張慧玲，范雅婷，劉浹怡，沈景林*，房恒通，張 晶

1.吉林省五星動(dòng)物保健有限公司，吉林農(nóng)安 130000；2.吉林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130062

動(dòng)物健康狀況取決于動(dòng)物品種良種化、環(huán)境生態(tài)標(biāo)準(zhǔn)化、飼養(yǎng)管理科學(xué)化和疫病防控程序化等因素的執(zhí)行力度，以往的疫病防控，一是按畜禽防疫程序進(jìn)行免疫，二是利用抗生素防治畜禽常見(jiàn)病和易感病[1]。2019 年中國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部宣布2020 年飼料全面禁抗限抗，并發(fā)布第194 號(hào)公告，自2020年7 月1 日起，飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑（中藥類除外）的商品飼料，由此，疫病防控和動(dòng)物保健已成為維持動(dòng)物健康的研究熱點(diǎn)[2]。微生態(tài)制劑是利用動(dòng)物體內(nèi)提取的有益微生物調(diào)整人類或畜禽宿主體內(nèi)的微生態(tài)失調(diào)，保持微生態(tài)平衡的益生菌及其代謝物和促生長(zhǎng)物的一種新興的綠色添加劑[3、4]，具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，維持體內(nèi)微生態(tài)平衡，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力等多方面的作用[5、6]。通過(guò)日糧中添加微生金肽素飼喂獺兔試驗(yàn)，研究其對(duì)獺兔生產(chǎn)性能及疫病防控方面的影響，以其在畜禽疫病防控和動(dòng)物保健方面成為替代抗生素的飼料添加劑，在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

實(shí)驗(yàn)兔選用吉林大學(xué)吉戎兔繁育中心（原解放軍軍需大學(xué)吉戎兔原種兔場(chǎng)）培育的獺兔新品種-吉戎兔，選取發(fā)育狀況良好，體重相近的50 日齡斷奶仔兔60 只，標(biāo)記耳號(hào)，按平均體重（p＜0.05）分為4 組，其中1 個(gè)對(duì)照組ck，3 個(gè)試驗(yàn)組（Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組），每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4 只實(shí)驗(yàn)兔，每組3 只后備，預(yù)試期7 d，在吉林大學(xué)吉戎兔繁育中心兔舍三層重疊式金屬籠內(nèi)飼養(yǎng)。

1.2 藥品與試劑

微生金肽素，河北省京科動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，主要組分有：臘狀芽孢桿菌、酵母菌、乳酸桿菌及其有益代謝產(chǎn)物、低聚糖、紅酒酵母多糖、氨基酸、維生素、微量元素、未知生長(zhǎng)因子，有效微生物含量≥30 億/g，按0.5‰、1.0‰、1.5‰的梯度分別添加于3 個(gè)試驗(yàn)組的日糧中。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

分析天平，電子稱，剪毛剪刀，耳號(hào)鉗，飼料粉碎機(jī)，飼料顆粒機(jī)。

1.4 實(shí)驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)期間對(duì)照組ck 飼喂獺兔正常顆粒飼料，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別飼喂添加0.5‰、1‰、1.5‰微生金肽素的試驗(yàn)日糧，不加喂任何青綠飼料，每天定時(shí)定量飼喂，每日2 次（8:00、16:00），記錄數(shù)據(jù)，自由飲水，保持兔舍安靜并采取驅(qū)蟲(chóng)保健，疫苗接種等必要的疫病防疫措施，飼喂期間需注意實(shí)驗(yàn)用兔的生長(zhǎng)發(fā)育情況，在其體重接近1.3 kg 時(shí)應(yīng)分為單籠，以免吉戎兔之間撕咬或搶食。戎兔基礎(chǔ)日糧水平見(jiàn)表1。隨實(shí)驗(yàn)兔體重的增加，實(shí)驗(yàn)兔采食量也相應(yīng)的 增加。對(duì)照組和試驗(yàn)組的飼喂量見(jiàn)表2。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平

表2 不同處理飼料飼喂量

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 體重測(cè)量

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前預(yù)飼3 d，空腹稱取初始體重，飼喂期間每10 天空腹稱重1 次，記錄數(shù)據(jù)，飼養(yǎng)試驗(yàn)2 個(gè)月后，每組選取9 只實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)行取樣分析。

1.5.2 皮張面積與被毛密度

飼喂結(jié)束后剪掉選取的9 只獺兔頸后部1 cm2兔毛，稱重，計(jì)數(shù)500 根兔毛稱重，計(jì)算被毛密度；測(cè)量實(shí)驗(yàn)兔體長(zhǎng)及胸圍，計(jì)算皮張面積。

1.5.3 發(fā)病率和死亡率

試驗(yàn)期間觀察實(shí)驗(yàn)兔的生長(zhǎng)發(fā)育狀況、采食情況、運(yùn)動(dòng)和精神狀態(tài)，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)兔的發(fā)病和死亡數(shù)量，計(jì)算發(fā)病率和死亡率。

1.5.4 免疫指標(biāo)

測(cè)得的指標(biāo)主要有體液免疫和非特異性免疫指標(biāo)，包括體液免疫參數(shù)的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM，非特異性免疫參數(shù)的C3、C4 補(bǔ)體蛋白，超氧化物歧化酶活性以及溶菌酶的活性。

測(cè)定方法：免疫球蛋白以及補(bǔ)體蛋白采用全自動(dòng)生化分析儀ACA 迪瑞CS-600 進(jìn)行測(cè)定；超氧化物歧化酶SOD 的活性、溶菌酶活性采用試劑盒測(cè)定，是由南京建成生物公司的總SOD 酶活力測(cè)定試劑盒和溶菌酶活力測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定試劑盒等相關(guān)試劑必須嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)要求及說(shuō)明書進(jìn)行規(guī)范操作與保存。

1.6 數(shù)據(jù)處理

對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算再通過(guò)SPSS 軟件進(jìn)行單因素方差分析處理，并用LSD 法進(jìn)行平均數(shù)間的差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 微生金肽素對(duì)吉戎兔增重的影響

科學(xué)合理和安全有效的飼料才能保證動(dòng)物健康，進(jìn)而影響動(dòng)物的正常生長(zhǎng)發(fā)育，在飼料中添加不同水平微生金肽素，通過(guò)飼喂吉戎兔試驗(yàn)，研究微生金肽素對(duì)吉戎兔生長(zhǎng)發(fā)育的影響，微生金肽素對(duì)吉戎兔增重影響見(jiàn)表3。

表3 微生金肽素對(duì)吉戎兔增重的影響 單位：kg

結(jié)果表明，微生金肽素對(duì)吉戎兔生長(zhǎng)發(fā)育有影響，無(wú)顯著差異（p＞0.05）。試驗(yàn)1 ～10 d 時(shí)對(duì)照組、Ⅱ組和Ⅲ組實(shí)驗(yàn)兔體重略有下降，這主要是預(yù)飼期結(jié)束后實(shí)驗(yàn)兔還有應(yīng)激反應(yīng)，試驗(yàn)1 ～40 d 時(shí)Ⅰ組和Ⅲ組吉戎兔平均增重均低于對(duì)照組（p＞0.05），試驗(yàn)1 ～50、1 ～60 d 時(shí)Ⅰ組和Ⅲ組吉戎兔平均增重均高于對(duì)照組（p＞0.05）；Ⅱ組在1 ～10 d時(shí)略有減重外，11 ～60 d 時(shí)吉戎兔平均增重均高于對(duì)照組（p＞0.05），1 ～20 d 時(shí)吉戎兔平均增重低于Ⅰ組（p＞0.05），21 ～60 d 時(shí)吉戎兔平均增重均高于Ⅰ組（p＞0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組在1 ～10 d時(shí)均略有減重外，Ⅱ組在11 ～60 d 時(shí)吉戎兔平均增重均高于Ⅲ組（p＞0.05）。微生金肽素中大量的有益微生物在動(dòng)物體腸道和飼料中生長(zhǎng)繁殖，代謝產(chǎn)出許多對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育有益的生物活性物質(zhì)，特別是酶類、維生素和氨基酸的大量產(chǎn)生[7、8]，對(duì)消化系統(tǒng)有增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和促進(jìn)消化的作用，其中光合細(xì)菌能利用體溫進(jìn)行糖和淀粉的合成，乳酸菌能將糖和淀粉生成有機(jī)酸并能分解粗纖維，這樣就提高了動(dòng)物對(duì)飼料的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)素的利用率[9、10]，促進(jìn)了其生長(zhǎng)，但增重效果不明顯。

2.2 微生金肽素對(duì)吉戎兔毛皮品質(zhì)的影響

吉戎兔是以皮用為主的新品種兔，影響毛皮品質(zhì)的因素有被毛密度、被毛整齊度、被毛亮度、毛纖維長(zhǎng)度、皮張面積和皮板厚度等，其中被毛密度和皮張面積是是影響毛皮品質(zhì)的兩個(gè)主要指標(biāo)。結(jié)果顯示，微生金肽素影響吉戎兔被毛密度，且差異顯著（p＜0.05）。Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組3 個(gè)試驗(yàn)組的被毛密度均高于對(duì)照組，Ⅰ組和對(duì)照組相比差異不顯著（p＞0.05），Ⅱ組和Ⅲ組均高于Ⅰ組和對(duì)照組（p＜0.05），Ⅱ組高于Ⅲ組（p＞0.05），由此，Ⅱ組微生金肽素的添加量明顯增加了吉戎兔的被毛密度，優(yōu)于對(duì)照組、Ⅰ組和Ⅲ組。微生金肽素內(nèi)的芽孢桿菌在獺兔小腸中下部生長(zhǎng)，減少了小腸中的有機(jī)胺和硝態(tài)氮的含量，有利于誘導(dǎo)腸道胰蛋白酶的分泌，提高蛋白消化率，保證了營(yíng)養(yǎng)供給和動(dòng)物正常生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)了毛囊發(fā)育和皮毛生長(zhǎng)，增強(qiáng)吉戎兔皮毛的光澤，改善毛皮品質(zhì)[11]，因此微生金肽素對(duì)吉戎兔的被毛密度有顯著影響。

胸圍和體長(zhǎng)是影響皮張面積的主要指標(biāo)，結(jié)果顯示，微生金肽素對(duì)吉戎兔胸圍、體長(zhǎng)無(wú)顯著影響(p＞0.05)，但略高于對(duì)照組。微生金肽素能提高吉戎兔腸道內(nèi)飼料利用率和蛋白消化率，保證了營(yíng)養(yǎng)供給和動(dòng)物正常生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)動(dòng)物體架的增大和改善皮張的大小，增強(qiáng)吉戎兔皮毛的光澤，改善毛皮品質(zhì)，對(duì)吉戎兔的被毛密度有顯著影響外，但對(duì)吉戎兔的皮張面積無(wú)顯著影響。

2.3 微生金肽素對(duì)吉戎兔健康指數(shù)的影響

微生金肽素改善動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)動(dòng)物的免疫力，提高動(dòng)物的健康指數(shù)，微生金肽素對(duì)吉戎兔健康指數(shù)的影響見(jiàn)表4。

表4 微生金肽素對(duì)吉戎兔健康指數(shù)的影響

添加微生金肽素的試驗(yàn)組吉戎兔糞便光滑細(xì)膩，無(wú)明顯臭味，且沒(méi)有飼料殘留。試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的吉戎兔死亡率顯著低于對(duì)照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔死亡率顯著低于Ⅰ組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔死亡率無(wú)顯著差異(p＞0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的吉戎兔成活率顯著高于對(duì)照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔成活率顯著高于Ⅰ組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組吉戎兔成活率無(wú)顯著差異(p＞0.05)。Ⅰ組發(fā)病率13.33%雖低于對(duì)照組33.33%，Ⅰ組成活率93.33%高于對(duì)照組80.00%，但發(fā)病的實(shí)驗(yàn)兔有死亡。這主要是Ⅰ組的微生金肽素的添加量中活性較強(qiáng)的有益菌不能完全在動(dòng)物腸道內(nèi)占位并生長(zhǎng)，抑制有害菌的侵入和繁殖，維持動(dòng)物腸道菌群微生態(tài)平衡，提升實(shí)驗(yàn)兔的群體抗病免疫力，防止消化道疾病的發(fā)生，因而有實(shí)驗(yàn)兔發(fā)病后死亡。Ⅱ組發(fā)病率6.67%顯著低于對(duì)照組33.33%，Ⅱ組成活率100.00%高于對(duì)照組80.00%，但發(fā)病的實(shí)驗(yàn)兔無(wú)死亡；Ⅲ組發(fā)病率0%顯著低于對(duì)照組33.33%，Ⅲ組成活率100.00%高于對(duì)照組80.00%。這主要是Ⅱ組和Ⅲ組的微生金肽素的添加量中活性較強(qiáng)的有益菌在動(dòng)物腸道內(nèi)占位并迅速生長(zhǎng)，消耗大量的氧，造成腸道內(nèi)厭氧環(huán)境，產(chǎn)生某些抗菌物質(zhì)，抑制了有害菌的侵入和繁殖，促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng)，維持動(dòng)物腸道菌群微生態(tài)平衡[12]。同時(shí)，微生金肽素與腸道內(nèi)有益菌群可競(jìng)爭(zhēng)性抑制病原菌附著于腸壁上，并在消化道內(nèi)形成致密的膜菌群，防止病原菌吸附在腸壁上，促使其隨糞便排出體外，提升了動(dòng)物群體抗病免疫力，防止消化道疾病的發(fā)生，減少疫病對(duì)動(dòng)物的危害，從而降低了動(dòng)物的發(fā)病率和死亡率[13]。從微生金肽素對(duì)實(shí)驗(yàn)兔的發(fā)病率和成活率影響結(jié)果來(lái)看，以及添加微生金肽素的成本考慮，Ⅱ組微生金肽素的添加劑量可滿足實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的需要。

2.4 微生金肽素對(duì)吉戎兔血液生化指標(biāo)的影響

微生金肽素改善動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)動(dòng)物的免疫力，提高動(dòng)物的血液生化指標(biāo)，微生金肽素對(duì)吉戎兔血液生化指標(biāo)的影響見(jiàn)表5。

表5 微生金肽素對(duì)吉戎兔血液生化指標(biāo)的影響

結(jié)果表明，試驗(yàn)Ⅰ組溶菌酶活性低于對(duì)照組(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組溶菌酶活性高于對(duì)照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組間溶菌酶活性差異不顯著(p＞0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的SOD 低于對(duì)照組(p＞0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的C3 均高于對(duì)照組，Ⅰ組和對(duì)照組間差異不顯著(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組的C3 均高于對(duì)照組和Ⅰ組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著(p＞0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的C4 均高于對(duì)照組，Ⅰ組和對(duì)照組間差異不顯著(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組的C4 均高于對(duì)照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組的C4均高于Ⅰ組(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著(p＞0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的IgA 均高于對(duì)照組（p＜0.05），Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組間的IgA 差異不顯著(p＞0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的IgG均高于對(duì)照組(p＞0.05)，Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組與對(duì)照組間的IgG 差異不顯著(p＞0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的IgM 均高于對(duì)照組，Ⅰ組和對(duì)照組間差異不顯著(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組的IgM 均高于對(duì)照組（p＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組的IgM 均高于Ⅰ組(p＞0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著(p＞0.05)。微生金肽素中活性較強(qiáng)的有益菌在動(dòng)物腸道內(nèi)占位并生長(zhǎng)，促進(jìn)腸道內(nèi)的有益菌增殖，抑制了有害菌的侵入和繁殖，維持動(dòng)物腸道菌群微生態(tài)平衡，刺激動(dòng)物主動(dòng)免疫系統(tǒng)的較早建立，增強(qiáng)動(dòng)物防病抗病免疫力[14]。血清中免疫球蛋白IgG 指標(biāo)升高激活機(jī)體防御系統(tǒng)中動(dòng)物體液免疫應(yīng)答，發(fā)揮免疫功能；參與機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的防御反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)的補(bǔ)體，補(bǔ)體C3 通過(guò)激活補(bǔ)體，補(bǔ)體C4 通過(guò)活化補(bǔ)體來(lái)發(fā)揮其生物功能，血清中補(bǔ)體C3 和C4 的水平升高提高了機(jī)體免疫力[15]。腸道黏膜免疫指標(biāo)分泌型免疫球蛋白A（sIgA），有益菌在腸道中發(fā)揮了免疫佐劑作用，提高免疫識(shí)別力，同時(shí)活化腸系膜淋巴結(jié)、黏膜內(nèi)和黏膜固有層等腸道相關(guān)淋巴組織，使sIgA 抗體分泌增多，防止消化道疾病發(fā)生，減少疫病對(duì)動(dòng)物的危害[16]。因此微生金肽素對(duì)維護(hù)動(dòng)物健康及血液生化指標(biāo)的影響效果明顯。

3 討論

通過(guò)微生金肽素飼喂試驗(yàn)研究，微生金肽素可提高獺兔日增重，增加被毛密度與皮張面積，改善被毛品質(zhì)?；钚暂^強(qiáng)的有益菌在獺兔腸道內(nèi)占位并生長(zhǎng)，抑制了有害菌的侵入和繁殖，促進(jìn)腸道健康，提高免疫力。有益微生物在獺兔腸道和飼料中生長(zhǎng)繁殖，代謝產(chǎn)生的維生素和酶等生物活性物質(zhì)，增強(qiáng)了消化系統(tǒng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和消化。其中，光合細(xì)菌能進(jìn)行糖和淀粉的合成，乳酸菌將糖和淀粉生成有機(jī)酸并分解粗纖維，提高了飼料利用率；芽孢桿菌在獺兔小腸中下部生長(zhǎng)，減少了小腸中的有機(jī)胺和硝態(tài)氮的含量，誘導(dǎo)腸道胰蛋白酶的分泌，提高蛋白消化率，促進(jìn)動(dòng)物體架的增大和皮張面積的改善，增強(qiáng)獺兔毛皮的光澤，改善毛皮品質(zhì)。

4 結(jié)論

4.1 微生金肽素能提高吉戎兔飼料的利用率，促進(jìn)吉戎兔生長(zhǎng)，但增重效果不顯著。

4.2 微生金肽素能增強(qiáng)吉戎兔皮毛光澤和被毛密度，改善毛皮品質(zhì)，但皮張面積無(wú)顯著差異。

4.3 微生金肽素能維持動(dòng)物腸道菌群微生態(tài)平衡，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，降低了動(dòng)物發(fā)病率和病死率，對(duì)動(dòng)物血液生化指標(biāo)有顯著影響。

4.4 微生金肽素的適宜添加量為1.0‰。