶劑，溶劑峰與甲醇能很好的分離，該氣相色譜法檢測(cè)甲醇溶液線(xiàn)性關(guān)系良好，線(xiàn)性方程Y=171.24 x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。該方法能準(zhǔn)確可靠的測(cè)定安乃近殘留溶劑甲醇的含量，為提高安乃近產(chǎn)品的質(zhì)量提供了保障。