何焯根，楊榮源（廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120）

慢性支氣管炎是以咳嗽、咳痰為主要臨床表現(xiàn)，連續(xù)2 年每年發(fā)作至少3 個(gè)月，并排除其他慢性咳嗽病因（如支氣管擴(kuò)張等）的一種慢性非特異性炎癥性疾病，是臨床上慢性咳嗽的常見原因[1]。支氣管黏膜存在慢性非特異性的炎癥、呼吸道杯狀細(xì)胞過度產(chǎn)生和分泌黏液是其主要的病理變化[2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對慢性支氣管炎的病因并不清楚，大多數(shù)專家認(rèn)為與有害氣體、粉塵，如吸煙、灰塵、煙霧、空氣污染等有關(guān)，呼吸道感染也會進(jìn)一步加重慢性支氣管炎的進(jìn)展[3]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的治療主要以祛除誘因、鎮(zhèn)咳祛痰、抗感染等方式治療，但療效并不顯著，大部分患者癥狀仍會反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，不但嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，還可能進(jìn)一步發(fā)展為慢性阻塞性肺疾病，甚至肺心病。

中醫(yī)認(rèn)為該病屬“咳嗽”“久咳”“頑咳”范疇，多與肺氣虛弱有關(guān)，并可能涉及脾腎，中醫(yī)治療該病具有一定的優(yōu)勢。廣東省中醫(yī)院張忠德教授是全國名中醫(yī)、岐黃學(xué)者、享受國務(wù)院政府特殊津貼專家、全國老中醫(yī)藥專家學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)繼承工作指導(dǎo)老師、廣東省名中醫(yī)、嶺南甄氏雜病流派第四代傳人，師從嶺南醫(yī)學(xué)代表醫(yī)家甄夢初、國醫(yī)大師晁恩祥，中醫(yī)臨證30 余載，在中醫(yī)辨治呼吸系統(tǒng)疾病方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，尤其針對久咳、頑咳的中醫(yī)辨治具有獨(dú)到見解。他認(rèn)為本病多為“肺虛氣逆，兼夾頑痰”之證，以肺氣虛寒證為主，因此治療上以溫肺散寒、化痰止咳為法，自擬頑咳方治療慢性支氣管炎患者，在臨床上取得了很好的療效。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是為了解決中藥復(fù)方因成分多、作用靶點(diǎn)復(fù)雜，傳統(tǒng)藥理學(xué)研究方法難以闡明作用機(jī)制的問題而出現(xiàn)的新興研究方法。該方法通過構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)方法發(fā)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)核心，能對中藥復(fù)方復(fù)雜的作用機(jī)制進(jìn)行整體研究。目前，頑咳方治療慢性支氣管炎的分子機(jī)制仍不清楚。本研究擬運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)，探討張忠德教授自擬頑咳方治療慢性支氣管炎的藥理機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 頑咳方成分的獲取與篩選頑咳方由化橘紅、細(xì)辛、法半夏、前胡、紫菀、浙貝母、五味子共7 味中藥組成。從中醫(yī)藥系統(tǒng)藥理數(shù)據(jù)庫和分析平臺[4]（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP，https://www.tcmsp-e.com/）下載獲取頑咳方化學(xué)成分?？紤]中藥主要依靠口服吸收入血成分發(fā)揮效用，因此根據(jù)化學(xué)成分的口服生物利用度（oral bioavailability，OB）和類藥物指數(shù)（drug like index，DL），篩選OB ≥30%和DL ≥0.15 的成分進(jìn)行下游研究。

1.2 慢性支氣管炎疾病相關(guān)基因的獲取慢性支氣管炎疾病相關(guān)的基因通過比較毒物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫（Comparative Toxicogenomics Database，CTD，http://ctdbase.org/）數(shù)據(jù)庫和MalaCards 人類疾病數(shù)據(jù)庫（https://www.malacards.org/）獲取，有直接研究證據(jù)或者相關(guān)性分?jǐn)?shù)≥50 的基因被定義為慢性支氣管炎疾病相關(guān)基因。

1.3“藥物-成分-共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建通過TCMSP 獲取頑咳方中成分作用的人源性靶點(diǎn)，與慢性支氣管炎疾病相關(guān)基因取交集獲得共有靶點(diǎn)。篩選存在相互關(guān)系的藥物、成分、共有靶點(diǎn)，使用Cytoscape 3.8.2 軟件構(gòu)建“藥物-成分-共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)并可視化。

1.4 GO 功能和KEGG 信號通路富集分析基因本位論（Gene Ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）信號通路富集分析使用WebGestalt 在線基因集分析工具（http://www.webgestalt.org/）進(jìn)行。將共有靶點(diǎn)基因輸入網(wǎng)站進(jìn)行富集分析，使用Benjamini-Hochberg 法降低錯誤發(fā)現(xiàn)率（False discovery rate，F(xiàn)DR）校正P值。校正P值小于0.05 的GO 條目或信號通路被認(rèn)為是顯著富集，剔除與研究疾病完全無關(guān)的信號通路。

1.5 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析共有靶點(diǎn)輸入STRING 11.5 在線數(shù)據(jù)庫（https://string-db.org/）構(gòu)建蛋白相互作用（Protein-protein interation，PPI）網(wǎng)絡(luò)。兩個(gè)靶點(diǎn)蛋白間的聯(lián)合分?jǐn)?shù)（combined score）大于0.9 被認(rèn)為存在互作。PPI 網(wǎng)絡(luò)的可視化和核心網(wǎng)絡(luò)篩選均使用Cytoscape 3.8.2 進(jìn)行。使用Cytoscape 軟件中的分子復(fù)合檢測（Molecular Complex Detection，MCODE）和cytoHubba 插件對共有靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯粤私饩W(wǎng)絡(luò)中的核心節(jié)點(diǎn)（靶點(diǎn)）。使用cytoHubba 插件計(jì)算最大團(tuán)中心（Maximal Clique Centrality，MCC）值來衡量靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的重要性，使用MCODE 插件的聚類算法輸出網(wǎng)絡(luò)中的核心子網(wǎng)絡(luò)。

1.6 分子對接CB-Dock 2[5]（https://cadd.labshare.cn/cb-dock2）是基于Autodock Vina 內(nèi)核的在線分子盲對接工具，可在對接位置不明確情況下進(jìn)行小分子和靶點(diǎn)蛋白的分子對接，以明確兩者的結(jié)合能力。靶點(diǎn)蛋白的三維結(jié)構(gòu)從蛋白數(shù)據(jù)銀行（Protein Data Bank，PDB，http://www.rcsb.org/）數(shù)據(jù)庫獲取，頑咳方成分的分子結(jié)構(gòu)（mol2 格式）從TCMSP 下載。靶點(diǎn)蛋白與分子的結(jié)合能力用Vina 對接分?jǐn)?shù)衡量。

2 結(jié)果

2.1 頑咳方成分與慢性支氣管炎疾病相關(guān)基因的獲取從TCMSP 數(shù)據(jù)庫共獲得頑咳方中化學(xué)成分605 個(gè)，根據(jù)OB 和DL 參數(shù)篩選及去重后共有中藥成分94 個(gè)，其中化橘紅11 個(gè)、細(xì)辛19 個(gè)、半夏16 個(gè)、前胡29 個(gè)、紫菀21 個(gè)、浙貝母7 個(gè)、五味子10 個(gè)，重復(fù)成分19 個(gè)。從CTD 和MalaCards 在線數(shù)據(jù)庫上檢索，共獲得符合條件的慢性支氣管炎疾病基因164 個(gè)。

2.2“藥物-成分-共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果從TCMSP 數(shù)據(jù)庫得到頑咳方成分作用的人源化靶點(diǎn)291 個(gè)，與慢性支氣管炎疾病基因取交集，共獲得共有靶點(diǎn)81 個(gè)，詳見圖1。篩選存在相互關(guān)系的藥物、成分、共有靶點(diǎn)共同構(gòu)建“藥物-成分-共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。構(gòu)建結(jié)果顯示該網(wǎng)絡(luò)共有節(jié)點(diǎn)149 個(gè)，其中中藥節(jié)點(diǎn)7 個(gè)，中藥成分節(jié)點(diǎn)61 個(gè)，共有靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)81 個(gè)。網(wǎng)絡(luò)共有邊416 條，其中中藥和中藥成分的邊78 條，中藥成分和共有靶點(diǎn)間的邊338 條，詳見圖2。

圖1 頑咳方靶點(diǎn)與慢性支氣管炎共有靶點(diǎn)的韋恩圖Figure 1 Venn diagram of the shared targets of the Wanke Recipe and chronic bronchitis

圖2 頑咳方治療慢性支氣管炎的“藥物-成分-共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖Figure 2 “Drugs-components-shared targets” network diagram of the Wanke Recipe for the treatment of chronic bronchitis

2.3 GO 功能富集分析使用WebGestalt 在線工具，分別從生物過程（BP）、細(xì)胞組分（CC）和分子功能（MF）三方面對頑咳方作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO 富集分析，詳見圖3。在BP 方面，顯著富集的GO 條目涉及細(xì)胞運(yùn)動、氧代謝、脂多糖、皮質(zhì)醇的代謝反應(yīng)和調(diào)節(jié)等方面；富集的細(xì)胞組分主要為分泌顆粒腔體、細(xì)胞質(zhì)囊泡腔體、囊泡腔和胞外基質(zhì)等；在分子功能方面，與細(xì)胞因子的活性及受體結(jié)合、配體受體結(jié)合活性和血紅素結(jié)合方面有顯著相關(guān)性。

圖3 頑咳方治療慢性支氣管炎靶點(diǎn)的GO 功能富集分析Figure 3 GO functional enrichment analysis of the targets of the Wanke Recipe for the treatment of chronic bronchitis

2.4 KEGG 信號通路富集分析使用WebGestalt 對頑咳方作用靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 信號通路富集分析，結(jié)果顯示這些靶點(diǎn)主要富集在免疫炎癥相關(guān)的信號通路，如腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素17（IL-17）、Th17 細(xì)胞分化、T 細(xì)胞受體等信號通路；與病原體識別和先天免疫應(yīng)答有關(guān)的Toll 樣和NOD 樣受體信號通路；其他信號通路包括松弛素、細(xì)胞凋亡、缺氧誘導(dǎo)因子1（HIF-1）和C 型凝集素受體信號通路，詳見圖4。

圖4 頑咳方治療慢性支氣管炎靶點(diǎn)KEGG 信號通路富集分析Figure 4 KEGG signaling pathway enrichment analysis of the targets of the Wanke Recipe for the treatment of chronic bronchitis

2.5 靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析使用STRING 和Cytoscape 構(gòu)建靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，詳見圖5-A。頑咳方成分共作用于81 個(gè)靶點(diǎn)，其中76 個(gè)靶點(diǎn)蛋白至少與1 個(gè)其他靶點(diǎn)存在相互作用，5 個(gè)靶點(diǎn)不與任何其他靶點(diǎn)發(fā)生相互作用。76 個(gè)靶點(diǎn)蛋白共存在354 個(gè)相互作用的邊，蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)富集P值＜1.0×10-16，意味著這些靶點(diǎn)蛋白間的相互作用比相同規(guī)模和分布的隨機(jī)蛋白集合的相互作用更多，這些靶點(diǎn)可能具有更強(qiáng)的生物學(xué)聯(lián)系。使用cytoHubba 軟件計(jì)算MCC 以衡量靶點(diǎn)在互作網(wǎng)絡(luò)中的重要性和中心度，排前10 位的靶點(diǎn)蛋白為：TNF、IL6、IL1B、IL1A、CCL2、JUN、RELA、CXCL8、IL4、IL10。使用MCODE 計(jì)算互作網(wǎng)絡(luò)中的核心子網(wǎng)絡(luò)，共獲得子網(wǎng)絡(luò)4 個(gè)。子網(wǎng)絡(luò)1（圖5-B）的靶點(diǎn)有IL4、IL10、CXCL10、IL1B、CCL2、IL6、CXCL8、MYC、IL1A、TNF、NFKBIA、CXCL2，主要屬于炎癥相關(guān)的白介素信號系統(tǒng)（主要為IL-17）和CXCL 趨化因子過程；子網(wǎng)絡(luò)2（圖5-C）中的靶點(diǎn)有EDN1、JUN、AKT1、PRKCB、GSK3B、NOS2、MAPK1、CREB1、TP53、RELA，主要屬于松弛素信號通路和B 細(xì)胞受體信號通路過程；子網(wǎng)絡(luò)3（圖5-D）中的靶點(diǎn)有 IL2、MAPK8、MAPK14、MAPK3、FOS、TGFB1、NR3C1，主要屬于T 細(xì)胞（Th1、Th2、Th17 等）分化和T 細(xì)胞受體途徑。子網(wǎng)絡(luò)4（圖5-E）中的靶點(diǎn)有CCND1、CASP3、RUNX2、CYCS、CDKN1A、CASP8、CASP9、MCL1，主要屬于p53 信號通路和細(xì)胞凋亡途徑。

圖5 頑咳方治療慢性支氣管炎靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)及核心子網(wǎng)絡(luò)圖Figure 5 Interaction networks and core sub-networks of the targeted protein-protein interaction（PPI）of the Wanke Recipe for the treatment of chronic bronchitis

2.6 核心靶點(diǎn)與頑咳方成分的分子對接選取MCODE 得分排前2 位的核心靶點(diǎn)TNF 和IL-6，與作用于這些靶點(diǎn)的頑咳方成分進(jìn)行在線分子對接。結(jié)果顯示，這些成分與核心靶點(diǎn)對接分?jǐn)?shù)均≤-6.5，提示均能形成穩(wěn)定的結(jié)合結(jié)構(gòu)，詳見表1 和圖6。

表1 頑咳方治療慢性支氣管炎核心靶點(diǎn)與有效成分分子對接結(jié)果Table 1 Molecular docking results of core targets and active ingredients in the treatment of chronic bronchitis of the Wanke Recipe

圖6 分子對接示意圖Figure 6 Schematic diagram of molecular docking

3 討論

慢性支氣管炎是臨床常見的一種慢性非特異性的炎癥性疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對其確切機(jī)制尚不明晰，有害氣體、粉塵，如吸煙、灰塵、煙霧、空氣污染等是慢性支氣管炎的常見外因，會誘發(fā)、加重慢性支氣管炎的發(fā)生[3]。在分子機(jī)制層面，慢性支氣管炎的發(fā)生與免疫、炎癥關(guān)系最為密切。比如促炎基因TNF 的多態(tài)性會顯著增加慢性支氣管炎發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)[6]，暴露于香煙的慢性支氣管炎氣道的炎癥因子IL-17 顯著升高[7-8]，識別氣道微生物并激活炎癥反應(yīng)的Toll 樣受體和NOD 樣受體在慢性支氣管炎中也存在失調(diào)[9-13]。此外，慢性支氣管炎多存在氣道的纖維化。張忠德教授認(rèn)為本病屬于久咳、頑咳范疇，病機(jī)多為“肺虛氣逆，兼夾頑痰”之證。肺氣逆與氣道炎癥應(yīng)激的表現(xiàn)頗為相似，頑痰屬于有形之邪，易被外邪引動，具有慢性長期的特點(diǎn)，這與慢性支氣管炎反復(fù)發(fā)作，易受外界粉塵、污染物誘發(fā)，氣道存在纖維化等特點(diǎn)近似。

本研究結(jié)果顯示，頑咳方治療慢性支氣管炎的機(jī)制是多途徑、多靶點(diǎn)的。其中最為重要的是調(diào)控炎癥和免疫相關(guān)通路。富集分析結(jié)果顯示，頑咳方可以調(diào)控免疫細(xì)胞和炎癥細(xì)胞因子相關(guān)的信號通路和功能，包括TNF 信號通路和細(xì)胞對TNF 反應(yīng)的功能、Th17 和IL-17 信號通路、細(xì)胞因子活性和受體活性功能等。TNF 是一種多功能的促炎細(xì)胞因子，主要通過TNF 受體-1 和TNF 受體-2 兩種受體發(fā)揮作用，對脂質(zhì)代謝、凝血、胰島素抵抗和內(nèi)皮功能都有影響，同時(shí)也是反映炎癥程度的生物標(biāo)記物[14-15]。研究[6]表明，TNF 基因的多態(tài)性會顯著增加慢性支氣管炎發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)，TNF 在慢性支氣管炎中可能加重了炎癥反應(yīng)，發(fā)揮了重要的病理作用。因此通過調(diào)控TNF 通路可能可以降低氣道炎癥，從而改善癥狀。Th17 是一類促炎的T 輔助細(xì)胞，分泌的細(xì)胞因子主要為IL-17，在維持黏膜屏障和促進(jìn)黏膜表面病原體清除方面發(fā)揮重要作用[16]。IL-17 介導(dǎo)的反應(yīng)可在上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞通過分泌TNF-α、CXCL1 和CXCL8 等應(yīng)答IL-17 信號，促進(jìn)中性粒細(xì)胞募集和炎癥反應(yīng)[17]。研究[7-8]表明，暴露于慢性支氣管炎高危因素香煙會顯著增高氣道的IL-17 水平。而調(diào)控IL-17 可以抑制呼吸道的抗原呈遞，部分抑制氣道的免疫反應(yīng)[18]。一些草藥組合可通過調(diào)控IL-17/STAT3 信號通路抑制中性粒細(xì)胞性氣道炎癥[19]。頑咳方治療靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)分析也表明，核心子網(wǎng)絡(luò)1 和3 分別屬于白介素信號系統(tǒng)（主要為IL-17）和T 細(xì)胞（Th1、Th2、Th17 等）分化和T 細(xì)胞受體途徑。這些研究均表明，頑咳方可能通過調(diào)控Th17 免疫細(xì)胞和TNF、IL-17 等炎癥細(xì)胞因子途徑抑制支氣管炎癥，從而治療慢性支氣管炎。

頑咳方可能對松弛素信號通路具有調(diào)控作用。慢性支氣管炎由于長期的慢性炎癥普遍存在氣道的纖維化[20-21]。而松弛素具有強(qiáng)大的抗纖維化作用。研究表明，松弛素能夠通過基質(zhì)金屬蛋白酶分解膠原蛋白的激活劑刺激膠原蛋白降解，抑制膠原蛋白在氣道中的積累[22]。此外，松弛素可抑制氣道肥大細(xì)胞分泌和血小板活化，這是慢性咳嗽和氣道高反應(yīng)的重要機(jī)制之一[23]。松弛素在慢性支氣管炎發(fā)病和治療中的作用尚未十分清晰，而本研究結(jié)果顯示頑咳方作用靶點(diǎn)顯著富集于松弛素信號通路，靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)中的核心子網(wǎng)絡(luò)2 主要屬于松弛素信號通路，提示了松弛素通路在慢性支氣管炎治療中的作用。頑咳方是如何通過松弛素信號通路治療慢性支氣管炎的機(jī)制需要更深入的研究。

頑咳方對Toll 樣受體和NOD 樣受體信號通路具有調(diào)控作用。Toll 樣受體和NOD 樣受體均與病原體的識別和先天免疫應(yīng)答有關(guān)。與氣道黏膜屏障接觸的微生物會被這兩種受體識別，從而激活免疫細(xì)胞反應(yīng)。這兩種受體介導(dǎo)的途徑均與慢性和特發(fā)性的炎癥性疾病密切相關(guān)[24]。比如TLR2 受體在灰塵所致的慢性支氣管炎氣道中高表達(dá)[9]。TLR2 和TL4 受體在兒童慢性支氣管炎中顯著升高，并介導(dǎo)了中性粒細(xì)胞氣道炎癥[10]。TLR4 在氣道炎癥和黏液高分泌中起重要作用，通過干預(yù)該通路可抑制慢性支氣管炎氣道炎癥和黏液高分泌[11-12]。而NOD 樣受體則介導(dǎo)了嗜酸性粒細(xì)胞與支氣管上皮細(xì)胞相互作用的激活[13]。我們的研究顯示，頑咳方可能通過調(diào)控Toll 樣受體和NOD 樣受體通路發(fā)揮治療慢性支氣管炎的作用。

此外，頑咳方還可以調(diào)控凋亡、p53、HIF-1 和C 型凝集素受體等信號通路，但這些通路在慢性支氣管炎中的作用尚不十分清楚，這些機(jī)制是否參與了慢性支氣管炎的發(fā)生發(fā)展，以及頑咳方是否通過調(diào)控這些通路對慢性支氣管炎發(fā)揮治療作用，需要在未來開展深入的機(jī)制研究。

對共有靶點(diǎn)構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)渌惴ㄟM(jìn)行網(wǎng)絡(luò)核心計(jì)算，發(fā)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)中最核心的2 個(gè)靶點(diǎn)為TNF 和IL-6，均屬于炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子。TNF 的作用已進(jìn)行了討論，而IL-6 可促進(jìn)幼稚CD4+T 細(xì)胞的特異性分化，從而在先天免疫反應(yīng)與獲得性免疫反應(yīng)的聯(lián)系中發(fā)揮重要作用，與TNF 信號通路、Th17/IL-17 信號通路存在相互作用[25]。通過MCODE 計(jì)算發(fā)現(xiàn)4 個(gè)核心子網(wǎng)絡(luò)。子網(wǎng)絡(luò)1 與炎癥細(xì)胞因子（主要為IL-17）和CXCL 趨化因子過程有關(guān)；子網(wǎng)絡(luò)2 主要與松弛素信號通路有關(guān)；子網(wǎng)絡(luò)3屬于T 細(xì)胞（Th1、Th2、Th17 等）分化和T 細(xì)胞受體途徑；子網(wǎng)絡(luò)4 主要屬于p53 信號通路和細(xì)胞凋亡途徑。這與富集分析中共有靶點(diǎn)主要富集在炎癥和免疫途徑、松弛素信號通路結(jié)果基本一致，并進(jìn)一步縮小了范圍，明確了其中的核心靶點(diǎn)。

分子對接實(shí)驗(yàn)和一些相似中藥的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步明確或佐證了頑咳方對核心靶點(diǎn)的調(diào)控作用。分子對接結(jié)果顯示，頑咳方成分能與核心靶點(diǎn)TNF、IL-6 形成穩(wěn)定的復(fù)合結(jié)構(gòu)，明確了頑咳方對核心靶點(diǎn)的作用。此外，一些相似中藥復(fù)方的實(shí)驗(yàn)研究也佐證了本研究的結(jié)果。董婭慧等[26]的研究顯示，同樣含中藥紫菀和有效成分木犀草素、懈皮素的中藥復(fù)方止嗽散可顯著降低慢性支氣管炎大鼠血清IL-6 和TNF-α 含量，下調(diào)肺組織缺氧相關(guān)蛋白HIF-1α；應(yīng)丹萍等[27]應(yīng)用含半夏、紫菀的自擬方可降低臨床慢性支氣管炎患者血清IL-6 和TNF-α 水平；含有半夏的中藥復(fù)方可以降低CD4+IL-17+T 細(xì)胞（Th17）含量治療慢性支氣管炎[28]。這些實(shí)驗(yàn)研究間接證實(shí)了含有與頑咳方相似成分的中藥復(fù)方可能通過調(diào)控核心靶點(diǎn)IL-6、TNF 和關(guān)鍵通路IL-17/Th17 發(fā)揮治療作用，但其他分子機(jī)制仍需要在未來開展更多的機(jī)制研究。

綜上所述，張忠德教授自擬經(jīng)驗(yàn)方頑咳方對慢性支氣管炎的藥理機(jī)制是多靶點(diǎn)、多通路的復(fù)雜過程，其機(jī)制可能主要通過調(diào)節(jié)TNF、Th17/IL-17 等炎癥和免疫相關(guān)通路、松弛素、Toll 樣和NOD 樣受體信號通路發(fā)揮治療作用。基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果，可進(jìn)一步開展多靶點(diǎn)、多通路的藥理學(xué)驗(yàn)證，為深入闡明名中醫(yī)有效經(jīng)驗(yàn)方的作用機(jī)制提供新思路。