李思琪　江芊　黃英　胡璇　王凱　官玲亮　于福來　龐玉新

關(guān)鍵詞：龍腦樟；右旋龍腦；相對(duì)含量；抑菌活性；天然冰片

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

龍腦樟[Cinnamomum camphora （L.） Presl]是樟科樟屬樟的多種化學(xué)型[1]之一，通體以枝葉經(jīng)陰干后提取的產(chǎn)物中右旋龍腦含量最高[2]。天然冰片是近乎純凈的右旋龍腦[3]，原為龍腦香科龍腦香的樹干經(jīng)水蒸氣蒸餾而得的白色結(jié)晶[4]，現(xiàn)為植物樟同法而得，具有提神醒腦、清熱止痛[5]之功效，可用于治療熱癥神昏、驚癇痰迷、燒燙傷以及氣閉耳聾等一系列五官閉癥，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、美容以及食品等行業(yè)。由于其主要原產(chǎn)地蘇門答臘已禁止伐樹取腦[6]導(dǎo)致產(chǎn)量下降，進(jìn)口價(jià)格上升，而天然冰片過去在我國(guó)無本地出產(chǎn)，鑒于此，20 世紀(jì)末我國(guó)科研人員找到3 種可高效提取天然冰片的樟科植物，分別為龍腦樟、油樟以及陰香[7]，研究發(fā)現(xiàn)這3 種植物以龍腦樟提取的產(chǎn)物中天然冰片純度最高，右旋龍腦含量在85%以上，因此可將其作為提取天然冰片的首選材料。

目前，龍腦樟的相關(guān)研究主要集中在天然冰片提取、組織培養(yǎng)及質(zhì)量評(píng)價(jià)等方面，在產(chǎn)地方面的研究相對(duì)較少，不同產(chǎn)地的生境條件不同，生長(zhǎng)的龍腦樟中化學(xué)成分含量具有一定差異，作為提取天然冰片的最佳植物，這種差異是影響天然冰片臨床藥效的重要因素。因此，尋找龍腦樟的最佳產(chǎn)地是今后規(guī)范種植和實(shí)現(xiàn)天然冰片自產(chǎn)的基礎(chǔ)。張宇思等[8]對(duì)湖南、江西、浙江以及福建4 個(gè)產(chǎn)地的龍腦樟進(jìn)行成分分析，而龍腦樟喜溫喜濕，南方大部分地區(qū)氣候均適宜其種植；在體外抑菌研究方面，楊鵬飛等[9]、丁雄等[10]圍繞多個(gè)菌種展開研究，發(fā)現(xiàn)龍腦樟枝葉提取物對(duì)這些菌種均表現(xiàn)出不同程度的抑菌活性，尤其對(duì)能引起肺曲霉病、皮膚感染以及食物發(fā)霉等的煙曲霉、白色念珠菌以及球毛殼霉的抑菌效果更為顯著，但未見對(duì)常見的食源性腸道傳染性致病菌傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌的報(bào)道，更無產(chǎn)地間的類比研究。

因此，本研究擬采用GC-MS 技術(shù)對(duì)國(guó)內(nèi)8個(gè)產(chǎn)地龍腦樟枝葉提取物進(jìn)行成分分析，并分別對(duì)3 株需氧菌傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、大腸桿菌進(jìn)行產(chǎn)地間體外抑菌活性比較研究，旨在為龍腦樟枝葉提取物的品質(zhì)評(píng)價(jià)及天然冰片的資源開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料與試劑 2～3 年生[11]龍腦樟枝葉，2021 年11 月至2022 年2 月采自湖南新晃縣魚市鎮(zhèn)（湖南魚市）、湖南新晃縣波州鎮(zhèn)（湖南波州）、江西安福、江西吉水、江西都昌、廣東乳源、浙江余杭以及湖北遠(yuǎn)安，經(jīng)廣東藥科大學(xué)龐玉新研究員鑒定為樟科樟屬植物龍腦樟[Cinnamomumcamphora （L.） Presl]的新鮮枝葉，保存于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所的-80 ℃冰箱內(nèi)。腸炎沙門氏菌亞種（Salmonella enteritidissubsp， G-），傷寒沙門氏菌（Salmonella typhi， G-），腸道產(chǎn)毒素性的大腸桿菌（Escherichia coli， G-）均購(gòu)自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院。

色譜純甲醇，北京百靈威科技有限公司；氨芐青霉素（AMP 70080200），Biosharp 生物公司；100%乙醇（分析醇），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水為滅菌蒸餾水；水解酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（MHA）與水解酪蛋白胨肉湯培養(yǎng)基（MHB）購(gòu)自青島高科技工業(yè)園海博生物科技有限公司；胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）與胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備 手提式高速粉碎機(jī)（YC-04A），廣州金本機(jī)械設(shè)備有限公司；水蒸氣蒸餾裝置， 上海予申儀器有限公司； 氣質(zhì)聯(lián)用儀（7890A/5975C），美國(guó)Agilent 公司；恒溫振蕩培養(yǎng)箱（HZQ-X160），太倉(cāng)市豪誠(chéng)實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司；紫外可見分光光度計(jì)（N4S），上海儀電分析儀器有限公司；SpectraMax Plus384 酶標(biāo)（SpectraMax Plus384），美國(guó)Molecular Devices公司；電子天平（BSA124S-CW），賽多利斯科學(xué)儀器（ 北京） 有限公司； 立式蒸汽滅菌鍋（DGL-50GI），江蘇登冠醫(yī)療器械有限公司；凈化工作臺(tái)（SW-CJ-IF），蘇州廣源凈化科技有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱（DNP-9052BS-Ⅲ），上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司。

1.2 方法

1.2.1 天然冰片的提取 采用水蒸氣蒸餾法提取龍腦樟提取物（天然冰片），用無菌蒸餾水清洗龍腦樟新鮮枝葉表面雜質(zhì)，然后用白色紗布吸干水分，并于環(huán)境溫度（20±2）℃下通風(fēng)、避光處陰干后[12]剪碎，每個(gè)產(chǎn)地樣品稱取400 g 置于2000 mL圓底燒瓶中，加入適量無菌水與沸石，料水比1︰12[13]，連接蒸餾裝置，加熱至沸騰后，設(shè)置電熱套額定溫度為160～169 ℃，保持微沸3 h，至不再有晶體析出，再將提取物取出置于小棕瓶?jī)?nèi)稱重，并于-4 ℃冰箱內(nèi)保存。

1.2.2 供試品溶液的配制 將提取物用色譜純甲醇配制成濃度為1 mg/mL 的供試品溶液，再經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜過濾[14]后注入色譜瓶。

1.2.3 GC-MS 分析 色譜條件： 色譜柱為CYCLOSIL-B（0.25 mm×30 m， 0.25 μm）毛細(xì)管柱， 色譜柱流速1 mL/min， 載氣為高純氦氣（99.999%），載氣流速15 mL/min，進(jìn)樣量1 μL，進(jìn)樣口溫度220 ℃，程序升溫：以60 ℃為起始溫度，保持2 min，5 ℃/min 升至130 ℃，保持5 min，再以5 ℃/min 升至175 ℃，后運(yùn)行1 min，分流比20︰1。

質(zhì)譜條件：EI 源，溶劑延遲6 min，離子源溫度230 ℃， 進(jìn)樣口溫度220 ℃， 掃描范圍45～500 amu。

1.2.4 供試菌懸浮液的制備 在無菌操作條件下，將低溫保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌接種至滅菌后的MHB 液體培養(yǎng)基內(nèi)，傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌接種至滅菌后的TSB 液體培養(yǎng)基內(nèi)，并于37 ℃培養(yǎng)12 h，再蘸取菌液于固體培養(yǎng)基中劃線，然后將接種板于37 ℃培養(yǎng)24 h，使之能形成單菌落，挑取典型單個(gè)菌落分別接種至滅菌后的MHB 和TSB 培養(yǎng)基中，于37 ℃培養(yǎng)18～24 h，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定菌液濃度OD600 為0.6～0.7，檢驗(yàn)純度后用相應(yīng)的培養(yǎng)液將菌液稀釋成1×10⁷CFU/mL 的菌懸液，備用。

1.2.5 抑菌圈測(cè)定 在無菌操作條件下，將高溫高壓滅菌后的MHA/TSA 培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿內(nèi)，待其凝固后將60 μL 菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面，靜置30 min，吸取20 μL 各產(chǎn)地藥液分別滴在藥敏紙片上，靜置30 s 后，放在已涂菌液的培養(yǎng)基上，封口，倒放，恒溫培養(yǎng)12 h，游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑并記錄。以直徑大小作為判定抑菌敏感度的指標(biāo)，將游標(biāo)卡尺測(cè)量結(jié)果取平均值，并按《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》中的標(biāo)準(zhǔn)來判別[15]：直徑均值小于10 mm 為抗藥，等于10 mm 為輕度敏感，11～15 mm 之間為中度敏感，16～20 mm 之間為高度敏感。將20 μL 氨芐青霉素（AMP）與100%乙醇分別滴在藥敏紙片上，分別作為陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組。

1.2.6 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定 在無菌操作條件下，取96孔微量板，用移液槍向每排1～11孔各加入100 μL 對(duì)應(yīng)的滅菌培養(yǎng)基；再吸取100 μL 相應(yīng)濃度的各產(chǎn)地藥液至第1 孔中，以此孔為起始濃度，對(duì)倍稀釋至第10 孔后，吸取100 μL 棄去；然后吸取100 μL 已配置的菌懸液依次加至第1～11 孔中，充分混勻[16]。1～10 孔為試驗(yàn)組，第11 孔不加藥液為對(duì)照組，吸取200μL培養(yǎng)基加至第12 孔，此為空白組。共8 個(gè)產(chǎn)地3個(gè)菌種，每個(gè)產(chǎn)地重復(fù)3 次，每個(gè)菌種重復(fù)2 次。隨后將96 微量孔板置于37 ℃培養(yǎng)，12 h 后取出，采用酶標(biāo)儀測(cè)定OD600 值，與陽性、陰性對(duì)照組比較計(jì)算，抑菌率達(dá)到80%的樣品濃度就為該受試菌種的最低抑菌濃度。將氨芐青霉素（AMP）和100%乙醇分別與菌液1︰1（各100 μL）加入空余孔內(nèi)，分別作為陽性對(duì)照組和陰性對(duì)照組。

1.2.7 最低殺菌濃度（MBC）測(cè)定 在無菌操作條件下，將MIC 濃度及上下各一個(gè)濃度組的上述混合液各取出50 μL，置于裝有相應(yīng)培養(yǎng)基的平板內(nèi)涂開，于37 ℃培養(yǎng)12 h，觀察有無菌體生長(zhǎng)。以無菌生長(zhǎng)相應(yīng)孔中的最低濃度即為龍腦樟粗體物對(duì)該受試菌種的最低殺菌濃度。

1.3 數(shù)據(jù)處理

結(jié)合質(zhì)譜對(duì)龍腦樟枝葉提取物成分進(jìn)行分析，質(zhì)譜分析結(jié)果在NIST 14.L 譜庫(kù)進(jìn)行檢索，對(duì)比定性，采用峰面積歸一化法檢測(cè)出各化合物的相對(duì)含量，并計(jì)算重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均值。通過SPSS 21.0 軟件采用單因素方差分析（one-wayANOVA）對(duì)龍腦樟枝葉提取物的抑菌圈直徑進(jìn)行差異分析（P<0.05）。采用Excel 2022 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 8 個(gè)產(chǎn)地龍腦樟化學(xué)成分的相對(duì)含量分析

通過GC-MS 分析，得到8 個(gè)產(chǎn)地龍腦樟的總離子流疊加色譜圖（圖1）。各組分的質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)，采用峰面積歸一化法檢測(cè)出了各個(gè)化合物的相對(duì)含量，所有產(chǎn)地?cái)?shù)據(jù)歸納匯總見表1，相對(duì)含量在0.1%以下的化合物未列出。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地龍腦樟葉提取物在其組成和相對(duì)含量上均具有一定差異。8 個(gè)產(chǎn)地的共有化學(xué)成分有8 種，分別為右旋龍腦、樟腦、d-α-蒎烯、莰烯、d-檸檬烯、α-葎草烯、桉葉油醇以及4-萜烯醇。2020 版《中國(guó)藥典》[17]規(guī)定天然冰片中右旋龍腦的含量不得低于96%，右旋龍腦也是影響天然冰片的臨床藥效的主要成分，其成分在8 個(gè)產(chǎn)地中的相對(duì)含量由高到低依次為湖北遠(yuǎn)安（82.47%）、江西安福（82.23%）、江西都昌（79.57%）、江西吉水（78.55%）、湖南波州（73.88%）、湖南魚市（70.77%）、浙江余杭（70.74%）、廣東乳源（41.63%）。結(jié)合其他共有成分可知，湖北遠(yuǎn)安的提取物中以右旋龍腦含量最高，α-葎草烯含量最低；廣東乳源的提取物中以右旋龍腦含量最低，樟腦含量最高。此外，在其他組成成分中，相對(duì)含量較高的成分有樟腦、桉葉油醇、d-檸檬烯、α-葎草烯、1-乙烯基-1-甲基-4-丙-2-亞基-2-丙-1-烯-2-基環(huán)己烷、（1，7，7-3 甲基降冰片烷-2-YL）乙酸等。另外，α-葎草烯在浙江余杭龍腦樟中的含量明顯高于其他7 個(gè)產(chǎn)地，樟腦在廣東乳源龍腦樟中的含量明顯高于其他7 個(gè)產(chǎn)地，對(duì)傘花烴僅在江西吉水樣品中有檢測(cè)出來，α-蒎烯僅在江西安福樣品中未檢出，β-月桂烯僅在湖南波州樣品中未檢出，檜烯和石竹烯僅在湖北遠(yuǎn)安樣品中未檢出。

2.2 龍腦樟枝葉提取物的體外抑菌活性

2.2.1 抑菌圈直徑8個(gè)產(chǎn)地的龍腦樟枝葉提取物對(duì)3 個(gè)受試菌種的抑菌圈直徑見表2，在1000 mg/mL 濃度下，均呈現(xiàn)出不同程度的抑制敏感性，在6 mm 藥敏紙片周圍均出現(xiàn)大小不同的清晰抑菌圈，且直徑均大于10 mm，表現(xiàn)為中高度敏感。由表2 可知，8 個(gè)產(chǎn)地的龍腦樟枝葉提取物對(duì)腸炎沙門氏菌表現(xiàn)出的藥敏性最強(qiáng)，其次為大腸桿菌，對(duì)傷寒沙門氏菌的藥敏性相對(duì)較弱，所有產(chǎn)地提取物的抑菌圈與陽性對(duì)照氨芐青霉素比較均有顯著性差異，而陰性對(duì)照100%乙醇并未表現(xiàn)出藥敏性。江西吉水的龍腦樟枝葉提取物對(duì)大腸桿菌的抑菌敏感性高于江西都昌、廣東乳源以及湖南波州（P<0.05）；湖北遠(yuǎn)安的龍腦樟枝葉提取物對(duì)傷寒沙門氏菌的抑菌敏感性高于江西都昌、江西吉水、廣東乳源、浙江余杭以及湖南波州（P<0.05）；湖北遠(yuǎn)安的龍腦樟枝葉提取物對(duì)腸炎沙門氏菌的抑菌敏感性高于江西都昌、江西安福、江西吉水、廣東乳源、浙江余杭以及湖南波州（P<0.05）。因此，江西吉水和湖北遠(yuǎn)安2 個(gè)產(chǎn)地的龍腦樟枝葉提取物分別對(duì)大腸桿菌、傷寒沙門氏菌以及腸炎沙門氏菌的抑菌敏感度高于其他產(chǎn)地，且湖北遠(yuǎn)安產(chǎn)龍腦樟同時(shí)對(duì)2 種菌種均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌活性。抑菌圈直徑大小在一定程度上直觀地反映了抑菌活性敏感度的強(qiáng)弱，直徑越大代表抑菌敏感度越強(qiáng)，而整體抑菌活性需結(jié)合其最低抑菌濃度和最低殺菌濃度來綜合判斷。

2.2.2 最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC） 8 個(gè)產(chǎn)地的龍腦樟枝葉提取物對(duì)3 個(gè)菌種均呈現(xiàn)出不同的抑制作用，MIC 值在250～1250 μg/mL 之間。其中，江西安福的龍腦樟枝葉提取物抑菌效果最好（MIC 值在250～500 μg/mL之間），以江西吉水的龍腦樟枝葉提取物對(duì)大腸桿菌和腸炎沙門氏菌，江西安福和湖北遠(yuǎn)安對(duì)傷寒沙門氏菌的抑制效果最好（表3）。8 個(gè)產(chǎn)地中，以湖南魚市、廣東乳源、浙江余杭以及湖南波州的龍腦樟枝葉提取物對(duì)3 個(gè)受試菌種的殺菌效果最佳（MBC 值均為500 μg/mL），而江西安福的龍腦樟枝葉提取物對(duì)大腸桿菌的殺菌效果相對(duì)較差，湖北遠(yuǎn)安和江西吉水的龍腦樟枝葉提取物對(duì)大腸桿菌，江西安福對(duì)傷寒沙門氏菌以及江西都昌和江西安福對(duì)腸炎沙門氏菌無殺菌效果（表4）。

研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地龍腦樟對(duì)不同菌種的抑菌活性具有一定差異，其中，對(duì)大腸桿菌的抑菌效果表現(xiàn)為：江西吉水>江西都昌=湖南魚市=江西安福=廣東乳源=浙江余杭=湖南波州>湖北遠(yuǎn)安；對(duì)傷寒沙門氏菌的抑菌效果表現(xiàn)為：湖北遠(yuǎn)安=江西安福>江西都昌=湖南魚市>江西吉水=湖南波州>廣東乳源=浙江余杭；對(duì)腸炎沙門氏菌的抑菌效果表現(xiàn)為：江西吉水>江西都昌=湖南魚市=湖北遠(yuǎn)安=江西安福=廣東乳源=浙江余杭>湖南波州。殺菌效果方面，除湖北遠(yuǎn)安和江西吉水的龍腦樟枝葉提取物對(duì)大腸桿菌無殺菌效果外，其余產(chǎn)地表現(xiàn)為：江西都昌=湖南魚市=廣東乳源=浙江余杭=湖南波州>江西安福；除江西安福的龍腦樟枝葉提取物對(duì)傷寒沙門氏菌無殺菌效果外，其余產(chǎn)地殺菌效果良好且無明顯差異；除江西都昌和江西安福的龍腦樟枝葉提取物對(duì)腸炎沙門氏菌無殺菌效果外，其余產(chǎn)地殺菌效果良好且無明顯差異。

3 討論

本研究采用水蒸氣蒸餾法提取龍腦樟枝葉提取物，簡(jiǎn)單有效，所提取的天然冰片化學(xué)成分種類多樣，其中絕大多數(shù)為萜類化合物，其中以單萜和倍半萜為主，與張宇思等[8]、付宇新等[18]的研究結(jié)果一致，但在含量上存在差異，這可能與不同產(chǎn)地的海拔、光溫水氣等生長(zhǎng)環(huán)境、種植方式以及采集方法有關(guān)。在產(chǎn)地研究方面，除湖南新晃和江西吉安2 個(gè)傳統(tǒng)產(chǎn)地外，新增了湖北遠(yuǎn)安、江西都昌、浙江余杭以及廣東乳源等地，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)這8 個(gè)產(chǎn)地中，右旋龍腦的相對(duì)含量超過80%的僅有湖北遠(yuǎn)安（82.47%）和江西安福（82.23%），超過70%的有江西都昌（79.57%）、江西吉水（78.55%）、湖南波州（73.88%）、湖南魚市（70.77%）以及浙江余杭（70.74%），僅廣東乳源（41.63%）低于55%。其中，僅湖北遠(yuǎn)安含有異龍腦（0.32%），含有樟腦成分分別為湖北遠(yuǎn)安（5.41%）、江西安福（5.00%）、江西都昌（ 1.39% ）、江西吉水（ 1.60% ）、湖南波州（ 16.90% ）、湖南魚市（ 15.84% ）、浙江余杭（12.09%）以及廣東乳源（46.65%），其他共有成分的相對(duì)含量無明顯差異。

在抑菌活性方面，與其他產(chǎn)地相比，江西吉水的龍腦樟枝葉提取物對(duì)大腸桿菌抑菌效果最好，其中抑菌圈直徑與楊鵬飛等[9]的研究結(jié)果基本一致，最低抑菌濃度（MIC）與楊鵬飛等[9]、丁雄等[10]的研究結(jié)果基本一致，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究了最低殺菌濃度（MBC），發(fā)現(xiàn)江西都昌、湖南魚市、浙江余杭以及湖南波州的龍腦樟枝葉提取物在500 μg/mL 濃度均下有殺菌作用；此外新增傷寒沙門氏菌與腸炎沙門氏菌2 個(gè)常見致病菌，研究結(jié)果顯示，江西安福和湖北遠(yuǎn)安的龍腦樟枝葉提取物對(duì)傷寒沙門氏菌抑菌效果最佳，江西都昌、湖北遠(yuǎn)安、湖南魚市、江西吉水、浙江余杭以及湖南波州的龍腦樟枝葉提取物在500 μg/mL 濃度下可殺滅傷寒沙門氏菌，湖北遠(yuǎn)安的龍腦樟枝葉提取物綜合抑菌效果最好；對(duì)于腸炎沙門氏菌，以湖北遠(yuǎn)安的龍腦樟枝葉提取物抑菌敏感性最高，以江西吉水的抑菌效果最好，湖北遠(yuǎn)安、湖南魚市、江西吉水、浙江余杭以及湖南波州在500 μg/mL 濃度下均有殺菌作用，湖北遠(yuǎn)安和江西吉水的綜合抑菌效果最好。不同產(chǎn)地的龍腦樟枝葉提取物對(duì)不同菌種的抑菌效果不同，這可能與生境條件、種植方式以及菌力強(qiáng)弱等因素有關(guān)，如生長(zhǎng)在云南、廣西、海南[19]等地的穿心蓮抑菌效果最好，是由于這些地區(qū)的生境條件溫暖濕潤(rùn)，適宜穿心蓮的生長(zhǎng)發(fā)育。

綜上所述，8 個(gè)產(chǎn)地龍腦樟枝葉提取物對(duì)大腸桿菌、傷寒沙門氏菌以及腸炎沙門氏菌均有抑制作用，其中對(duì)大腸桿菌的研究結(jié)果與前人基本一致。而8 個(gè)產(chǎn)地龍腦樟枝葉提取物的抑菌活性差異可能與右旋龍腦和樟腦的相對(duì)含量和配比有關(guān)，湖北遠(yuǎn)安、江西安福以及江西吉水的抑菌活性優(yōu)于其他產(chǎn)地，這幾個(gè)產(chǎn)地的龍腦樟枝葉中右旋龍腦相對(duì)含量較高，分別達(dá)82.47%、82.23%、78.55%，而樟腦含量較低，分別為5.41%、5.00%、1.60%。

傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌均屬于革蘭氏陰性菌。前者的內(nèi)毒素注射可引起發(fā)熱、白細(xì)胞減少，大量注射可引起死亡；后者是可引起急性胃腸炎[20]的人畜共患病原體，由此菌引起的急性胃腸炎在世界各國(guó)有增加的趨勢(shì)，有調(diào)查表明，這與食用含此致病菌的雞蛋和家禽有關(guān)[21]。雞蛋和家禽是人類常用食物，從雞蛋中檢測(cè)出的沙門氏菌多種多樣，其中腸炎沙門氏菌的檢出率最高，為最主要的血清型[22]。因此本研究有助于降低腸炎沙門氏菌、傷寒沙門氏菌以及大腸桿菌的感染風(fēng)險(xiǎn)。

天然冰片在其原產(chǎn)地印尼、菲律賓以及馬來西亞等東南亞地區(qū)的產(chǎn)量非常有限，并且隨著歐盟及美國(guó)宣布禁用進(jìn)口以合成冰片為原料藥品[23]，天然冰片自主產(chǎn)業(yè)化發(fā)展已成為必然趨勢(shì)，而自主產(chǎn)業(yè)化發(fā)展是建立在確定道地產(chǎn)區(qū)、規(guī)范化種植的基礎(chǔ)上的，目前尚未確定龍腦樟的道地產(chǎn)區(qū)。本研究在前人的研究基礎(chǔ)上擴(kuò)大了龍腦樟產(chǎn)地的范圍，并且探究了不同產(chǎn)地間龍腦樟提取物的抑菌活性差異。據(jù)悉，國(guó)內(nèi)關(guān)于龍腦樟的栽培有確切產(chǎn)地的有貴州、江蘇、福建以及臺(tái)灣等[24]。本研究中的8 個(gè)產(chǎn)地雖涵蓋了大部分的龍腦樟種植地，但尚不全面，今后將開展更深入全面的研究，以期為龍腦樟的種植發(fā)展和臨床應(yīng)用提供有力支撐。