范學(xué)亮， 王中山， 王春鋒

（鄭州金域臨床檢驗(yàn)中心 病理科， 河南 鄭州 450016）

三陰性乳腺癌 （TNBC） 是雌激素受體、 孕激素受體、 表皮生長(zhǎng)因子2 均表達(dá)為陰性的一類乳腺癌。 相比其他乳腺癌，TNBC 的發(fā)病年齡更小， 侵襲性更強(qiáng)， 對(duì)激素不敏感， 預(yù)后較差， 嚴(yán)重危及患者生命［1］。 1－磷酸神經(jīng)鞘氨醇受體1 （S1PR1）是具有生物活性的鞘脂類代謝物， 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－3（Caspase－3） 是Caspase 家族的一種［2］。 研究［3］顯示S1PR1、Caspase－3 在腫瘤細(xì)胞的增殖、 侵襲過程中起到了重要作用，而TNBC 的發(fā)生發(fā)展離不開細(xì)胞的異常增殖。 本研究探討S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 中的表達(dá)及其與病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料回顧性分析2021 年8 月至2022 年8 月我中心76 例乳腺癌患者的病歷資料， 其中TNBC 患者20 例 （TNBC組）， 非TNBC 患者56 例 （非TNBC 組）。

1.2 檢測(cè)方法①標(biāo)本處理。 將術(shù)中切除的乳腺癌組織標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定， 石蠟包埋， 切片機(jī)連續(xù)4 μm 切片；之后將標(biāo)本切片放在烤片機(jī)上烘烤2 h， 并在60 ℃恒溫箱中靜置一夜。 ②檢測(cè)操作。 采用免疫組化EnVision 法染色并檢測(cè)標(biāo)本組織中S1PR1、 Caspase－3 表達(dá)。 在0.01 mmol／L 檸檬酸鈉緩沖液中高溫高壓修復(fù)切片抗原， 先用3% H2O2孵育20 min， 再用5% BSA 封閉30 min， 分別 滴加S1PR1、 Caspase－3 一抗，在4 ℃下孵育過夜； 在室溫下滴加HRP 標(biāo)記的抗兔IgG 孵育50 min， 并通過DAB 顯色； 之后用蘇木精復(fù)染、 脫水、 封片。 以陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照， 以PBS 液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定采用數(shù)字切片掃描儀將免疫組化切片轉(zhuǎn)換為數(shù)字切片， 并用相關(guān)軟件進(jìn)行圖像處理判讀。 細(xì)胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕色或淺棕色顆粒為Caspase－3 陽(yáng)性細(xì)胞， 細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色為S1PR1 陽(yáng)性細(xì)胞。 染色強(qiáng)度按比例計(jì)數(shù)后， 根據(jù)百分比進(jìn)行分類， 細(xì)胞總數(shù)200 個(gè)， 陽(yáng)性細(xì)胞占比≤5%為陰性 （－）， 5%＜陽(yáng)性細(xì)胞≤25%為弱陽(yáng)性 （＋）， 25%＜陽(yáng)性細(xì)胞≤50%為陽(yáng)性（＋＋）， 陽(yáng)性細(xì)胞＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性 （＋＋＋）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。 計(jì)量資料以±s 表示， 采用t 檢驗(yàn)； 計(jì)數(shù)資料以n （%） 表示， 采用χ2檢驗(yàn)。 P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床病理特征TNBC 組年齡≤50 歲11 例， ＞50 歲9 例；絕經(jīng)前9 例， 絕經(jīng)后11 例； 腫瘤直徑≤2 cm 8 例， 腫瘤直徑＞2 cm 12 例； 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9 例， 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移11 例； TNM 分期Ⅰ期6 例， Ⅱ期9 例， Ⅲ期5 例； 組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)3 例， Ⅱ級(jí)12 例， Ⅲ級(jí)5 例。 非TNBC 組年齡≤50 歲31 例， ＞50 歲25例； 絕經(jīng)前23 例， 絕經(jīng)后33 例； 腫瘤直徑≤2 cm 21 例， 腫瘤直徑＞2 cm 35 例； 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36 例， 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例； TNM 分期Ⅰ期17 例， Ⅱ期26 例， Ⅲ期13 例； 組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)8 例， Ⅱ級(jí)42 例， Ⅲ級(jí)6 例。 兩組的臨床病理特征均無明顯差異 （P ＞0.05）。

2.2 S1PR1、 Caspase－3 表達(dá)TNBC 組標(biāo)本中S1PR1、 Caspase－3 的陽(yáng)性表達(dá)率高于非TNBC 組 （P ＜0.05）。 見表1。

表1 兩組乳腺癌標(biāo)本中的S1PR1、 Caspase－3 表達(dá)比較 ［n （%）］

2.3 S1PR1、 Caspase－3 陽(yáng)性表達(dá)與TNBC 病理特征的關(guān)系不同年齡、 月經(jīng)狀況、 腫瘤直徑、 組織學(xué)分級(jí)的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達(dá)無明顯差異 （P ＞0.05）； 但不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、 TNM 分期的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達(dá)存在差異 （P ＜0.05）。 見表2。

表2 S1PR1、 Caspase－3 陽(yáng)性表達(dá)與TNBC 病理特征的關(guān)系［n （%）］

3 討論

TNBC 作為乳腺癌的一種， 因其惡性度高且無靶向藥物治療指征而受到臨床關(guān)注。 在基因表達(dá)譜上， TNBC 具有顯著的分子水平上的異質(zhì)性， 且該種異質(zhì)性使得其生物學(xué)行為存在差異， 所以需要進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行分析， 以便更好地進(jìn)行分類管理。 S1PR1 是S1PR 的一種， 與已發(fā)現(xiàn)的其他4 種S1PR 都屬于G 蛋白偶聯(lián)受體， 既參與了細(xì)胞生長(zhǎng)、 分化、 遷移、 免疫應(yīng)答等生理過程， 又在多種惡性腫瘤的發(fā)生、 發(fā)展中起到了一定作用［4］。 Caspase－3 所在的Caspase 家族是調(diào)控細(xì)胞凋亡的核心機(jī)制， 被認(rèn)為是Caspase 家族最關(guān)鍵的一類凋亡執(zhí)行細(xì)胞。當(dāng)Caspase－3 表達(dá)減弱或缺失時(shí)， 可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖或惡性轉(zhuǎn)化， 在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。

本研究結(jié)果顯示， TNBC 組標(biāo)本中S1PR1、 Caspase－3 的陽(yáng)性表達(dá)率高于非TNBC 組 （P ＜0.05）， 提示S1PR1、 Caspase－3在TNBC 中表達(dá)升高。 研究［5］表明， Caspase－3 在乳腺癌組織中的表達(dá)與患者的年齡、 月經(jīng)狀況無關(guān) （P ＞0.05）， 與TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān) （P ＜0.05）。 本研究結(jié)果顯示， 不同年齡、 月經(jīng)狀況、 腫瘤直徑、 組織學(xué)分級(jí)的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達(dá)無顯著差異 （P ＞0.05）， 但不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、 TNM 分期的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達(dá)存 在 顯 著 差 異 （P ＜0.05）， 提 示S1PR1、 Caspase－3 表 達(dá) 與TNBC 患者的年齡、 月經(jīng)狀況、 腫瘤直徑、 組織學(xué)分級(jí)無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、 TNM 分期有關(guān)。 王娟等［6］的研究結(jié)果顯示， S1PR1 表達(dá)與TNBC 患者年齡、 腫瘤直徑及臨床分期無關(guān)（P ＞0.05）， 但S1PR1 高表達(dá)TNBC 患者的組織學(xué)分級(jí)高、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高 （P ＜0.05）， 與本研究結(jié)果一致。

綜上所述， S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 患者中表達(dá)升高，且兩者的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、 TNM 分期具有密切聯(lián)系。S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 患者中的表達(dá)特性可以為臨床診斷TNBC 及未來研發(fā)更有效的治療靶點(diǎn)藥物提供新的方向。