陳嗣雙 黃志芳 侯斐 胡嘉瑜

[摘要] 目的 研究前列腺癌患者超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢組織中α 甲酰基輔酶A 消旋酶（α-methylacyl-CoA racemase，P504s）、高分子量角蛋白（high molecular weight keratin，CK-h）、p63、細(xì)胞角蛋白5/6（CK5/6）表達(dá)及意義。方法 選取金華市人民醫(yī)院2018 年6 月至2022 年1 月171 例前列腺癌患者超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢組織作為研究對象并進(jìn)行回顧性分析，免疫組化法進(jìn)行檢測癌組織及癌旁組織標(biāo)本中P504s、CK-h、p63、CK5/6 陽性表達(dá)率，分析P504s、CK-h、p63、CK5/6 與臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果 癌組織中P504s 陽性率高于癌旁組織，CK-h、p63、CK5/6 陽性率低于癌旁組織（P<0.05）。P504s、CK-h、p63、CK5/6 表達(dá)與病理分級、分化程度、Gleason 評分具有一定相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論 P504s 在前列腺癌組織中表達(dá)升高，CK-h、p63、CK5/6 在前列腺癌組織中表達(dá)降低，且P504s 表達(dá)水平隨著病理分級、分化程度、Gleason 評分逐漸增強(qiáng)，表明P504s、CK-h、p63、CK5/6 聯(lián)合檢測在前列腺癌的診斷中具有較高價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] α 甲?；o酶A 消旋酶；高分子量角蛋白；p63；細(xì)胞角蛋白5/6；前列腺癌

[中圖分類號] R737? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ?[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.12.010

前列腺癌在男性惡性腫瘤中發(fā)病較高，超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢技術(shù)臨床上應(yīng)用較為廣泛，使前列腺癌的檢出率明顯提高[1-3]。病理學(xué)診斷是對腺泡結(jié)構(gòu)及形態(tài)觀察，是否出現(xiàn)紊亂、異形及浸潤的生長方式[4]。光鏡下前列腺癌組織形態(tài)、良性病變較為相似，鑒別較為困難，誤診、漏診的發(fā)生率較高，而免疫組化技術(shù)有利于提高診斷準(zhǔn)確率[5]。P504s 在支鏈脂肪酸β 氧化過程中發(fā)揮較為重要的作用[6]。

p63 屬于特異性標(biāo)記組織的基底細(xì)胞。CK-h 屬于高分子量角蛋白，存在于前列腺基底細(xì)胞中，有助于前列腺癌的診斷[7]。CK5/6 屬于另一種基底細(xì)胞的標(biāo)志物，在前列腺病變組織中表達(dá)較低[8]。既往雖有研究顯示P504s、CK-h、p63、CK5/6 在前列腺癌中的表達(dá)，但關(guān)于上述各指標(biāo)對生存情況的影響報(bào)道較少。本研究回顧性分析P504s、CK-h、p63、CK5/6在前列腺癌組織中的表達(dá)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取金華市人民醫(yī)院2018 年6 月至2022 年1月171 例前列腺癌患者超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢組織作為研究對象，均為男性，年齡52～78 歲，平均（69.67±8.34）歲；納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《歐洲泌尿外科會(huì)議前列腺癌診斷治療指南》[9]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；①均行超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢；②前列腺特異性抗原正常者；③首次發(fā)現(xiàn)；④臨床病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他腫瘤性疾??；②心、肝、肺等出現(xiàn)病變者；③精神障礙者；④嚴(yán)重出血傾向；⑤直腸、肛周病變；⑥痔瘡者；⑦嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾??；⑧全身嚴(yán)重感染患者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本保存及制備 實(shí)驗(yàn)所取的組織標(biāo)本均為患者腫瘤組織和癌旁組織中的基底細(xì)胞，標(biāo)本保存于–70℃環(huán)境中。10%甲醛固定標(biāo)本，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度約3μm，完成后對標(biāo)本進(jìn)行HE 染色及免疫組化，顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.2.2 P504s、CK-h、p63、CK5/6 檢測 應(yīng)用免疫組化法進(jìn)行檢測癌組織及癌旁組織中P504s、CK-h、p63、CK5/6，將制備好的石蠟切片進(jìn)行脫蠟、水化，自來水進(jìn)行沖洗，依照各指標(biāo)試劑盒進(jìn)行抗原修復(fù)，去除緩沖液（phosphate buffer solution，PBS），滴加過氧化物酶阻斷試劑，孵育10min，PBS 沖洗3 次；滴加動(dòng)物非免疫血清，孵育10min；滴加第一抗體，孵育60min，PBS 沖洗3 次；滴加第二抗體，孵育10min，PBS 沖洗3 次；進(jìn)行鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶試劑滴加，孵育10min，PBS 沖洗3 次，滴加DAB 顯色試劑顯色；沖洗，蘇木精復(fù)染，PBS 返藍(lán)。梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，孵育均在室溫下進(jìn)行。

1.2.3 結(jié)果判定 P504s、CK-h、p63、CK5/6 免疫組化切片均由2 名以上病理科醫(yī)生進(jìn)行獨(dú)立評估。細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核發(fā)生黃至棕褐色為陽性。觀察整個(gè)視野，然后在腫瘤細(xì)胞及間質(zhì)進(jìn)行5 個(gè)高倍視野（×200）隨機(jī)選取，染色強(qiáng)度：0 分：無著色，1 分：淡黃色，2 分：棕黃色，3 分：棕褐色；陽性細(xì)胞：1 分：陽性細(xì)胞≤10%，2 分：10%～50%，3 分：>50%。兩項(xiàng)分值相乘，≥3 分為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料經(jīng)Levene 法檢測具備方差齊性，Shapirowilk檢驗(yàn)符合正態(tài)分布，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x s ）表示，組間比較進(jìn)行獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，組間比較進(jìn)行χ2 檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織、癌旁組織P504s、CK-h、p63、CK5/6陽性表達(dá)率比較

癌組織中P504s 陽性率高于癌旁組織，CK-h、p63、CK5/6 陽性率低于癌旁組織（P<0.05），見表1。

2.2 P504s、CK-h、p63、CK5/6 與前列腺癌臨床特征的相關(guān)性

P504s、CK-h、p63、CK5/6 表達(dá)水平與病理分級、分化程度、Gleason 評分具有一定相關(guān)性（P<0.05），見表2～5。

3 討論

前列腺癌發(fā)病較為隱匿、發(fā)展慢，早期可能無明顯癥狀，難以與前列腺增生等疾病進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別，確診時(shí)可能已發(fā)展為中晚期，因此，深入研究前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中關(guān)鍵的分子標(biāo)志，對于尋找新的診斷治療靶點(diǎn)，改善患者預(yù)后具有重要意義[10-12]。對于前列腺癌的診斷多采用病理診斷進(jìn)行，以腺體結(jié)構(gòu)異常、細(xì)胞核間變以及侵襲生長為原則，但由于前列腺組織較為復(fù)雜，部分良、惡性病變組織之間差異較微小，光鏡下難以辨別[13]。穿刺活檢已成為臨床診斷前列腺病變的重要手段，由于穿刺活檢所取組織較小，前列腺癌組織結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，臨床相關(guān)診斷依據(jù)較少，因此，前列腺穿刺活檢標(biāo)本在前列腺的診斷中較為困難，需與前列腺上皮瘤細(xì)胞病變、前列腺基底細(xì)胞增生等病變進(jìn)行鑒別。因此，需借助于免疫組化染色來幫助診斷準(zhǔn)確性提高[14]。

P504s 基因參與脂肪酸及相關(guān)衍生物的β 氧化。有研究指出[15]，P504s 表達(dá)與前列腺癌關(guān)系密切。另有研究指出[16]，P504s 屬于前列腺癌陽性標(biāo)志物，敏感度較高，在泌尿、生殖等系統(tǒng)相關(guān)腫瘤中均具有陽性表達(dá)，在臨床病理診斷中發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示，與癌旁組織比較，前列腺癌組織中P504s陽性率較高，P504s 與病理分級、Gleason 評分、分化程度呈正相關(guān)關(guān)系，考慮可能是由于前列腺癌的發(fā)病與患者細(xì)胞質(zhì)中支鏈脂肪酸長期處于高水平具有一定的關(guān)系。植烷酸屬于常見支鏈脂肪酸，降植烷酸的植烷酸經(jīng)氧化后分解的主要產(chǎn)物，可激活過氧化物酶體增殖，而P504s 的主要作用底物為植烷酸，因此，免疫組化P504s 與前列腺癌診斷具有較深的聯(lián)系[17]。CK-h 作為基底細(xì)胞的重要標(biāo)志物，若基底細(xì)胞未被侵犯，其表達(dá)較高，對于前列腺癌的診斷、分期起到輔助作用。多數(shù)前列腺癌組織的特點(diǎn)為基底細(xì)胞缺失，因此，CK-h 在前列腺癌組織中表達(dá)較少，甚至不表達(dá)。CK-h 也可特異性識別前列腺組織中的基底細(xì)胞，通過不同前列腺組織中的基底細(xì)胞是否發(fā)生陽性著色及特點(diǎn)進(jìn)行顯示癌組織及非癌組織中基底細(xì)胞的存在情況，在疾病的診斷、鑒別中有著重要作用[18]。

p63 屬于p53 抑癌基因家族成員，主要在基底細(xì)胞核中進(jìn)行表達(dá)，有學(xué)者研究指出，p63 在癌細(xì)胞核中均呈陰性表達(dá)，前列腺增生表達(dá)為陽性，本研究中，前列腺癌組織中p63 陽性率低于癌旁組織，其結(jié)果與上述學(xué)者研究結(jié)果一致[19]。p63 主要是出發(fā)胚胎上皮組織層化、激活靶基因，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期，同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本研究中，p63 在癌旁組織中也可少量表達(dá)為陰性，說明在少數(shù)癌旁組織或前列腺良性疾病中也可能會(huì)出現(xiàn)上皮基底細(xì)胞不連續(xù)的情況，因此，p63 陰性不可單獨(dú)作為診斷前列腺癌的指標(biāo)。細(xì)胞角蛋白CK5/6 屬于目前免疫組化染色進(jìn)行檢測中較為常用的基底細(xì)胞標(biāo)志物，正常組織中多為陽性表達(dá)，腫瘤組織中多表達(dá)為陰性[20]。本研究中，前列腺癌組織中CK5/6 陽性率低于癌旁組織，其結(jié)果與本研究結(jié)果一致。本研究證實(shí)，癌旁組織中，P504s 多為陽性表達(dá)，CK-h、p63、CK5/6 多為陰性表達(dá)，提示前列腺癌組織中存在角蛋白缺失的情況，CK-h、p63、CK5/6 表達(dá)在前列腺癌組織存在缺失，基底細(xì)胞幾乎全部消失，CK-h、p63、CK5/6 分別對基底細(xì)胞的不同部分進(jìn)行標(biāo)記，因此，聯(lián)合檢測P504s、CK-h、p63、CK5/6 表達(dá)對于前列腺癌的診斷準(zhǔn)確性有助于提升，降低誤診的發(fā)生情況[21]。

綜上所述，P504s 在前列腺癌中表達(dá)上調(diào)，CK-h、p63、CK5/6 在前列腺癌中表達(dá)下調(diào)，且與病理分級、分化程度顯著相關(guān)，聯(lián)合檢測有助于臨床評估病情、預(yù)測生存狀況提供參考依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 李征， 楊立新， 劉磊， 等. 前列腺癌基因表達(dá)標(biāo)志物1在膀胱癌組織的表達(dá)變化及其對膀胱癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 中華實(shí)驗(yàn)外科雜志， 2020， 37（7）：1339–1341.

[2] 韋付坤， 闞懿， 劉繼海， 等. 特異性核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1 與轉(zhuǎn)錄因子E 盒結(jié)合鋅指蛋白1 在前列腺癌組織的表達(dá)及其臨床意義[J]. 中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2021， 38（6）： 1067–1070.

[3] SIEGEL D A， O'NEIL M E， RICHARDS T B， et al.Prostate cancer incidence and survival， by stage andrace/ethnicity-united states， 2001–2017[J]. MMWR MorbMortal Wkly Rep， 2020， 69（41）： 1473–1480.

[4] FOSTER C C， WEICHSELBAUM R R， PITRODA S P.Oligometastatic prostate cancer： Reality or figment ofimagination？[J]. Cancer， 2019， 125（3）： 340-352.

[5] 張偉， 施春梅， 張忠新， 等. 核磁共振聯(lián)合超聲融合成像引導(dǎo)下前列腺靶向穿刺對PI-RADS 評分≥3 分的前列腺癌患者的診斷價(jià)值[J]. 影像科學(xué)與光化學(xué)，2021， 39（1）： 96–100.

[6] 楊東. 前列腺癌P504S 蛋白表達(dá)與腫瘤特征及預(yù)后的關(guān)系[J]. 實(shí)用癌癥雜志， 2020， 35（9）： 1419–1422.

[7] 駱楊， 班德文， 何婷玉， 等. p63、34βE12 和S100 在前列腺穿刺活檢組織中的表達(dá)及其對前列腺癌的診斷價(jià)值[J]. 臨床泌尿外科雜志， 2020， 35（9）： 721–724.

[8] 馬志方， 曾勝， 鄶海洋， 等. 雄激素受體對從前列腺癌LNCaP 細(xì)胞分選出的CK5+CK8+細(xì)胞的作用及其調(diào)控機(jī)制[J]. 腫瘤研究與臨床， 2021， 33（1）： 42–47.

[9] 中國抗癌協(xié)會(huì)泌尿男生殖系統(tǒng)腫瘤專業(yè)委員會(huì)前列腺癌學(xué)組. 前列腺癌篩查專家共識[J]. 中華外科雜志，2017， 55（5）： 340–342.

[10] HAFFNER M C， ZWART W， ROUDIER M P， et al.Genomic and phenotypic heterogeneity in prostatecancer[J]. Nat Rev Urol， 2021， 18（2）： 79–92.

[11] 王嬋， 董傳江， 毛崢， 等. ERβ 真核表達(dá)質(zhì)粒對前列腺癌LNCaP 細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及p38 信號通路的作用[J]. 廣東醫(yī)學(xué)， 2016， 37（20）： 3016–3020.

[12] 何桂芳， 黃曉娟， 鄭露露， 等. 前列腺癌組織中N-Myc、p53 的表達(dá)及其臨床意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2019， 35（1）： 10–13.

[13] 胡傳義， 劉修恒， 葛名歡， 等. 肝細(xì)胞生長因子激活因子的抑制因子1 基因在前列腺癌組織中的表達(dá)及其意義[J]. 中華實(shí)驗(yàn)外科雜志， 2012， 29（4）： 744–746.

[14] 王志國， 王友志， 許長寶， 等. 超聲引導(dǎo)下前列腺穿刺聯(lián)合外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測對前列腺癌預(yù)后分析[J]. 中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志（電子版）， 2019， 9（6）：327–332.

[15] LLOYD M D， YEVGLEVSKIS M， LEE G L， et al.α-Methylacyl-CoA racemase （AMACR）： Metabolicenzyme， drug metabolizer and cancermarker P504S[J].Prog Lipid Res， 2013， 52（2）： 220–230.

[16] LUO H H， HUO Z， XIAO Y， et al. ClinicopathologicalFeatures and Expression of P504s， E-cadherin， erythroblasttransformation-specific related gene and estrogen receptorin prostate adenocarcinoma in Tibet[J]. Zhongguo YiXue Ke Xue Yuan Xue Bao， 2021， 43（5）： 761–766.

[17] EVANS A J. Alpha-methylacyl CoA racemase （P504S）：overview and potential uses in diagnostic pathology asapplied to prostate needle biopsies[J]. J Clin Pathol，2003， 56（12）： 892–897.

[18] WANG Y， WANG E， WU G， et al. Immunohistochemicaland ultrastructual study of so-called sclerosing hemangiomaof the lung suggests different origins of cells[J]. ZhongguoFei Ai Za Zhi， 2003， 6（2）： 92–96.

[19] SHAO Y， NIR G， FAZLI L， et al. Improving prostatecancer classification in HE tissue micro arrays using Ki67and P63 histopathology[J]. Comput Biol Med， 2020，127（5）： 104053.

[20] FICHTENBAUM E J， MARSH W L J R， ZYNGER D L.CK5， CK5/6， and double-stains CK7/CK5 and p53/CK5discriminate in situ vs invasive urothelial cancer in theprostate[J]. Am J Clin Pathol， 2012， 138（2）： 190–197.

[21] 楊云杰， 戴波， 葉定偉， 等. 循環(huán)腫瘤細(xì)胞分型對初診高轉(zhuǎn)移負(fù)荷前列腺癌激素敏感時(shí)間的預(yù)測作用[J].中華泌尿外科雜志， 2019， 40（9）： 661–667.

（收稿日期：2022–09–17）

（修回日期：2023–01–06）