劉衛(wèi)娟，管 理，賈潤芳，楊幸子，王靜靜

（咸陽市食品藥品檢驗檢測中心，陜西咸陽 713200）

磺胺類和喹諾酮類藥物是一類人工合成的抗菌藥，因其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、抗菌譜廣主要用于預(yù)防和治療泌尿生殖系統(tǒng)和呼吸道細(xì)菌感染等疾病[1]。目前水產(chǎn)養(yǎng)殖常在飼料中添加藥物，但過量使用藥物會造成嚴(yán)重的獸藥殘留問題[2]。該類藥物會給人體健康帶來巨大的風(fēng)險，因此開展獸藥殘留檢測和健康風(fēng)險評價工作十分必要[3]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品與試劑

采集黑魚、草魚、鯽魚、鯉魚、江團(tuán)共計100 份，取其皮和肉進(jìn)行均質(zhì)，冷凍保存；甲醇、乙腈、甲酸、正己烷（色譜純，德國Merck 公司）；超純水系統(tǒng)（德國Millipore公司）；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺二甲異噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、磺胺鄰二甲氧嘧啶-D3、磺胺間二甲氧嘧啶-D6、恩諾沙星-D5和環(huán)丙沙星-D8（美國CATO 公司）。

1.1.2 儀器與設(shè)備

1290 Infinity II-6470B 型高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國Agilent 公司）；Poroshell 120 EC-C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm，美國Agilent 公司）。

1.2 實(shí)驗方法

1.2.1 樣品提取與凈化

樣品解凍恢復(fù)至室溫，稱取試樣5.0 g 于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入50 μL 1 μg·mL-1的混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，渦旋混合并避光放置10 min。加入10 g無水硫酸渦旋混勻，再加入20 mL 1%甲酸乙腈渦旋混合1 min，超聲波提取10 min。10 000 r·min-1冷凍離心5 min，取上清液于50 mL 梨形瓶中。用20 mL 1%甲酸乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液，于40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。加入1.0 mL 20%甲醇溶液溶解殘留物，再加入2.0 mL 正己烷除脂凈化，取下層清液過0.2 μm 濾膜，按照《水產(chǎn)品中17 種磺胺類及15 種喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部1077 號公告-1-2008）進(jìn)行檢測。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制。用甲醇溶解各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制100 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇溶解各內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制100 μg·mL-1混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于冰箱冷凍避光保存，有效期6 個月。

（2）混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線配制。用甲醇逐級稀釋儲備液制備1 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和混合標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)標(biāo)工作液，用甲醇稀釋成濃度分別為0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，內(nèi)標(biāo)濃度為0.05 μg·mL-1，臨用現(xiàn)配。

1.2.3 評價標(biāo)準(zhǔn)

參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）[4]的相關(guān)規(guī)定，魚中磺胺類藥物（獸藥原型之和）的最大殘留限量為100 μg·kg-1，恩諾沙星（恩諾沙星和環(huán)丙沙星之和）的最大殘留限量為100 μg·kg-1。

對于未檢出的樣品，依據(jù)《國家食品安全風(fēng)險評估報告》對獸藥檢測結(jié)果進(jìn)行處理時，若有≤60%的檢測結(jié)果實(shí)測值低于方法LOD，評估時均賦予1/2 LOD；若有≥60%的檢測結(jié)果實(shí)測值低于方法LOD，評估時賦予LOD 值[5-6]。

1.2.4 膳食暴露評估

膳食暴露評估是衡量由動物源食品引入獸藥殘留量所帶來風(fēng)險的有效方法之一。本文采用食品安全指數(shù)法對磺胺類和恩諾沙星的殘留量進(jìn)行風(fēng)險評估，計算公式為

式中：EDI為每日化合物的累計暴露量，μg·（kg bw）-1；Ci為樣品中化合物的殘留水平，μg·kg-1；X為日均攝入量，g·d-1；bw為人群平均體重，kg；ADI為日允許攝入量，μg·kg-1；IFS為化合物的食品安全指數(shù)。

《中國居民膳食指南（2022）》[7]建議每天攝入 魚 肉120 ～200 g，式（1）中X以200 g·d-1計；查 詢GB 31650—2019， 恩 諾 沙 星 的ADI 值 為6.2 μg·（kg bw）-1， 磺 胺 類 藥 物 的ADI 值 為50 μg·（kg bw）-1；成人平均體重按60 kg 計算。IFS數(shù)值越低表示食品安全風(fēng)險越低，當(dāng)IFS ＜1 時，表示化合物對食品安全沒有影響；當(dāng)IFS=1 時，表示化合物對食品安全的影響可以接受；當(dāng)IFS ＞1 時，表示化合物對食品安全的影響不可接受。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍、定量限、回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

將配制的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶液進(jìn)行進(jìn)樣檢測，以化合物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，化合物與內(nèi)標(biāo)物的濃度比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以10 倍信噪比作為方法的定量限（LOQ）。稱取陰性試 樣，添加2.0 μg·kg-1、20.0 μg·kg-1、100.0 μg·kg-13 個水平標(biāo)準(zhǔn)溶液，冷藏過夜，提取凈化，重復(fù)測定7 次，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗，結(jié)果見表1。

表1 各化合物線性方程、定量限、平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

由表1 可知，各化合物在0.01 ～0.20 μg·mL-1線性良好，相關(guān)系數(shù)均≥0.998，LOQ 為0.05 ～2.00 μg·kg-1，平均加標(biāo)回收率為75.3%～107.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.2%～9.9%，滿足獸藥殘留檢測要求。

2.2 總體檢測情況

本研究檢測的100 份魚中，共檢出3 種化合物，分別為磺胺二甲異噁唑、恩諾沙星和環(huán)丙沙星，其他磺胺類化合物均未檢出。共有54 份樣品檢出了磺胺類、恩諾沙星藥物殘留，總檢出率為54%；有3 份樣品同時檢出恩諾沙星（恩諾沙星與環(huán)丙沙星，以下簡稱恩諾沙星）和磺胺類藥物，占總體檢出率的5.6%。其中共檢出恩諾沙星53 份，超出最大殘留限量1 份；共檢出磺胺類4 份，均未超出最大殘留限量，檢出率分別為53%和4%，超標(biāo)率分別為1%和0%。從檢出的殘留水平來看磺胺類的檢出濃度在0 ～28 μg·kg-1，平均值為2.85 μg·kg-1；恩諾沙星的檢出濃度在0 ～588 μg·kg-1，平均值為13.0 μg·kg-1。

檢測結(jié)果顯示，淡水魚中恩諾沙星的使用率較高，個別樣品的檢出含量超出最大殘留限量，其余樣品檢出含量在限量范圍內(nèi)。養(yǎng)殖戶為了追求經(jīng)濟(jì)利益，在未達(dá)到休藥期就開始銷售，導(dǎo)致恩諾沙星的超標(biāo)問題突出，故恩諾沙星是需要重點(diǎn)監(jiān)測的對象。

2.3 獸藥殘留健康風(fēng)險評估

市售淡水魚中磺胺類和恩諾沙星食品安全指數(shù)結(jié)果見表2。每日攝入量的平均值和最大值均小于國家標(biāo)準(zhǔn)制定的ADI。市售淡水魚中磺胺類和恩諾沙星IFS 均＜1，說明磺胺類藥物和恩諾沙星的暴露量均為可接受。

表2 咸陽市市售淡水魚獸藥食品安全指數(shù)

3 討論

檢測結(jié)果顯示，磺胺類化合物除磺胺二甲異噁唑有檢出外，其他磺胺類化合物均未檢出，檢出率僅為4%且都未超過限量，其IFS 遠(yuǎn)小于1。恩諾沙星的檢出率為53%，檢出率偏高。每日攝入量的平均值和最大值為0.043 μg·（kg bw）-1和1.96 μg·（kg bw）-1，小于GB 31650—2019 中制定的ADI，IFS 也小于1。說明咸陽市居民淡水魚類膳食中磺胺類和恩諾沙星的暴露量總體安全，即使偶爾單次淡水魚的攝入量有所增加，仍屬于安全范圍。

喹諾酮類藥物是濃度依賴性抗生素，恩諾沙星和環(huán)丙沙星由于很好的吸收率和穩(wěn)定性，其停藥期較長。而養(yǎng)殖戶為了治療水生動物的疾病、促進(jìn)魚的日增量和飼料轉(zhuǎn)化率濫用獸藥，未達(dá)到休藥期提前售賣，導(dǎo)致個別樣品超標(biāo)的現(xiàn)象存在。這些獸藥會通過食物鏈進(jìn)入人體，對人體健康產(chǎn)生危害，增加人體耐藥性和抗藥性。為保證飲食安全，建議人們選購飼養(yǎng)周期短、體內(nèi)有毒有害物質(zhì)蓄積少的魚類；此外，要加強(qiáng)養(yǎng)殖戶規(guī)范合理使用獸藥的意識，監(jiān)管部門及時監(jiān)督追溯。