方芳 梅端果 蒲小春

低聚半乳糖（GOS）作為一種新型功能食品添加劑在食品加工業(yè)中的應用非常廣泛，可應用于嬰幼兒食品、乳制品、飲料、焙烤食品、糖果等產(chǎn)品中，尤其在嬰幼兒配方奶粉中的應用較多。本文以同批次低聚半乳糖原料作對照品，采用離子色譜-脈沖安培檢測法對嬰幼兒配方奶粉中低聚半乳糖的含量進行了測定。該方法簡便、高效、準確，為嬰幼兒配方奶粉中低聚半乳糖的檢測提供了一個全新的研究方向。

一、材料與方法

1.材料與試劑。材料：低聚半乳糖原料（量子高科，純度由廠家提供）；同批次嬰幼兒配方奶粉；凈化柱（反相固相萃取柱，填料為聚二乙烯基苯，1.0mL）；微孔濾膜（水相，0.22μm）。試劑：乳糖、半乳糖、葡萄糖標準品（采購自LGC）；乙腈（光華科技，HPLC）；50%氫氧化鈉溶液（賽默飛世爾科技，HPLC）；無水醋酸鈉（賽默飛世爾科技，HPLC）；一級水。

2.儀器設備。ICS5000+離子色譜儀（賽默飛，配有三元及以上梯度泵，脈沖安培檢測器，金工作電極）；SQP分析天平（賽多利斯，感量0.01mg）；BSA224S分析天平（賽多利斯，感量0.1mg）；TG16-WS臺式高速離心機（湖南湘儀）；QYYS-10A純水儀（重慶前沿水處理設備有限公司）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

3.實驗方法。（1）方法原理。試樣經(jīng)50℃溫水超聲溶解后，用乙腈沉淀蛋白質(zhì)，以同批次低聚半乳糖原料為對照品，采用外標法并用帶積分安培檢測器的離子色譜儀檢測低聚半乳糖。低聚半乳糖含有不同結(jié)構(gòu)的低聚糖，利用不受本底干擾的特征色譜峰來定性定量，測定GOS的加入量。

（2）色譜條件。分析柱：CarboPac PA20，（P/N： 060142）；保護柱：CarboPac PA20，（P/N： 060144）；儀器型號ICS5000+：單泵；AS－AP自動進樣器；脈沖安培檢測器PAD，Au電極，AgCl參比模式，糖標準波形；進樣量：25uL；流速：0.45mL·min-1。淋洗液梯度方法如表1所示。

（3）試劑配制。氫氧化鈉（125mmol·L-1）：取6.5mL50%氫氧化鈉溶液，用水稀釋至1000mL，通入氮氣保護，緩慢搖勻，室溫下可放置7d。氫氧化鈉（250mmol·L-1）：取13mL50%氫氧化鈉溶液，用水稀釋至1000mL，通入氮氣保護，緩慢搖勻，室溫下可放置7d。氫氧化鈉（250mmol·L-1）乙酸鈉（500mmol·L-1）混合溶液：稱取41g無水乙酸鈉（精確至0.01g），用約500mL水溶解，0.22μm濾膜過濾，脫氣10min，加入13mL50%氫氧化鈉溶液，并用水稀釋至1000mL，通入氮氣保護，緩慢搖勻，室溫下可放置7d。

（4）標準溶液的配制。準確稱取含GOS 100mg（需折算原料中低聚半乳糖的含量）的低聚半乳糖原料（與添加到嬰幼兒配方奶粉中相同的批次），用超純水溶解并超聲5min后定容至100mL，制成標準儲備溶液。分別吸取0.5、1、2、4、6mL的標準儲備溶液定容至100mL，配制成GOS濃度在5-60ug·mL-1范圍內(nèi)的5個標準曲線溶液，過0.22μm濾膜，濾液待進樣。

（5）樣品前處理。準確稱取1g（精確至0.0001g，含GOS約30-40mg）的奶粉樣品，置于100mL容量瓶中，加40mL50℃熱水，超聲10min使其溶解。放至室溫后，加乙腈至刻度，搖勻。靜置10min使其沉降，取溶液進行離心，10000r·min-1離心10min。取上清液1mL，加水稀釋至25mL，搖勻，過0.22μm濾膜及1.0cc OnGuard RP柱，濾液待進樣。

二、結(jié)果與分析

1.特征峰的確定與選擇。對濃度為1.0?g·mL-1的乳糖、葡萄糖及半乳糖標準溶液分別進行分析，同時對濃度為5-60ug·mL-1的低聚半乳糖系列標準溶液進行分析，以確認特征峰。色譜圖見圖1-圖4。

通過比較，低聚半乳糖存在5個明顯的特征峰：G1、G2、G3、G4、G5，線性良好且聚合度依次增大，同時與乳糖、半乳糖、葡萄糖等均具有較好的分離度。由于考慮到特征峰峰型、分離度、響應程度等因素，本文選取G2、G3作為低聚半乳糖目標峰進行含量分析。

2.線性范圍及檢出限。配制濃度分別為5、10、20、40、60ug·mL-1的低聚半乳糖標準溶液，進樣分析，以濃度為橫坐標、色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。以3倍信噪比對應的目標物含量為該化合物的檢出限，以10倍信噪比對應的目標物含量為該化合物的定量限，線性范圍、回歸方程、相關系數(shù)、檢出限和定量限見表2。

3.精密度與回收率。將含低聚半乳糖的嬰幼兒配方奶粉平行測定6次，以G2、G3特征峰定量分析，結(jié)果見表3。該方法精密度良好，RSD僅為0.68%。

向嬰幼兒配方奶粉中分別添加15、30、45mg的低聚半乳糖，平行做6組，然后進行分析。由表4可看出，回收率在96%-102.6%，RSD在0.48%-1.48%。結(jié)果表明，該方法回收率較高，準確度較好。

4.正確度。選用嬰幼兒配方奶粉測定低聚半乳糖的含量，同時送第三方機構(gòu)進行檢測，檢測結(jié)果顯示，本中心與第三方機構(gòu)的檢測結(jié)果偏差均在10%以內(nèi)，表明其方法正確度較好。

三、結(jié)論與討論

本文闡述了一種嬰幼兒配方奶粉中低聚半乳糖含量的測定方法，以同批次添加的低聚半乳糖作為對照品，采用離子色譜-脈沖安培法測定嬰幼兒配方奶粉中低聚半乳糖的含量。該方法簡化了樣品處理過程，降低了檢測成本，同時也保證了乳糖、半乳糖、葡萄糖的有效分離，檢測結(jié)果具有較高的精密度和準確度，為嬰幼兒配方奶粉中低聚半乳糖的檢測提供了一個全新的研究方向。

作者簡介：方芳（1982-），女，漢族，江西撫州人，工程師，碩士研究生，研究方向為食品科學與工程。

梅端果（1993-），男，漢族，江西九江人，助理工程師，大學本科，研究方向為食品檢測。

蒲小春（1982-），男，漢族，四川廣元人，工程師，大學本科，研究方向為食品科學與工程。