余友斌,黃溫赟,崔銘超

(1 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院漁業(yè)機(jī)械儀器研究所,上海 200092;2 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)裝備與工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 200092;3 青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室深藍(lán)漁業(yè)工程聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室,山東 青島 266237)

大黃魚是一種重要的海洋經(jīng)濟(jì)魚類,主要分布于中國(guó)、日本和韓國(guó)[1]。因其生長(zhǎng)速度快、環(huán)境耐受廣、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高以及市場(chǎng)接受范圍廣等優(yōu)勢(shì),目前已經(jīng)成為中國(guó)海水養(yǎng)殖量最高的魚類[2-3]。2021年,中國(guó)大黃魚產(chǎn)量達(dá)到254 224 t,占中國(guó)海洋魚類養(yǎng)殖總量的13.79%[4]。大黃魚在中國(guó)主要為粗放式的近岸網(wǎng)箱養(yǎng)殖,由于水體溶氧、廢物處理能力等因素的限制,網(wǎng)箱養(yǎng)殖中養(yǎng)殖密度無(wú)法得到有效的提高[5]。而工業(yè)化養(yǎng)殖如封閉式養(yǎng)殖工船模式等具有環(huán)境可控、資源利用好、養(yǎng)殖密度高等優(yōu)勢(shì),是未來(lái)大黃魚養(yǎng)殖高質(zhì)量發(fā)展的重要途徑[6-7]。

在工業(yè)化的養(yǎng)殖中,增加養(yǎng)殖密度是提高生產(chǎn)效益的直接途徑。然而,持續(xù)高密度養(yǎng)殖常對(duì)魚類養(yǎng)殖造成不利的影響[8-9]。目前已經(jīng)對(duì)如日本黃姑魚(Nibeajaponica)、草魚(Ctenopharyngodonidellus)、鯽魚(Carassiusauratus)、青石斑魚(Epinephelusawoara)等多種魚類的養(yǎng)殖密度開展了研究[10-14]。這些研究表明,高密度養(yǎng)殖可能對(duì)魚類的生長(zhǎng)、存活、代謝、消化、免疫和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等方面產(chǎn)生不利影響。遭受脅迫的魚類通常會(huì)經(jīng)歷一系列生化和生理變化以維持體內(nèi)平衡。例如,在高密度應(yīng)激狀態(tài)下,通常會(huì)檢測(cè)到血漿皮質(zhì)醇、葡萄糖和游離氨基酸水平顯著升高,通過(guò)增加能量代謝的方式來(lái)應(yīng)對(duì)應(yīng)激[15]。另外,研究也表明不同魚類所適宜的養(yǎng)殖密度也有所不同[16]。

近年來(lái),鑒于大黃魚在海洋漁業(yè)中的重要性,科研人員在大黃魚養(yǎng)殖環(huán)境適應(yīng)等方面已經(jīng)開展了諸多研究[17-19]。虞嘉玥等[20]研究了短期密度脅迫對(duì)大黃魚的影響,結(jié)果表明高密度可影響大黃魚機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)。然而,工廠化流水養(yǎng)殖條件下養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚的影響關(guān)系卻未有報(bào)道。

本研究旨在探討3種不同養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚的影響,通過(guò)比較不同處理下的代謝酶活性、消化酶活性、肌肉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值以及生長(zhǎng)、存活等指標(biāo)的變化規(guī)律,以探討大黃魚在不同養(yǎng)殖密度下的生長(zhǎng)變化和生理適應(yīng)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚和養(yǎng)殖管理

本研究在青島膠南水產(chǎn)養(yǎng)殖試驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)所用的大黃魚[體質(zhì)量(120±5)g]購(gòu)自寧德市富發(fā)水產(chǎn)有限公司?；铘~車轉(zhuǎn)運(yùn)至基地后,挑選健康無(wú)傷的魚在連續(xù)充氧的16 m3(長(zhǎng)4 m、寬4 m、高1 m)水泥池中暫養(yǎng)14 d。暫養(yǎng)期間每天早、晚(8:00,17:00)各投喂一次浮性膨化顆粒配合飼料,待攝食完全正常后按飽食投喂,日投喂量約為魚體質(zhì)量的1.2%～1.5%,具體投喂量根據(jù)大黃魚的攝食情況隨時(shí)調(diào)整,盡量減少殘飼的出現(xiàn)。具體投喂時(shí)先少量投飼,等魚群都開始起浮攝食時(shí),大量投喂,待魚群下沉不再攝食時(shí),停止投喂,稱量記錄每池的投喂量。

該試驗(yàn)采用室內(nèi)工廠化流水養(yǎng)殖模式,水體的交換率控制在6次/d。每天在投喂后2 h排水一次,排水量80%,以便充分清除殘飼和糞便,并視水質(zhì)情況每3 d或每周清理一次池底和池壁,保持各池水質(zhì)的良好和一致。養(yǎng)殖用水為砂濾地下海水,養(yǎng)殖期間,每天檢測(cè)各養(yǎng)殖池的水體水溫、溶氧和鹽度,每周各池測(cè)試一次水體氨氮水平。各池的水質(zhì)保持一致,水溫、溶氧和鹽度分別為 21±3 ℃、8.0±1.0 mg/L和(24±1)‰,氨氮含量均保持在0.02 mg/L以下。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)大黃魚設(shè)置3個(gè)初始養(yǎng)殖密度:分別為低密度組(4.92 kg/m3,LD),中密度組(7.56 kg/m3,MD)和高密度組(10.08 kg/m3,HD),每個(gè)密度組設(shè)置3個(gè)平行,每個(gè)平行使用一個(gè)養(yǎng)殖池,共使用9個(gè)養(yǎng)殖池。暫養(yǎng)結(jié)束后,按照試驗(yàn)設(shè)計(jì),低密度每池投放650尾,中密度每池投放1 000尾,高密度每池投放1 350尾,養(yǎng)殖試驗(yàn)為期5個(gè)月。試驗(yàn)期間的管理與暫養(yǎng)期間相同,水質(zhì)理化條件也與暫養(yǎng)期間保持相同,每天記錄死亡的魚數(shù)量。

1.3 樣本采集

試驗(yàn)結(jié)束后,將所有的大黃魚饑餓24 h。每個(gè)養(yǎng)殖池隨機(jī)采集6尾大黃魚,每組采集18尾,一共采集54尾。取樣前采用質(zhì)量濃度100 mg/L的MS-222麻醉后,測(cè)量所有樣本的濕重和體長(zhǎng)。隨后,用1 mL注射器抽取血液,4℃過(guò)夜,3 000 g/min離心10 min分離獲取血清用于生理生化檢測(cè)。接著,在冰上對(duì)樣本進(jìn)行解剖,依次獲取胃、前腸、肝臟組織,用于消化和代謝酶活性檢測(cè)。最后,使用手術(shù)剪刀在魚的背部采集一塊2 cm×3 cm大小的去皮肌肉,用于營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)。所有組織除血液外采集后均立即置于液氮中,隨后采用干冰運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室,長(zhǎng)期保存于-80℃,檢測(cè)時(shí)取出。

1.4 肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

依據(jù)AOAC(2003)標(biāo)準(zhǔn)[21]中的方法,對(duì)肌肉組織中的水分、灰分、粗蛋白和粗脂肪含量進(jìn)行檢測(cè)。該測(cè)試共檢測(cè)9份樣本,每組3份,每份由同個(gè)養(yǎng)殖池的6尾魚樣品混合而成。水分的檢測(cè)采用脫水法,將樣本在DHG-9240型烘干機(jī)中于105℃條件下干燥至恒重,稱量計(jì)算出水分含量?；曳值臋z測(cè)采用焚燒法,樣品在600 ℃的馬弗爐中焚燒12 h,稱量計(jì)算出灰分含量。粗蛋白的檢測(cè)采用單酸消化法,使用Kjeldhal裝置(Kelplus DISTYL-BS,Pelican Equipments Pvt.Ltd.Chennai,India)進(jìn)行測(cè)定。采用索氏抽(索氏抽提儀B-801,Switherland)提法,以乙醚為抽提劑測(cè)定粗脂肪含量。

1.5 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

本試驗(yàn)樣品血清中包括葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、總膽固醇(T-CHO)以及乳酸(LD)的含量檢測(cè)均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的商業(yè)試劑盒,相應(yīng)操作參照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.6 酶活力的測(cè)定

消化酶活力檢測(cè)內(nèi)容包括胃中的胃蛋白酶(PP)活力以及腸道中的胰蛋白酶(Try)、淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)和纖維素酶(CL)活力。代謝酶活力檢測(cè)內(nèi)容包括肝臟中丙酮酸激酶(PK)、己糖激酶(HK)、乳酸脫氫酶(LDH)、琥珀酸脫氫酶(SDH)。

準(zhǔn)確稱量所采集的胃、腸道和肝臟組織,向各組樣品中分別加入生理鹽水(1∶ 9,w/v),隨后充分研磨,并在3 500 g/min、離心半徑10 cm條件下離心10 min,取上清進(jìn)行酶活性檢測(cè)。以上酶活力測(cè)定均采用商業(yè)試劑盒檢測(cè)(南京建成生物工程研究所,南京),嚴(yán)格參照說(shuō)明書進(jìn)行相應(yīng)操作,使用酶標(biāo)儀(Thermo fisher FC 1510)測(cè)定。組織總TP測(cè)定按照考馬斯亮藍(lán)法[22],以牛血清白蛋白(BSA)作為標(biāo)準(zhǔn),采用試劑盒(南京建成)進(jìn)行。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)魚的增重率(%)、肥滿度(g/cm3)以及存活率(%)等相關(guān)生長(zhǎng)指標(biāo)的計(jì)算參考倪金金等[23]的方法。

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0(Chicago,IL,USA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)來(lái)表示試驗(yàn)數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)數(shù)變換來(lái)滿足方差齊性分析和標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的要求。采用單因素方差分析(ANOVA)和鄧肯(Ducan)多重比較分析來(lái)確定不同組間的差異性,P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;使用GraphPad Prism 5進(jìn)行圖表制作。

2 結(jié)果

2.1 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚生長(zhǎng)、存活的影響

本試驗(yàn)大黃魚在3個(gè)不同的初始放養(yǎng)密度下,養(yǎng)殖5個(gè)月。結(jié)果發(fā)現(xiàn),大黃魚的增重率隨養(yǎng)殖密度的增加呈下降趨勢(shì),且高密度組的增重率顯著低于低、中兩個(gè)密度組(P<0.05),低、中密度組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。不同密度組間的存活率和肥滿度無(wú)顯著性差異(P>0.05),但均呈現(xiàn)隨養(yǎng)殖時(shí)間增加而降低的趨勢(shì)。試驗(yàn)結(jié)束后,低密度組密度為10.38 kg/m3、中密度組密度為14.41 kg/m3、高密度組密度為18.71 kg/m3(表 1)。

表1 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚生長(zhǎng)、存活的影響Tab.1 Effects of different densities on the growth of large yellow croaker

2.2 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚肌肉成分的影響

大黃魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分受養(yǎng)殖密度影響顯著(表2)。高密度組和中密度組的魚體肌肉水分和灰分含量均顯著高于低密度組,且高密度組顯著高于中密度組。與低密度組相比,高密度組和中密度組的魚體肌肉的粗蛋白含量顯著降低(P<0.05),且高密度組的粗蛋白含量較中密度組也發(fā)生了顯著性降低。各密度組大黃魚的肌肉粗脂肪水平隨著養(yǎng)殖密度的增加呈下降趨勢(shì),但各組之間沒有顯著性差異(P>0.05)。

表2 不同養(yǎng)殖密度下大黃魚肌肉組織的營(yíng)養(yǎng)組成Tab.2 Nutrients composition in the muscle tissues of Larimichthys crocea reared under the three experimental groups

2.3 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚血清生化指標(biāo)的影響

大黃魚在不同養(yǎng)殖密度下養(yǎng)殖5個(gè)月后,各組魚體血清生化成分的含量變化情況如圖1所示。大黃魚血清中的乳酸水平隨養(yǎng)殖密度的增加而不斷增加,中、高密度組的該指標(biāo)含量顯著高于低密度組(P<0.05),且中、高密度組間不存在顯著性差異(P>0.05)。此外,血清中的葡萄糖、總膽固醇及總蛋白在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)含量變化不大,在不同密度組之間不存在顯著性差異(P>0.05)。

圖1 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚血清生理生化指標(biāo)的影響Fig.1 Effects of density on physicological and biochemical indexes in serum of large yellow croaker

2.4 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚體內(nèi)4種代謝酶活力的影響

不同養(yǎng)殖密度下養(yǎng)殖大黃魚5個(gè)月,肝臟組織的代謝酶活性如圖2 所示。大黃魚肝臟代謝酶活性隨養(yǎng)殖密度的增大呈上升趨勢(shì),高密度組的丙酮酸激酶(PK)、琥珀酸脫氫酶(SDH)及己糖激酶(HK)活性顯著高于中密度組和低密度組(P<0.05),中密度組和低密度組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。此外,乳酸脫氫酶(LDH)含量隨養(yǎng)殖密度增加而不斷升高,高密度組的該指標(biāo)含量顯著高于中、低密度組(P<0.05),且中密度組顯著高于低密度組(P<0.05)。

圖2 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚肝臟代謝酶活動(dòng)的影響Fig.2 Effects of density on metabolic enzyme activity in liver of large yellow croaker

2.5 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚機(jī)體5種消化酶活力的影響

在高密度長(zhǎng)時(shí)間養(yǎng)殖下,大黃魚消化組織中的消化酶活性發(fā)生顯著性的變化,與養(yǎng)殖密度呈負(fù)相關(guān)(圖3)。在胃和腸道組織中,高密度和中密度組的蛋白酶(PP)、淀粉酶(AMS)、纖維素酶(CL)、脂肪酶(LPS)活力均顯著低于低密度組(P<0.05),但高密度組與中密度組間差異顯著(P>0.05)。此外,高密度組的胰蛋白酶(Try)活力僅顯著低于低密度組(P<0.05),這兩組與中密度組相比,不存在顯著性差異(P>0.05)。

圖3 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚胃、腸道中消化酶活力的影響Fig.3 Effects of density on degestive enzyme activities in stomach and intestine of large yellow croaker

3 討論

3.1 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚生長(zhǎng)的影響

3.2 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚營(yíng)養(yǎng)組成的影響

大黃魚肌肉作為主要的可食部分,肌肉的組分含量是評(píng)價(jià)其營(yíng)養(yǎng)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的重要指標(biāo)[31]。本研究發(fā)現(xiàn),養(yǎng)殖密度能夠顯著影響大黃魚的肌肉水分和灰分含量,并且隨養(yǎng)殖密度的增加而提升,這與學(xué)者在大雜交鱘和北極鮭(Salvelinusalpinus)在養(yǎng)殖密度上研究結(jié)果一致[32-33]。本研究還發(fā)現(xiàn),養(yǎng)殖密度與魚肌肉粗蛋白和粗脂肪含量呈負(fù)相關(guān),且高密度組的粗蛋白含量發(fā)生顯著性減低。Omar等[34]研究也發(fā)現(xiàn)類似的規(guī)律,胡子鲇(Clariaslazera)在高密度條件下其魚體粗蛋白隨著養(yǎng)殖密度增大顯著降低。結(jié)合已有研究,推測(cè)造成大黃魚肌肉營(yíng)養(yǎng)組分變化的原因可能是大黃魚在高密度脅迫下,機(jī)體內(nèi)部需要?jiǎng)訂T更多的能量以滿足額外的需求,因此肌肉中所儲(chǔ)存的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)被大量消耗,轉(zhuǎn)化為能量供應(yīng)的反應(yīng)底物,而有機(jī)質(zhì)的大量消耗導(dǎo)致了水分和灰分的相應(yīng)增加。

3.3 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚血清生化的影響

魚類血清生化數(shù)據(jù)可用來(lái)評(píng)判魚類對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝取、吸收和代謝的情況[35]。本試驗(yàn)結(jié)束時(shí),3個(gè)密度組血糖、總蛋白和總膽固醇含量沒有顯著差異,這可能是因?yàn)楦呙芏冉M魚處于慢性密度脅迫條件下這些物質(zhì)慢慢地趨于穩(wěn)定。與之相似的是,大雜交鱘幼魚在持續(xù)60 d的高密度養(yǎng)殖條件下,其血糖含量也未發(fā)生顯著性變化[36]。但其總蛋白和總膽固醇含量均發(fā)生了顯著性降低,這種差異可能與魚的種類或規(guī)格有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn),高密度組大黃魚血清中的乳酸含量顯著性升高,這與銀鯧在高密度養(yǎng)殖下乳酸水平顯著上升一致,推測(cè)原因?yàn)轸~體為抵抗高密度脅迫,通過(guò)加強(qiáng)糖異生作用,增加能量供應(yīng)以抵不利環(huán)境,而乳酸作為該作用中的重要物質(zhì)顯著增加[37]。

3.4 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚代謝酶活力的影響

魚類代謝酶是一類參與機(jī)體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要物質(zhì)[38]。本研究結(jié)果表明,大黃魚肝臟中的丙酮酸激酶(PK)、琥珀酸脫氫酶(SDH)、乳酸脫氫酶(LDH)及己糖激酶(HK)活性均隨著飼養(yǎng)密度的增加而顯著增加的趨勢(shì)。其中,高密度養(yǎng)殖通過(guò)提升大黃魚機(jī)體內(nèi)丙酮酸激酶和己糖激酶的活力,促進(jìn)了機(jī)體的能量消耗,通過(guò)糖異生作用生產(chǎn)更多的能量來(lái)增強(qiáng)機(jī)體對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力[39]。類似的研究表明,嘉魚(Salvelinusfontinalis)在高密度養(yǎng)殖條件下的多種代謝酶活性如磷酸果糖激酶、果糖二磷酸酶等酶活力顯著提升,從而更多地調(diào)動(dòng)魚體內(nèi)甘油三酯的來(lái)源物質(zhì)、促進(jìn)甘油的糖異生作用,以應(yīng)對(duì)環(huán)境對(duì)機(jī)體的不利影響[38]。琥珀酸脫氫酶和乳酸脫氫酶是動(dòng)物體內(nèi)有氧和無(wú)氧呼吸過(guò)程中重要的兩個(gè)酶,當(dāng)大黃魚在擁擠環(huán)境應(yīng)激導(dǎo)致能量需求增加時(shí),通過(guò)厭氧代謝來(lái)提供更多的能量,而乳酸就是一種無(wú)氧代謝的標(biāo)志[40-41]。以上結(jié)果同時(shí)驗(yàn)證了大黃魚機(jī)體營(yíng)養(yǎng)組分中的粗蛋白和粗脂肪含量降低和血清中乳酸含量升高的原因,表明了不同養(yǎng)殖密度對(duì)魚類的能量代謝產(chǎn)生影響的同時(shí),改變了魚體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組成情況,從而對(duì)魚類的肌肉品質(zhì)和能量積累產(chǎn)生不利影響。

3.5 養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚消化酶活力的影響

魚類消化酶活性是一類反映魚體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收能力高低的重要指標(biāo)[42-43]。研究發(fā)現(xiàn),銀鯧和羅非魚的消化酶活性受養(yǎng)殖密度影響會(huì)發(fā)生顯著改變[37,44]。本試驗(yàn)結(jié)束時(shí),高密度組大黃魚所檢測(cè)的4種消化酶活性相較于中、低密度組,均發(fā)生顯著性降低,說(shuō)明高密度不利于魚體組織對(duì)飼料等外界營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收,也從側(cè)面揭示了高密度組生長(zhǎng)速度較慢的原因。

4 結(jié)論

綜上所述,較高的養(yǎng)殖密度與大黃魚的生長(zhǎng)性能呈負(fù)相關(guān),且能夠顯著影響魚體的物質(zhì)消化、能量代謝和營(yíng)養(yǎng)積累能力。大黃魚在高密度飼養(yǎng)條件下通過(guò)顯著提升代謝酶的活性加劇魚體代謝能的增加以應(yīng)對(duì)不利的環(huán)境條件,同時(shí),由于擁擠脅迫的原因魚體對(duì)外界營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用能力下降,使得在吸收更少能量的同時(shí)又消耗了更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),因此,用于生長(zhǎng)的能量減少?gòu)亩种屏唆~體的生長(zhǎng)。適宜的養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚品質(zhì)和福利具有重要意義。由于本試驗(yàn)未設(shè)置更多的養(yǎng)殖密度梯度,封閉式流水養(yǎng)殖系統(tǒng)下養(yǎng)殖密度對(duì)大黃魚生長(zhǎng)性能的影響以及確切的作用機(jī)制仍有待于進(jìn)一步的研究。