但英　陳若　何德　李翠新

摘要用4種不同濃度（0.020、0.025、0.050、0.100 g/L）旱柳浸提物對金線蓮組培苗生根情況進行研究，以期改善金線蓮組培苗不易生根的現(xiàn)狀。結(jié)果表明，旱柳浸提物對金線蓮生根呈低濃度（0.020、0.025 g/L）促進、高濃度（0.100 g/L）抑制的趨勢；相比于對照組，旱柳浸提物培養(yǎng)組的生根率、根長和根量均顯著提高，并易對金線蓮培養(yǎng)基表面下的莖節(jié)上分化出根。

關(guān)鍵詞金線蓮；旱柳浸提物；組織培養(yǎng)；生根

中圖分類號S682.31文獻標識碼A

文章編號0517-6611（2023）11-0025-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.11.007開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Effect of Salix mandshurica Extract on Rooting of Anoectochilus roxburghii Tissue? Culture? Seedlings

DAN? Ying， CHEN? Ruo， HE? De? et al（College of Life Sciences， Southwest Forestry University / Key Laboratory of Forest Biotechnology in Yunnan， Kunming， Yunnan? 650224）

AbstractThe rooting of tissue cultured seedlings of Anoectochilus roxburghii was studied by using four different concentrations （0.020， 0.025， 0.050 and 0.100 g/L） of Salix mandshurica extracts in order to improve the current situation of difficult rooting of A. roxburghii tissue culture seedlings. The results showed that the extract of S. mandshurica promoted the rooting of A. roxburghii with low concentration （0.020， 0.025 g/L） and inhibited with high concentration （0.100 g/L） and could significantly shorten the culture time of tissue culture rooting. Compared with the control group， the rooting rate， root length and root quantity of S. mandshurica extract culture group were significantly improved. And it was easy to differentiate roots on the stem nodes under the surface of A. roxburghii culture medium.

Key wordsAnoectochilus roxburghii;Salix mandshurica extract;Tissue culture;Rooting

金線蓮（Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lind1.），又名金線蘭、烏人參，屬蘭科開唇蘭屬單子葉植物［1］，株型小巧，葉脈網(wǎng)狀排列并呈金紅色光澤，觀賞價值極高［2］，是我國國家二級保護植物，素有“金草”“神藥”“藥王”等美稱［3］，其味甘性平，有清涼解毒、滋陰降火、消炎止痛之功效，降血糖，降血壓，利尿，保肝［4］，能祛風利濕、平衡陰陽、生津養(yǎng)顏、調(diào)和氣血，能全面提高人體免疫力和增強抵抗力。金線蓮對生境依賴較高，自然界蘊含量少，野外繁殖不易，其種子種胚小，需借助真菌共生才能萌發(fā)［5］。隨著人們對金線蓮藥用價值的廣泛認識，導致野生金線蓮遭過度采挖，其生境也受到嚴重破壞［6-7］。為推進金線蓮資源保護與利用，我國近些年對金線蓮組織培養(yǎng)開展了廣泛研究，各研究頗有成效，實現(xiàn)大規(guī)模人工種植指日可待，但金線蓮組培苗面臨生根較不易、根系弱、根量少、培養(yǎng)周期長等問題［8］。

旱柳（Salix matsudana Koidz）枝條含有水楊酸、水楊苷、水楊醇、鄰苯二酚、對羥基苯甲酸等多種糖苷類化合物和酚類化合物［9］，對植物具促進生根、發(fā)芽和光合作用等作用。原紅娟等［10］研究發(fā)現(xiàn)，柳枝水浸提液的化感作用對長葉梅花鹿水泡（Adromischus marianiae cv.）幼苗主根數(shù)量增加總體上呈促進作用，且作用強度和水浸提液的濃度有關(guān)，整體表現(xiàn)出低促高抑的效應，旱柳枝條浸提物對植物根量增加有促進作用。筆者以金線蓮組培擴繁苗為材料，添加不同濃度旱柳枝條浸提物，研究其對金線蓮生根的影響，以期改善金線蓮組培苗不易生根的現(xiàn)狀。

1材料與方法

1.1材料試驗材料為福建金線蓮組培無菌苗。

1.2方法

1.2.1金線蓮組培苗培養(yǎng)條件。調(diào)節(jié)金線蓮組培苗培養(yǎng)基pH在5.6～5.8，培養(yǎng)室溫度控制在24～26 ℃，光照強度為1 500～2 000 lx，光照培養(yǎng)時間控制在12 h/d。

1.2.2金線蓮的繼代增殖。選取分化程度高、叢生芽多的金線蓮無菌苗作接種材料，將叢生芽適當分割，接種至增殖培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+25 g/L蔗糖+6 g/L卡拉膠）中培養(yǎng)。30 d后計算增殖率，增殖率=m/n，m為增殖后的總苗數(shù)，n為接種的外植體數(shù)。

1.2.3金線蓮的壯苗。黃勇［11］研究表明添加花寶一號、蛋白胨有利于金線蓮的生根壯苗，添加活性炭有助于節(jié)省培養(yǎng)時間，獲得較高的質(zhì)量。選取2～3 cm長的金線蓮叢生芽，其莖節(jié)無分化幼芽且葉片稍舒展的組培苗接種到壯苗培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基+3 g/L花寶一號+6 g/L卡拉膠+25 g/L蔗糖+3 g/L蛋白胨+5 g/L活性炭）中，培養(yǎng)30 d后觀察并記錄壯苗情況。

1.2.4旱柳浸提母液的制備。取一年生旱柳枝條，剪成約5 cm小段，自來水沖洗晾干后放入中藥材粉碎機中粉碎。稱取100 g旱柳粉碎，加蒸餾水恒溫25 ℃振蕩處理24 h后，用8層紗布過濾去除雜質(zhì)，定容至500 mL，得到200 g/L旱柳浸提物母液，4 ℃冷藏備用。

1.2.5金線蓮的生根。對照組培養(yǎng)基：1/2MS+0.5 mg/L NAA+4.0 mg/L IBA+0.1 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+5.5 g/L卡拉膠［11］；4個試驗組為1/2MS培養(yǎng)基分別添加0.020、0.025、0.050、0.100 g/L的旱柳浸提物，對照組和試驗組各接入80瓶壯苗后的金線蓮。40 d記錄根長、生根率和根增殖率。生根率=（P-L）/P×100%（P為總株數(shù)，L為未生根株數(shù)），根的增殖倍數(shù)=S/T（S為增殖后的總根數(shù)，T為接種的外植體數(shù)）。

2結(jié)果與分析

2.1金線蓮的繼代增殖培養(yǎng)30 d后金線蓮分化出大量的叢生芽，有的叢生芽已變長、變壯，且莖干尖端分化的葉片多，葉片稍舒展可用于壯苗生根（圖1A）。有的叢生芽處于持續(xù)分化狀態(tài)，且尖端分化葉片不舒展（圖1B）。金線蓮分化誘導出叢生芽效果顯著，30 d的增殖率為3.25。

2.2金線蓮的壯苗通過觀察并記錄30 d后400瓶苗的壯苗情況，金線蓮的壯苗率達99.4%。金線蓮植株生長良好、較為健壯，葉片均舒展，莖干普遍增長2 cm左右，均可用于生根培養(yǎng)?？梢妷衙绾蠼鹁€蓮葉片舒展、葉面增大、莖干變粗增高（圖2）。

2.3旱柳浸提物對金線蓮生根的影響添加旱柳浸提物后，金線蓮的生根率與平均根長均高于對照組（表1），生根率總體上呈低濃度促進、高濃度抑制的作用，旱柳浸提物濃度0.100 g/L時對金線蓮組培苗生根率抑制明顯；旱柳浸提物濃度為0.020 g/L時根的增殖倍數(shù)最高為4.28；平均根長呈先增加后降低趨勢，旱柳浸提物的濃度為0.050 g/L時平均根長最大為1.67 cm。0.020和0.025 g/L時生根數(shù)較多（圖3B、C）。對金線蓮而言，生根的數(shù)目越多，在進行移栽時存活率越高，因此在該試驗中，旱柳浸提物濃度為0.020 g/L時生根效果最好。

添加旱柳浸提物的處理和對照組的處理金線蓮單個莖節(jié)均僅生1條根（圖3），具體原因有待進一步研究。對照組不易在培養(yǎng)基表面下的莖節(jié)上分化出根（圖3A），而添加旱柳浸提物后均易在金線蓮培養(yǎng)基表面下的莖節(jié)分化出根（圖3B～F）。

3討論

韓曉紅等［12］發(fā)現(xiàn)添加0.5 mg/L NAA、4.0 mg/L IBA、0.1 mg/L 6-BA激素處理對金線蓮的根長、生根率、出根時間有顯著促進作用，但根量影響不顯著，且多以氣生根為主，根呈墨綠色且表面帶有一層小絨毛。而該試驗以0.5 mg/L NAA、4.0 mg/L IBA、0.1 mg/L 6-BA作為對照組，未取得與韓曉紅等［11］一致的研究結(jié)果，而在培養(yǎng)基中添加旱柳浸提物后，金線蓮的根多以培養(yǎng)基表面下的不定根為主，且生根率、根長、出根時間和根量均有顯著提高，根細長，以翠綠色為主，根尖為白色。

靳松等［13］研究發(fā)現(xiàn)采用0.5 mg/L IBA和0.5 mg/L NAA進行生根誘導，在30 d時取得最好效果，其生根率為84.62%，平均根數(shù)為2.45。該試驗與之相比，添加了旱柳提取物后金線蓮的生根率最高為92.9%，平均根數(shù)為4.28，平均根數(shù)約為其2倍，明顯提高了金線蓮生根數(shù)量。

生根是金線蓮快速組培繁殖過程中較難的一步，生根誘導在根數(shù)上不容易突破，很難突破1個莖節(jié)上出現(xiàn)2條或以上數(shù)量的根［12］，該試驗也未能突破這個限制，因此如何突破1莖節(jié)上長2條或者以上的根有待進一步研究。

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