白如君　劉俊　周有利

摘要 目的：研究燈盞花素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠的保護(hù)機(jī)制及對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的作用機(jī)制。方法：選取60只SD大鼠，隨機(jī)分為健康組、模型組、燈盞花素低劑量組（BL組）、燈盞花素高劑量組（BH組），每組15只。采用蘇木精-伊紅（HE）染色觀察血管形態(tài)；逆轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)Wnt信使RNA（mRNA）、卷曲蛋白1（FZD1） mRNA、軸蛋白1（AXIN1） mRNA、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β） mRNA、β-連環(huán)素 mRNA、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF） mRNA；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（CRP）；顯微鏡觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)；MTT測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖；蛋白質(zhì)印跡法（Western Blotting）測(cè)Wnt、FZD 1、AXIN1、GSK-3β、β-連環(huán)素、VEGF水平。結(jié)果：健康組大鼠血管內(nèi)無(wú)明顯改變；模型組有明顯血管損傷；BL組與BH組大鼠血管損傷有所改善，且以BH組效果明顯。與健康組比較，模型組血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙寬、細(xì)胞形態(tài)變小、脫落；BL組血管內(nèi)皮細(xì)胞與模型組較為接近；BH組血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙變窄且凋亡減少，形態(tài)有所改善。與健康組比較，模型組Wnt、VEGF、FZD1、β-連環(huán)素、AXIN1、血管內(nèi)皮細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)OD值均降低，GSK-3β、TNF-α、CRP、血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率升高（P<0.05），與模型組比較，BL組與BH組Wnt、VEGF、FZD1、β-連環(huán)素、AXIN1、血管內(nèi)皮細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)OD值均升高，GSK-3β、TNF-α、CRP、血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率降低（P<0.05），且以BH組效果更為顯著（P<0.05）。結(jié)論：燈盞花素通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路表達(dá)，控制血管的穩(wěn)定性，從而對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠的起保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞 燈盞花素；血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠；Wnt/β-catenin信號(hào)通路；卷曲蛋白1；軸蛋白1；β-連環(huán)素；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；糖原合成酶激酶-3β

Effects of Breviscapine on Wnt/β-catenin Signaling Pathway and Inflammatory Mediators in Rats with Vascular Endothelial Cell Injury

BAI Rujun，LIU Jun，ZHOU Youli

（Tianyou Hospital Affiliated to Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430000，China）

Abstract Objective：To study the protective mechanism of breviscapine on rats with vascular endothelial cell injury and its mechanism on the Wnt/β-catenin signaling pathway.Methods：Sixty SD rats were randomly divided into a healthy group，a model group，a low-dose breviscapine group（BL group），and a high-dose breviscapine group（BH group），with 15 rats in each group.Blood vessel morphology was observed by HE staining，and the mRNA expression of Wnt，F(xiàn)ZD1，AXIN1，GSK-3β，β-catenin，and VEGF was detected by RT-PCR.TNF-α and CRP were measured by ELISA.The morphology of vascular endothelial cells was observed under the microscope.MTT was used to measure vascular endothelial cell proliferation.The levels of Wnt，F(xiàn)ZD1，AXIN1，GSK-3β，β-catenin，and VEGF were measured by Western blot.Results：There were no obvious changes in the blood vessels of healthy rats.The model rats showed obvious vascular injury.Vascular injury was improved in the BL group and the BH group，especially in the BH group.Compared with the healthy group，the model group showed wider space between vascular endothelial cells and smaller and exfoliated cells.The vascular endothelial cells of the BL group were similar to those of the model group.The BH group had narrowed vascular endothelial cell space and reduced apoptosis，and the morphology was improved.Compared with the healthy group，the model group showed decreased OD values of Wnt，VEGF，F(xiàn)ZD1，β-catenin，AXIN1，and vascular endothelial cells at different time points，and increased apoptosis rates of GSK-3β，TNF-α，CRP，and vascular endothelial cells（P<0.05）.Compared with the model group，the BL and BH groups showed increased OD values of Wnt，VEGF，F(xiàn)ZD1，β-catenin，AXIN1，and vascular endothelial cells at different time points and decreased apoptosis rates of GSK-3β，TNF-α，CRP，and vascular endothelial cells（P<0.05），and such changes were more significant in the BH group（P<0.05）.Conclusion：Breviscapine can control vascular stability by regulating the expression of the Wnt/β-catenin pathway，thereby protecting against vascular endothelial cell injury in rats.

Keywords Breviscapine; Vascular endothelial cell injury rats; Wnt/β-catenin signaling pathway; FZD1; AXIN1; β-catenin; VEGF; GSK-3β

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2023.01.015

近年來(lái)，我國(guó)心腦血管疾病的發(fā)病率逐年遞增，動(dòng)脈硬化是其產(chǎn)生的根本。研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是動(dòng)脈硬化的始動(dòng)環(huán)節(jié)或關(guān)鍵因素［1］。血管內(nèi)皮細(xì)胞可修復(fù)機(jī)體所受到的損傷，具有促進(jìn)血管新生、止血、抗血栓、參與免疫活動(dòng)等功能。血管內(nèi)皮在遇到損傷時(shí)，會(huì)增加縮血管因子、減少舒血管因子的釋放，破壞血管間平衡，導(dǎo)致血管疾病產(chǎn)生［2-3］。因此，保持內(nèi)皮細(xì)胞功能的完整性，在心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中起重要作用，心腦血管疾病具有發(fā)病率高、病死率高、致殘率高、并發(fā)癥多和復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，且發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)，有效的治療方法相對(duì)缺乏［4-5］。因此，尋找新的治療方法和有效的干預(yù)策略是當(dāng)前心腦血管領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。有研究證實(shí)中藥通過(guò)調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路對(duì)于心腦血管疾病具有較好的療效。燈盞花素是從菊科飛蓬屬植物短亭飛蓬中提取的黃酮類(lèi)化合物，其主要成分為燈盞乙素，還含有少量的燈盞甲素，具有保護(hù)缺血性腦血管疾病、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能、緩解腦血管痙攣、降低血脂、調(diào)節(jié)免疫及減輕炎癥反應(yīng)、抗自由基損傷、抑制血小板凝集等作用。臨床上常用于治療腦梗死及腦血栓、腎病綜合征、糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。另有研究證實(shí)Wnt/β-catenin（β-連環(huán)素）信號(hào)通路對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化血管損傷具有一定的改善作用［6］。Wnt是一種通過(guò)分泌的形式發(fā)揮作用的糖蛋白，可促進(jìn)β-連環(huán)素積累，游離的β-連環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞核后具有調(diào)控基因表達(dá)的能力；Wnt信號(hào)具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生物活性的作用，在成人機(jī)體內(nèi)主要參與體內(nèi)平衡穩(wěn)定［7］。因此，本文研究燈盞花素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠的保護(hù)機(jī)制及對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物及細(xì)胞 選取60只健康雄性SD大鼠，6～8周齡，體質(zhì)量120～130 g，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生公司，許可證號(hào)：SYXK（遼）2019-0214，常規(guī)飼養(yǎng)1周，自由飲食、飲水，溫度23～24 ℃，相對(duì)濕度40%～50%。大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞（CardiacMicrovascular Endothelial Cells，CMECs）購(gòu)自上海賓穗生物科技有限公司（貨號(hào)：BS-C00866146）。本研究已通過(guò)武漢科技大學(xué)附屬天佑醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)（倫理審批號(hào)：2021-036-8）。

1.1.2 藥物 燈盞花素原料粉（昆明振華制藥公司，批號(hào)：27740-01-8），用適量pH 6.8的磷酸緩沖鹽溶液（Phosphate Buffer Saline，PBS）溶解，加注射用水配成10%（W/V）溶液。

1.1.3 試劑與儀器 二甲苯（寧波玖林公司，批號(hào)：8877087），蛋白裂解液（上海如吉公司，編號(hào)：111-11-5），甲醛（濟(jì)南旺杰公司，編號(hào)：30525-89-4），酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒（武漢伊萊瑞特公司，貨號(hào)：E-EL-）；BECKMAN COULER HMX全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀（貝克曼庫(kù)爾特公司，美國(guó)，型號(hào)：LH750），發(fā)色底物法試劑盒（上海冠東生物科技有限公司，法國(guó)，貨號(hào)：220502）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 采用隨機(jī)數(shù)字表法將60只大鼠分為健康組、模型組、燈盞花素低劑量組（BL組）、燈盞花素高劑量組（BH組），每組15只。健康組大鼠不處理，其余大鼠麻醉后切開(kāi)右腹股溝區(qū)，暴露股動(dòng)脈，遠(yuǎn)心端結(jié)扎，近心端手術(shù)絲線(xiàn)拉開(kāi)，在結(jié)扎線(xiàn)上方采用手術(shù)剪做橫切口，從切口向腹股溝方向插入長(zhǎng)2 cm直徑0.138 mm鎳鈦記憶合金球囊導(dǎo)絲，至胸主動(dòng)脈5 cm處，停留1 min，反復(fù)3次，造成動(dòng)脈血管擴(kuò)張、內(nèi)膜剝離，后取出導(dǎo)絲，結(jié)扎近心端，松開(kāi)絲線(xiàn)，恢復(fù)血流。

將CMECs分為健康組、模型組、BL組、BH組。模型組、BL組與BH組，給予脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)建立血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型：將細(xì)胞用含10%胎牛血清的RMPI-1640培養(yǎng)基接種于96孔板，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×104/mL，每孔200 μL。根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)，待細(xì)胞完全貼壁后用空白培養(yǎng)基饑餓處理12 h后，用2.5 μg/mL的LPS損傷24 h建立血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。

1.2.2 給藥方法 1）大鼠：建模24 h后，給予BL組與BH組大鼠燈盞花素溶液灌胃，單次劑量分別為50 μmol/L、200 μmol/L，1次/d，模型組及健康組給予等量生理鹽水灌胃1次/d，共14 d。2）細(xì)胞：在BL組與BH組培養(yǎng)基中分別加入50 μmol/L、200 μmol/L的燈盞花素與血管內(nèi)皮損傷細(xì)胞共培養(yǎng)72 h后胰酶消化、離心、重懸。37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，隔日換液。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 蘇木精-伊紅（Hematoxylin-Eosin，HE）染色檢測(cè)血管形態(tài) 灌胃結(jié)束后，取各組大鼠，麻醉處死，留取胸主動(dòng)脈血管段，甲醛固定，硝酸脫鈣，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)切片，HE染色，光鏡下觀察染色結(jié)果。

1.2.3.2 逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)Wnt mRNA、Wnt受體卷曲蛋白1（Frizzled1，F(xiàn)ZD1） mRNA、軸蛋白1（AXIN1）mRNA、糖原合成酶激酶-3β（Glycogen Synthase Kinase，GSK-3β）mRN、β-連環(huán)素 mRNA、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）mRNA。

取大鼠胸主動(dòng)脈血管段組織，加入少量蛋白裂解液，提取單細(xì)胞懸液沖洗后放于無(wú)菌試管管中，按Trizol法提取總RNA，Primer 5.0合成引物。將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以ACTB為內(nèi)參，PCR條件：95 ℃ 2 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，70 ℃ 30 s，總計(jì)40個(gè)循環(huán)，采用2-△△Ct法分析［8］。見(jiàn)表1。

1.2.3.3 檢測(cè)各組大鼠腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive Protein，CRP）水平 取各組大鼠腹腔靜脈血2 mL，離心半徑8 cm，1 250 r/min離心5 min，取上清保存于-20 ℃。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)TNF-α、CRP水平。

1.2.3.4 顯微鏡觀察各組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)取各組CMECs用PBS洗滌后，離心半徑8 cm，800 r/min離心5 min，選擇100 μL的1×結(jié)合緩沖液，進(jìn)行重懸細(xì)胞操作，提取細(xì)胞懸液顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.2.3.5 MTT法檢測(cè)各組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況 取各組CMECs用PBS洗滌，離心半徑8 cm，800 r/min離心5 min，以8×103個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，待細(xì)胞密度至50%時(shí)，換液，分別孵育12 h、24 h、48 h后用MTT法檢測(cè)各孔光密度（Optical Density，OD）值，通過(guò)OD值的變化判斷細(xì)胞增殖能力大小，OD值越大細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)。

1.2.3.6 TUNEL檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡 取各組大鼠胸主動(dòng)脈血管段組織與蛋白酶K室溫孵育15～30 min，PBS清洗后加入TUNEL檢測(cè)液，常溫?zé)o光孵育1 h，后PBS沖洗3次。加50 μL converter-POD，常溫?zé)o光孵育0.5 h。PBS清洗，DAB液顯色，沖洗，蘇木精復(fù)染，脫水透明，封片。熒光顯微鏡下觀察，并計(jì)數(shù)其中發(fā)熒光的陽(yáng)性細(xì)胞。

1.2.3.7 蛋白質(zhì)印跡法（Western Blotting）檢測(cè)Wnt、FZD 1、AXIN1、GSK-3β、β-連環(huán)素、VEGF水平取各組細(xì)胞，胰酶消化，離心，離心半徑8 cm，800 r/min離心5 min，取上清液。放入樣孔中，進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)。電泳后將樣品轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（Polyvinylidenefluoride，PVDF）膜上，清洗樣品，將其放置在洗滌緩沖液（Tris Buffered Saline Tween，TBST）中室溫下混勻10 min，封閉蛋白1 h后，將其置于4 ℃環(huán)境孵育過(guò)夜。將一抗Wnt、FZD 1、AXIN1、GSK-3β、β-連環(huán)素、VEGF（1∶500）和二抗（1∶2 500）孵育45 min，用TBST將蛋白樣品清洗3次，凝膠成像系統(tǒng)曝光成像，進(jìn)一步分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，符合正態(tài)分布多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，不同時(shí)間點(diǎn)組間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HE染色結(jié)果 健康組大鼠血管內(nèi)無(wú)明顯改變，為單層內(nèi)皮細(xì)胞；模型組有明顯的血管損傷，在損傷處有內(nèi)皮脫落以及內(nèi)膜損傷；BL組與BH組血管損傷有所改善，損傷處內(nèi)皮脫落及內(nèi)膜損傷有所緩解，BH組較BL組效果明顯。見(jiàn)圖1。

2.2 逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)各組大鼠胸主動(dòng)脈血管段組織中Wnt mRNA、FZD1 mRNA、AXIN1 mRNA、GSK-3β mRNA、β-連環(huán)素mRNA、VEGF mRNA水平 與健康組比較，模型組大鼠胸主動(dòng)脈血管段組織中Wnt mRNA、FZD1 mRNA、AXIN1 mRNA、β-連環(huán)素 mRNA、VEGF mRNA水平下降，GSK-3β mRNA水平升高（P<0.01），與模型組比較，BL組與BH組大鼠Wnt mRNA、FZD1 mRNA、AXIN1 mRNA、β-連環(huán)素 mRNA、VEGF mRNA水平有所升高，GSK-3β mRNA水平有所下降（P<0.01），與BL組比較，BH組大鼠Wnt mRNA、FZD1 mRNA、AXIN1 mRNA、β-連環(huán)素 mRNA、VEGF mRNA水平較高，GSK-3β mRNA水平較低（P<0.01）。見(jiàn)表2，圖2。

2.3 各組大鼠血清中TNF-α、CRP水平 健康組大鼠血清中TNF-α、CRP表達(dá)比模型組低（P<0.01），模型組大鼠血清中TNF-α、CRP表達(dá)高于BL組與BH組（P<0.01），BL組大鼠血清中TNF-α、CRP表達(dá)比BH組高（P<0.01）。見(jiàn)表3，圖3。

2.4 各組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)結(jié)果 倒置顯微鏡下觀察各組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷24 h細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)模型組與健康組血管內(nèi)皮細(xì)胞比較，間隙寬、細(xì)胞形態(tài)變小、脫落；BL組血管內(nèi)皮細(xì)胞與模型組較為接近；BH組血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙變窄，細(xì)胞死亡減少，形態(tài)有所改善。見(jiàn)圖4。

2.5 各組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況的檢測(cè)結(jié)果健康組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)血管內(nèi)皮細(xì)胞OD值均高于模型組（P<0.05），模型組血管內(nèi)皮細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的OD值較BL組低（P>0.05），BH組血管內(nèi)皮細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的OD值均高于BL組（P<0.05）。見(jiàn)表4，圖5。

2.6 各組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況的檢測(cè)結(jié)果健康組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率（3.24±0.31）%低于模型組（25.41±2.07）%與BL組（24.86±2.37），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），模型組與BL組血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），BL組凋亡率高于BH組（14.26±1.08）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖6。

2.7 各組Wnt、FZD1、AXIN1、GSK-3β、β-連環(huán)素、VEGF水平比較 與健康組比較，模型組大鼠血管組織中Wnt、FZD1、AXIN1、β-連環(huán)素、VEGF蛋白水平下降，GSK-3β蛋白水平升高（P<0.01），與模型組比較，BL組與BH組大鼠血管組織中Wnt、FZD1、AXIN1、β-連環(huán)素、VEGF蛋白水平有所升高，GSK-3β水平有所下降（P<0.01），與BL組比較，BH組大鼠血管組織中Wnt、FZD1、AXIN1、β-連環(huán)素、VEGF蛋白水平較高，GSK-3β水平較低（P<0.01）。見(jiàn)表5，圖7。

3 討論

血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是心腦血管疾病的發(fā)病基礎(chǔ)，該病是50歲以上中老年人群常見(jiàn)疾病，具有較高的患病率、致殘率、致死率，因此，對(duì)于血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后的修復(fù)極為重要［9］。本實(shí)驗(yàn)研究燈盞花素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠的保護(hù)機(jī)制及對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的作用機(jī)制。

Wnt/β-catenin信號(hào)通路在正常細(xì)胞中不激活，已有研究證實(shí)，血管疾病的產(chǎn)生與該信號(hào)通路的異常表達(dá)有關(guān)［10］。Wnt通過(guò)與膜受體FZD結(jié)合，從而抑制GSK-3β與AXIN1的表達(dá)，降低β-連環(huán)素的磷酸化；β-連環(huán)素可作為血管內(nèi)皮與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架之間的支架，當(dāng)存在Wnt配體FZD1時(shí)，可促使其轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，并激活靶基因VEGF等轉(zhuǎn)錄，控制血管穩(wěn)定性［11］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“久病必有瘀”，臟腑功能長(zhǎng)期失調(diào)導(dǎo)致動(dòng)脈硬化，因此，在對(duì)于其的治療應(yīng)以活血化瘀為主，燈盞花素具有活血舒筋、化瘀止痛等功效［12］。華寶桐等［13］對(duì)人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究中提出，燈盞花素可保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞防止損傷，其作用機(jī)制是通過(guò)提高VEGF水平來(lái)完成的；JIANG等［14］實(shí)驗(yàn)中提出，燈盞花素可通過(guò)降低GSK-3β水平，治療腦損傷大鼠；余文珍等［8］對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的實(shí)驗(yàn)中提出活血化瘀法可通過(guò)提高Wnt、FZD1、AXIN1、β-連環(huán)素、VEGF的水平，降低GSK-3β的表達(dá)可保護(hù)頸動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果相似，燈盞花素對(duì)血管內(nèi)皮損傷大鼠具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能是燈盞花素通過(guò)降低GSK-3β水平、提高VEGF表達(dá)，從而提高Wnt、FZD1、AXIN1、β-連環(huán)素水平，阻止β-連環(huán)素磷酸化，控制血管穩(wěn)定性，保護(hù)血管內(nèi)皮損傷。在本HE染色結(jié)果表明，在經(jīng)過(guò)燈盞花素治療后，血管內(nèi)皮損傷及脫落有所改善，這一結(jié)果也可證實(shí)燈盞花素對(duì)血管內(nèi)皮損具有保護(hù)作用。

TNF-α是炎癥介質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子，可介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷，加快動(dòng)脈硬化惡化［15］。CRP能夠反映細(xì)胞損傷程度和炎癥嚴(yán)重程度，CRP過(guò)表達(dá)是心血管意外發(fā)生的重要因素之一，能夠增加心腦血管疾病發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)［16-18］。武迎磊等［19］對(duì)動(dòng)脈硬化大鼠的實(shí)驗(yàn)研究中提出，燈盞花素素通過(guò)降低TNF-α、CRP等水平，抑制炎癥反應(yīng)，減少血管內(nèi)皮損傷，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化具有治療的作用。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果相似。

血管內(nèi)皮細(xì)胞是構(gòu)成血管平滑肌與血液之間的重要屏障，有著重要的生理調(diào)節(jié)作用［20］。李釗飛［21］對(duì)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)中提出，燈盞花素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，并能表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，具體的作用機(jī)制可能與降低炎癥反應(yīng)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖有關(guān)。本研究證實(shí)燈盞花素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。

綜上所述，燈盞花素通過(guò)提高Wnt、FZD1、AXIN1、β-連環(huán)素、VEGF水平降低GSK-3β表達(dá)，控制血管的穩(wěn)定性，從而對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠的起保護(hù)作用。

利益沖突聲明：無(wú)。

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（2021-10-13收稿 本文編輯：吳珊）

基金項(xiàng)目：湖北省中醫(yī)藥中西醫(yī)結(jié)合科研項(xiàng)目計(jì)劃項(xiàng)目（a2013Z-Y46）作者簡(jiǎn)介：白如君（1980.10—），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：內(nèi)分泌及代謝性疾病的臨床及研究，E-mail：yufangtu750574@163.com通信作者：劉?。?976.12—），女，碩士，主管技師，研究方向：檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)，E-mail：577363107qq.com