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        Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)選消銀顆??傸S酮工藝

        2023-06-27 01:52:30康亞男張文霞
        關(guān)鍵詞:響應(yīng)面總黃酮提取工藝

        康亞男 張文霞

        【摘 要】

        目的:響應(yīng)面法優(yōu)選消銀顆粒總黃酮提取工藝。方法:以總黃酮得率為指標(biāo),以乙醇濃度、提取時(shí)間、液料比為考察因素,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)選出消銀顆??傸S酮提取工藝。結(jié)果:最佳提取工藝條件為:乙醇濃度60%、提取時(shí)間33 min、液料比16∶1,此條件下總黃酮得率為3.24%。結(jié)論:優(yōu)選得到的消銀顆??傸S酮的提取工藝準(zhǔn)確可行,質(zhì)量穩(wěn)定。

        【關(guān)鍵詞】 消銀顆粒;響應(yīng)面;總黃酮;提取工藝

        【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517(2023)06-0039-03

        Optimization of Total Flavonoids in Xiaoyin Granules by Box Behnken Response Surface Methodology

        KANG Yanan ZHANG Wenxia*

        Dezhou Lingcheng District Hospital of Traditional Chinese Medicine,Dezhou 253599,China

        Abstract:

        Objective to optimize the process of total flavonoids in Xiaoyin granules by response surface methodology. Methods taking the yield of total flavonoids as the evaluation index, ethanol concentration, extraction time and liquid-solid ratio as the investigation factors, the best extraction process of total flavonoids from Xiaoyin granules was optimized by box Behnken response surface method on the basis of single factor experiment. Results the optimum extraction conditions of total flavonoids from Xiaoyin granules were as follows: ethanol concentration 60%, extraction time 33 min and liquid-solid ratio 16∶1. Under these conditions, the yield of total flavonoids was 3.24%. Conclusion the optimized extraction process of Flavonoids from Xiaoyin granules is accurate and feasible, and the quality is stable.

        Keywords:

        Xiaoyin Granules; Response Surface; Total Flavonoids; Extraction Process

        消銀顆粒是由地黃、牡丹皮、赤芍、牛蒡子、蟬蛻、白鮮皮等13味中藥經(jīng)加工制成的復(fù)方顆粒制劑,被列為《國(guó)家級(jí)新藥》中藥品種,具有清熱涼血、祛風(fēng)止癢之功效,臨床上常用于治療銀屑病、蕁麻疹[1-2]。研究[3-11]顯示,消銀顆粒組方中的地黃、牡丹皮、赤芍、苦參、金銀花、玄參等9味組成藥中均含有黃酮類成分,具有抗氧化型、清除自由基、延緩衰老、改善血液循環(huán)、降低膽固醇、改善睡眠等多種藥理活性,是消銀顆粒發(fā)揮清熱解毒、涼血祛風(fēng)、補(bǔ)血潤(rùn)膚作用的主要藥效成分。目前,對(duì)于消銀顆粒的質(zhì)量控制主要以芍藥苷、苦參堿、綠原酸等非黃酮類成分進(jìn)行測(cè)定[12],對(duì)黃酮類成分提取工藝研究還未見相關(guān)報(bào)道。Box-Behnken響應(yīng)面法是采用二次回歸方程,擬合多個(gè)因素與多個(gè)響應(yīng)值之間關(guān)系進(jìn)行建模和分析,再通過回歸方程分析優(yōu)選出最佳提取工藝參數(shù)的方法[13],已被廣泛用于中藥及其制劑的有效成分工藝優(yōu)化研究。

        因此,本試驗(yàn)在單因素的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化消銀顆??傸S酮提取工藝,為消銀顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升和有效成分提取提供依據(jù)。

        1 儀器與試藥

        CPA225D型電子天平(德國(guó)賽多利斯);UV5500紫外光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)。消銀顆粒購(gòu)自康盛大藥房(批號(hào)20201126)。蘆丁對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)100080-201605);乙醇為分析純,水為蒸餾水。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 含量測(cè)定

        2.1.1 對(duì)照溶液的制備 精密稱取干燥的蘆丁對(duì)照品10.0 mg,置于100 mL量瓶中,加甲醇超聲溶解,冷卻后,加甲醇至刻度,搖勻,得0.1 mg/L的對(duì)照品溶液。

        2.1.2 供試品溶液的制備 取消銀顆粒1.0 g,置于25 mL錐形瓶中,加入60%乙醇濃度16 mL,超聲提取33 min,得供試品溶液。精密量取2 mL于25 mL容量瓶中,按“2. 1. 2”項(xiàng)方法測(cè)定并計(jì)算總黃酮得率。

        2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL,分別置于25 mL量瓶中,加水至6 mL,加5% NaNO2溶液1 mL,搖勻,放置6 min,再加10% Al (NO3)3溶液1 mL 搖勻,放置6 min,加1 mol/L NaOH溶液10 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min,于500 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定,用相應(yīng)的試劑作空白。以吸光度Y做橫坐標(biāo),濃度X做縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程Y=17.92X-0.006(r=0.9992),表明在質(zhì)量濃度0.004~0.02 mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

        2.1.4 精密度試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.0 mL,放在10 mL容量瓶中,加甲醇適量,定容搖勻,吸取適量在500 nm 波長(zhǎng)下平行測(cè)定 6次,對(duì)測(cè)定的吸光度值進(jìn)行分析。結(jié)果蘆丁吸光度RSD為1.05%,表明儀器的精密度良好。

        2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取消銀顆粒,按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液,吸取適量在500 nm 波長(zhǎng)下平行測(cè)定,將吸光度值代入回歸曲線方程,計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果總黃酮平均含量為30.16 mg/g,RSD為1.25%,表明重復(fù)性良好。

        2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)所制備的供試樣品溶液分別在0 h、3 h、6 h、9 h、12 h于500 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值,將吸光度值代入回歸曲線方程,計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果總黃酮含量的RSD為0.95%,表明供試品溶液避光條件下12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

        2.1.7 加樣回收率試驗(yàn) 取消銀顆粒0.5 g,平行6份,按照1∶1的比例加入蘆丁對(duì)照品,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品,吸取適量在500 nm 波長(zhǎng)下平行測(cè)定,將吸光度值代入回歸曲線方程計(jì)算總黃酮含量及回收率。結(jié)果見表1。

        2. 2 響應(yīng)面法優(yōu)化總黃酮提取工藝

        2.2.1 單因素考察 以總黃酮得率為指標(biāo),分別對(duì)乙醇濃度(20%、40%、60%、80%、100%)、提取時(shí)間(15 min、30 min、45 min、60 min、75 min)、液料比(5∶1、10∶1、15∶1、20∶1、25∶1)進(jìn)行考察。結(jié)果顯示,乙醇濃度選擇60%、提取時(shí)間選擇30 min,液料比選擇15∶1為最佳提取條件。

        2.2.2 響應(yīng)面設(shè)計(jì) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇乙醇濃度、提取時(shí)間、液料比為考察因素,利用Box-Behnken軟件設(shè)計(jì)總黃酮提取條件。各因素水平設(shè)計(jì)見表2。消銀顆粒Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果見表3。

        2.2.3 方差分析 消銀顆??傸S酮含量對(duì)乙醇濃度、提取時(shí)間、液料比的回歸方程為:Y=3.21+0.030A+0.13B+0.076C-0.045AB+0.002AC-0.017BC-0.43A2-0.42B2-0.24C2Z。式中Y代表消銀顆粒總黃酮含量。方程回歸分析及方差分析結(jié)果見表4。結(jié)果顯示,在設(shè)定的區(qū)域內(nèi),所建立的模型達(dá)到極顯著水平(P<0.0001),其中二次項(xiàng)中A2、B2和C2的P值均達(dá)到了極顯著水平(P<0.01),表明方程擬合較好。

        2.2.4 響應(yīng)面分析 應(yīng)用 Design-Expert 9.0.4 軟件繪制出所考察指標(biāo)與影響較顯著的3個(gè)自變量的等高線圖,具體如圖1。結(jié)果最佳提取工藝為:乙醇濃度60.3%、提取時(shí)間32.3 min、液料比15.8∶1,預(yù)測(cè)總黃酮得率為3.22%。

        2.2.5 試驗(yàn)驗(yàn)證 根據(jù)優(yōu)選出的結(jié)果平行 3 份試驗(yàn)提取消銀顆??傸S酮??紤]到實(shí)際操作的方便可行性,將條件修正為:乙醇濃度60%、提取時(shí)間33 min、液料比16∶1,此條件下總黃酮得率為3.24%,與理論預(yù)測(cè)值無顯著性差異,方程與實(shí)際情況擬合良好。

        3 討論

        3.1 提取方法的選擇 消銀顆粒組成藥中包括地黃、牡丹皮、金銀花、白鮮皮、大青葉、紅花在內(nèi)的多種中藥均含有黃酮類成分,超聲和回流提取2種方法提取結(jié)果顯示,超聲提取較回流提取效果更佳,且具有操作簡(jiǎn)單方便,提取時(shí)間短、提取溫度低、提取雜質(zhì)少、提取成本低等優(yōu)勢(shì),因此,選擇超聲提取法提取消銀顆粒中總黃酮。

        3.2 優(yōu)化方法的選擇 正交設(shè)計(jì)是從全面試驗(yàn)中挑選出部分有代表性的點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn),具備“均勻分散,整齊可比”的特點(diǎn),但也存在著重點(diǎn)不突出、適用試驗(yàn)水平數(shù)不高的試驗(yàn)等缺點(diǎn)。響應(yīng)面法是一種將統(tǒng)計(jì)學(xué)和數(shù)學(xué)技術(shù)融為一體,采用回歸方程來擬合各因素水平與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系,解決多變量問題的一種統(tǒng)計(jì)方法,具有只要模型建立正確,就可預(yù)測(cè)任一條件組合下的響應(yīng)值直觀地看出函數(shù)關(guān)系的優(yōu)點(diǎn),已被廣泛用于藥用植物多糖、黃酮、多酚等活性成分的提取工藝優(yōu)化。因此,本項(xiàng)目選擇響應(yīng)面法優(yōu)選消銀顆粒總黃酮提取工藝。

        4 小結(jié)

        消銀顆粒處方中多種組成藥含有黃酮類化合物,可能是消銀顆粒發(fā)揮藥效的主要化合物。本實(shí)驗(yàn)所得消銀顆粒總黃酮的最佳提取工藝為:乙醇濃度60.3%、提取時(shí)間32.3 min、液料比15.8∶1。此條件下總黃酮提取率最高,為3.22%,驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明響應(yīng)面法優(yōu)選的提取工藝是最優(yōu)工藝,為消銀顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升完善提供了依據(jù)。

        參考文獻(xiàn)

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        (收稿日期:2022-08-01 編輯:劉 斌)

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