郭琳琳　劉堯　陳亞文　樂娜　朱映黎　張建軍　李振皓　趙晉燕　王林元

摘要 目的：通過建立氣陰兩虛證小鼠模型，探討鐵皮楓斗顆粒的益氣養(yǎng)陰功效與作用機制。方法：將60只雄性ICR小鼠隨機分為空白組、模型組、玉屏風顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組，每組10只，連續(xù)給藥30 d。實驗采用單日限制飲食，雙日負重力竭游泳運動，結合灌胃左甲狀腺素鈉片構建小鼠氣陰兩虛證模型。動態(tài)觀察小鼠一般狀態(tài)，測定小鼠體質量、臟器指數、四肢抓力和力竭游泳時間；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定小鼠血清環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）、白細胞介素-6（IL-6）、補體成分3（C3）、皮質醇（CORT）、促腎上腺皮質激素（ACTH）、促腎上腺皮質激素釋放激素（CRH）、三碘甲狀腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）、促甲狀腺激素（TSH）、雌二醇（E2）和睪酮（T）相關指標，采用實時聚合酶鏈反應（Real-time PCR）觀察下丘腦組織中蛋白激酶A（PKA）和cAMP反應元件結合蛋白（CREB）、信使核糖核酸（mRNA）表達水平。結果：與模型組比較，各給藥組均可改善小鼠的一般狀態(tài)，實驗第30天，鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組均可增加小鼠體質量（P<0.01）。鐵皮楓斗顆粒高劑量組可以增大小鼠胸腺指數、脾臟指數和四肢抓力，延長負重游泳力竭時間（P<0.05，P<0.01），降低血清cAMP、cAMP/cGMP、T3、E2、E2/T和IL-6水平（P<0.05，P<0.01），升高血清T、C3水平（P<0.01），降低下丘腦組織PKAmRNA表達水平（P<0.01）。鐵皮楓斗顆粒中劑量組可以升高血清中TSH水平（P<0.01），低劑量組可以降低下丘腦組織中CREBmRNA的表達水平（P<0.05）。結論：鐵皮楓斗顆?？梢愿纳茪怅巸商撟C小鼠的一般狀態(tài)，通過調節(jié)環(huán)核苷酸、內分泌和免疫系統(tǒng)這一網絡機制，上調PKA/CREB信號通路，起到益氣養(yǎng)陰的功效。

關鍵詞 鐵皮楓斗顆粒；氣陰兩虛證；益氣養(yǎng)陰；環(huán)核苷酸；內分泌系統(tǒng)；免疫功能；PKA/CREB信號

Effect of Tiepi Fengdou Granules on Cyclic Nucleotide-endocrine System-immune System of Mice with Qi and Yin Deficiency

GUO Linlin1，LIU Yao1，CHEN Yawen1，YUE Na1，ZHU Yingli1，ZHANG Jianjun1，LI Zhenhao2，ZHAO Jinyan3，WANG Linyuan1

（1 Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 Zhejiang Shouxiangu Pharmceutical Co.，Ltd，Wuyi 321200，China; 3 Beijing Institute for Drug Control，NMPA Key Laboratory for Safety Research and Evaluation of Innovative Drugs）

Abstract Objective：To explore the effect and mechanism of Tiepi Fengdou Granules（TPFD） for replenishing qi and nourishing yin by establishing a mouse model of qi and yin deficiency.Methods：A total of 60 male ICR mice were randomly divided into blank group，model group，Yupingfeng Granules group，and TPFD high-，medium-and low-dose groups，with 10 in each group，and were administered for 30 consecutive days.In the experiment，a mouse model of qi and yin deficiency was established by providing the mice time restricted eating on odd days and weight-bearing exhaustive swimming on even days in combination with levothyroxine sodium tablets（ig）.The general state of the mice was dynamically observed，and the body weight，organ index，limb grip strength and exhaustive swimming time were determined.The related indexes of cyclic adenosine monophosphate（cAMP），cyclic guanosine monophosphate（cGMP），interleukin-6（IL-6），complement component 3（C3），cortisol（CORT），adrenocorticotropic hormone（ACTH），corticotropin releasing hormone（CRH），triiodothyronine（T3），thyroxine（T4），thyroid-stimulating hormone（TSH），estradiol（E2） and testosterone（T） in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The mRNA expressions of protein kinase A（PKA） and cyclic-AMP response element binding protein（CREB） in hypothalamus were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR）.Results：Compared with the model group，the administration groups had improved general state.On the 30th day of the experiment，the body weight in both TPFD high-and medium-dose groups was increased（P<0.01）.High-dose TPFD increased the thymus index，spleen index and limb grip strength of the mice，prolonged the exhaustive swimming time（P<0.05，P<0.01），reduced the serum levels of cAMP，cAMP/cGMP，T3，E2，E2/T and IL-6（P<0.05，P<0.01） and the mRNA expression of PKA in hypothalamus（P<0.01），and increased the serum levels of T and C3（P<0.01）.TPFD up-regulated the serum level of TSH at a medium dose（P<0.01） while down-regulated the mRNA expression of CREB in hypothalamus at a low dose（P<0.05）.Conclusion：TPFD improves the general state of mice with qi and yin deficiency.It up-regulates the PKA/CREB signaling pathway by regulating the cyclic nucleotide-endocrine system-immune system network，to exert the effect of replenishing qi and nourishing yin.

Keywords Tiepi Fengdou Granules; Syndrome of qi and yin deficiency; Replenishing qi and nourishing yin; Cyclic nucleotide; Endocrine System; Immune function; PKA/CREB signaling pathway

中圖分類號：R289.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2023.01.004

增強免疫力保健產品在已批準產品中數量排名第一，其中配方中含有中藥的產品約占其總數的2/3［1］，體現(xiàn)了中醫(yī)藥在維護生命健康中的優(yōu)勢。但是其針對的人群僅標注了免疫力低下者，在實際應用中無法根據先天稟賦不同和后天諸多因素造成的個體體質、證候差異進行有針對性應用，一定程度上影響了增強免疫力作用的發(fā)揮。因此，需要綜合考慮藥-方-證之間的作用關系，基于證候探討產品的中醫(yī)藥功效內涵。

鐵皮楓斗顆粒由鐵皮石斛、靈芝和西洋參配方而成，方中鐵皮石斛為君藥，靈芝和西洋參為臣藥。鐵皮石斛滋陰潤肺補虛但性味偏涼，西洋參同為涼性中藥，增加性平補益的靈芝，全方既清又補，藥性平和，涼而不寒，可滋陰而不抑陽。本研究依據中醫(yī)藥理論“藥證相關”“方證相應”原則，借鑒現(xiàn)代藥理學研究基礎構建氣陰兩虛證候小鼠模型［2］，通過“以方測證”“證效相關”探討評價鐵皮楓斗顆粒益氣養(yǎng)陰增強免疫力作用機制，為中藥復方保健產品增加中醫(yī)藥功效和人群適宜證候屬性提供實驗依據，以期更好地發(fā)揮產品的精準保健、個性保健和辨證保健的優(yōu)勢。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康美國癌癥研究所（Institute of Cancer Research，ICR）雄性4～6周齡小鼠60只，體質量18～22 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK（京）2016-0006，飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學北京中醫(yī)藥研究院動物實驗室，無特定病原體（Specific Pathogen Free，SPF）級，自由飲水，以標準普通飼料喂食。實驗經過北京中醫(yī)藥大學醫(yī)學與實驗動物倫理委員會審查批準（倫理審查號：BUCM-4-2021052405-2040）。

1.1.2 藥物 鐵皮楓斗顆粒（浙江壽仙谷醫(yī)藥股份有限公司，批號：20210501）、玉屏風顆粒（國藥集團廣東環(huán)球制藥有限公司，批號：210120）、左甲狀腺素鈉片（默克雪蘭諾有限公司，批號：G00F60）。

1.1.3 試劑與儀器 環(huán)磷酸腺苷（Cyclic Adenosine Monophosphate，cAMP）試劑盒（批號：202107），環(huán)磷酸鳥苷（Cyclic Guanosine Monophosphate，cGMP）試劑盒（批號：202107），三碘甲狀腺原氨酸（Triiodothyronine，T3）試劑盒（批號：202107），甲狀腺素（Thyroxine，T4）試劑盒（批號：202107），皮質醇（Cortisol，CORT）試劑盒（批號：202107），促腎上腺皮質激素（Adrenocorticotrophic Hormone，ACTH）試劑盒（批號：202107），促腎上腺皮質激素釋放激素（Corticotropin Releasing Hormone，CRH）試劑盒（批號：202107），促甲狀腺激素（Thyroid Stimulating Hormone，TSH）試劑盒（批號：202107），雌二醇（Estradiol，E2）試劑盒（批號：202107），睪酮（Testosterone，T）試劑盒（批號：202107），補體成分3（Complement3，C3）試劑盒（批號：202107），以上試劑盒購自江蘇科特生物科技有限公司；白細胞介素6（Interleukin-6，IL-6）試劑盒（北京博奧森生物技術有限公司，批號：BA07231187）；Trizol試劑（Invitrogen公司，美國，批號：50382661），M-MLV逆轉錄酶（寶生物工程（大連）有限公司，批號：AK20447A），脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNaseI）（Fermentas公司，美國，批號：00103452），核糖核酸酶抑制劑（RNase Inhibitor（Fermentas公司，美國，批號：00805716），6×Loading Dye（Fermentas公司，美國，批號：00504694）。自制玻璃游泳箱（規(guī)格：75 cm×55 cm×40 cm）、臺式離心機（上海安亭科學儀器廠，型號：TGL-16c）、冷凍離心機（力康生物醫(yī)療科技控股有限公司，型號：neofuge 15R）、酶標分析儀（伯騰儀器有限公司，美國，型號：Epoch2C）、電子天平［賽多利斯科學儀器（北京）有限公司，型號：BSA2245］、大小鼠抓力測試儀（北京眾實迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責任公司，型號：ZS-ZL）、2720型實時聚合酶鏈反應（Real-time PCR）儀（ABI公司，美國，型號：2720）、Roche LightCycler 480Ⅱ實時熒光定量PCR系統(tǒng)（Roche公司，瑞士，型號：LightCycler480Ⅱ）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 選取60只雄性ICR小鼠，適應性喂養(yǎng)7 d后，按體質量隨機分為空白組、模型組、玉屏風顆粒組（2.25 g/kg）、鐵皮楓斗顆粒高劑量組（1.0 g/kg，相當于人推薦量30倍）、鐵皮楓斗顆粒中劑量組（0.33 g/kg，相當于人推薦量10倍）、鐵皮楓斗顆粒低劑量組（0.16 g/kg，相當于人推薦量5倍），每組10只。造模方法：1）單日限制飲食，雙日喂飼足量飼料，自由飲水。2）負重游泳力竭運動：雙日灌胃給藥結束1 h后進行負重游泳力竭運動，在小鼠尾根部各負荷其體質量6%的鉛塊作為重物，放入玻璃游泳箱內，水溫（20±5）℃，以力竭（小鼠鼻尖沒入水面3～5 s）或四肢動作失調為度，及時撈起，擦干毛發(fā)。3）實驗第15天開始，每天下午給予空白組小鼠生理鹽水，其余組給予左甲狀腺素鈉片（150 μg/kg），灌胃劑量為0.1 mL/10 g，1次/d，連續(xù)14 d。

1.2.2 給藥方法 空白組、模型組小鼠每天給予生理鹽水，其余組給予相應濃度藥物，根據體質量變化調整灌胃量，連續(xù)給藥30 d。

1.2.3 檢測指標與方法

1.2.3.1 一般狀態(tài)與體質量的變化記錄 觀察記錄各組小鼠的飼養(yǎng)情況、精神狀態(tài)、皮毛色澤及行為活動等。在給藥的第0天、10天、20天、30天進行各組小鼠稱重，記錄各組小鼠體質量的變化。

1.2.3.2 臟器指數 小鼠解剖分別取胸腺和脾臟，用濾紙吸干血液后稱重，按公式，臟器指數＝臟器重（mg）/體質量（g）分別計算胸腺指數和脾臟指數。

1.2.3.3 四肢抓力和力竭游泳時間 第29天給藥1 h后進行小鼠四肢抓力測定。待小鼠在抓力儀上適應并且確定小鼠四只爪子都抓牢后，抓住小鼠尾巴末端用力向后拉，測取記錄抓力。每只小鼠測定3次抓力（g），取平均值。第30天給藥1 h后進行負重游泳實驗，及時記錄每只小鼠負重游泳時間。

1.2.3.4 生化指標檢測 小鼠摘眼球取血，靜置2 h，3 000 r/min，離心半徑6 cm，離心15 min，吸取血清，根據酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒方法分別檢測cAMP、cGMP、IL-6、C3、CORT、ACTH、CRH、T3、T4、TSH、E2和T水平，并計算cAMP/cGMP比值和E2/T比值。

1.2.3.5 實時PCR法檢測下丘腦組織中蛋白激酶A（Protein Kinase A，PKA）和環(huán)磷酸腺苷反應元件結合蛋白（cAMP Response Element Binding Protein，CREB）mRNA表達量 取各組小鼠下丘腦組織約200 mg，經過RNA的提取、DNase I消化樣品RNA中的DNA、RNA瓊脂糖凝膠電泳、RNA反轉錄為cDNA后、PCR檢測和REAL TIME PCR數據檢測。以β-肌動蛋白（β-actin）作為內參基因，計算各目的基因2-△△Ct，以空白組為基線計算各觀察組基因的相對表達水平。引物序列見表1，PKA、CREB和β-actin引物均由北京天一輝遠生物科技有限公司合成。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，計量數據用均值±標準差（±s）表示。組間差異采用單因素方差分析，方差齊性采用最小顯著性差異法（Least—Significant Difference，LSD），方差不齊性采用Dunnett′s T3法進行統(tǒng)計分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 小鼠一般狀態(tài)變化 模型組小鼠出現(xiàn)體質量增長緩慢，毛無光澤，游泳耐力下降，行為活潑好動，易怒不易抓取等現(xiàn)象，符合臨床氣陰兩虛證癥狀。玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組能夠緩解或改善上述癥狀。空白組未見異常。

2.2 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠體質量的影響 實驗第10天、20天、30天，與空白組比較，模型組小鼠體質量顯著減輕（P<0.01）。實驗第10天，與模型組比較，玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組小鼠體質量顯著增加（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。實驗第20天，與模型組比較，玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組小鼠體質量顯著增加（均P<0.05）。實驗第30天，與模型組比較，玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組小鼠體質量顯著增加（均P<0.01）。見表2。

2.3 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠臟器指數的影響 與空白組比較，模型組小鼠胸腺指數和脾臟指數均顯著下降（P<0.01）；與模型組比較，鐵皮楓斗顆粒中、低劑量組小鼠胸腺指數均顯著上升（P<0.05，P<0.01），鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組小鼠脾臟指數均顯著上升（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。見表3。

2.4 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠四肢抓力和力竭游泳時間的影響 與空白組比較，模型組小鼠四肢抓力顯著降低（P<0.05）；與模型組比較，玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組小鼠四肢抓力均顯著增加（P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.05）。與空白組比較，模型組小鼠力竭游泳時間顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，各給藥組小鼠力竭游泳時間均顯著增加（均P<0.01）；與玉屏風顆粒組比較，鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組小鼠力竭游泳時間均顯著增加（P<0.01，P<0.05）。見表4。

2.5 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠血清環(huán)核苷酸水平的變化 與空白組比較，模型組小鼠血清cAMP水平顯著上升（P<0.01）；與模型組比較，鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組小鼠血清cAMP水平均顯著降低（P<0.05，P<0.01）。與空白組比較，模型組小鼠血清cAMP/cGMP水平顯著上升（P<0.05）；與模型組比較，玉屏風顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組小鼠血清cAMP/cGMP水平均顯著降低（均P<0.01）。見表5。

2.6 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠免疫功能的影響 與空白組比較，模型組小鼠血清C3水平顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組小鼠血清C3水平均有上升趨勢（均P<0.01）；與玉屏風顆粒組比較，鐵皮楓斗顆粒中劑量組小鼠血清C3水平顯著上升（P<0.05）。與空白組比較，模型組小鼠血清IL-6水平顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組小鼠血清IL-6水平均有下降趨勢（均P<0.01）。見表6。

2.7 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠神經內分泌系統(tǒng)的影響

2.7.1 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠CORT、CRH和血清ACTH水平的影響 與空白組比較，模型組小鼠血清CORT、CRH水平顯著上升（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，玉屏風顆粒組小鼠血清CRH水平顯著下降（P>0.05）。各組小鼠血清ACTH水平差異均無統(tǒng)計學意義（均P>0.05）。見表7。

2.7.2 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠T3、T4和血清TSH的影響 與空白組比較，模型組小鼠血清T3、T4水平顯著上升（P<0.01）。與模型組比較，玉屏風顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組小鼠血清T3水平均有下降趨勢（P<0.01），各給藥組小鼠血清T4水平差異均無統(tǒng)計學意義（均P>0.05）。與空白組比較，模型組小鼠血清TSH水平差異無統(tǒng)計學意義（均P>0.05）；與模型組比較，鐵皮楓斗顆粒中、低劑量組小鼠血清TSH水平有上升趨勢（P<0.01）。見表8。

2.7.3 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠E2、T、E2/T水平的影響 與空白組比較，模型組小鼠血清E2、E2/T水平顯著上升（P<0.01，P<0.05），T水平顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，玉屏風顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中劑量組小鼠血清E2水平均有下降趨勢（P<0.01）；各給藥組T水平均顯著上升（P<0.01），各給藥組小鼠血清E2/T水平均有下降趨勢（P<0.01）。與玉屏風顆粒組比較，鐵皮楓斗顆粒中劑量組小鼠血清E2水平下降（P<0.05），鐵皮楓斗顆粒低劑量組小鼠血清T水平上升（P<0.01）。見表9。

2.7.4 鐵皮楓斗顆粒對氣陰兩虛證小鼠下丘腦組織PKA和CREB蛋白mRNA表達的影 與空白組比較，模型組小鼠下丘腦組織中PKA和CREB表達水平顯著下降（P<0.01）；與模型組比較，玉屏風散顆粒組、鐵皮楓斗顆粒高、中、低劑量組均能明顯增加小鼠下丘腦組織中PKA表達水平（均P<0.01），玉屏風顆粒組和鐵皮楓斗顆粒低劑量組能明顯增加小鼠下丘腦組織中CREB表達水平（P<0.05）；與玉屏風顆粒組比較，鐵皮楓斗顆粒高劑量組PKA表達水平顯著升高（P<0.05）。見表10。

3 討論

《素問·舉痛論》曰：“勞則氣耗。”《靈樞·五味》云：“谷不入半日則氣衰，一日則氣少矣?！蓖ㄟ^反復力竭游泳使動物疲勞和限制飲食導致氣衰可造成氣虛動物模型［3-4］。甲狀腺激素致虛熱模型是最常用的制備腎陰虛方法［5］。甲狀腺激素可引起機體代謝亢進和交感神經興奮，表現(xiàn)出中醫(yī)“熱”證候，當其釋放過多時則易耗傷陰液，從而表現(xiàn)與陰虛對癥的癥狀。本研究結合氣陰兩虛證候的病因病機，通過限食結合負重力竭游泳和灌胃左甲狀腺素鈉片的方法構建小鼠氣陰兩虛證模型［6］，以玉屏風顆粒為陽性對照，從小鼠的一般狀態(tài)、體質量、環(huán)核苷酸水平、內分泌-免疫系統(tǒng)探討鐵皮楓斗顆粒的益氣養(yǎng)陰功效與作用機制。

脾胃氣虛，則水谷精微運化失調，又氣血生化乏源，可致形體消瘦，體質量的變化可以反映小鼠的消瘦情況；“氣虛則四肢肌肉失養(yǎng)，周身倦怠乏力；氣虛則清陽不升、清竅失養(yǎng)而精神萎頓?！彼闹チ拓撝赜斡玖邥r間可以反映小鼠的乏力和神疲情況［7-8］。造模結束后，模型組小鼠出現(xiàn)消瘦、體質量減輕、乏力、游泳耐力減弱等癥狀，符合氣陰兩虛證的氣虛臨床表現(xiàn)，提示實驗造模成功。實驗結果表明，鐵皮楓斗顆?？稍黾有∈篌w質量，增加小鼠肌力、耐力和抗疲勞，從而達到益氣功效。

cAMP和cGMP是一對相互拮抗的物質，介導多種細胞反應，是機體陰虛或者陽虛的客觀判斷指標，被認為是“陰”“陽”的物質基礎［9］。研究表明在陰虛體質下cAMP水平升高或cAMP/cGMP比值升高，反之則為陽虛［10］。本實驗結果表明，模型組的cAMP水平和cAMP/cGMP比值均有升高，鐵皮楓斗顆粒可以降低cAMP水平和cAMP/cGMP比值至相應正常水平，對甲狀腺激素所致腎陰虛具有一定的養(yǎng)陰功效。研究證實下丘腦-垂體-靶腺軸功能亢進或者抑制與機體呈現(xiàn)陰虛或者陽虛狀態(tài)之間存在著相關性，機體在甲狀腺功能亢進狀態(tài)下，腎上腺功能和甲狀腺功能表現(xiàn)亢進，基礎代謝增加，從而造成血清CRH、ACTH、CORT、T3、T4水平上升，TSH水平下降；中醫(yī)臟象學說認為“腎藏精，主納氣生殖”，性腺是調節(jié)生殖功能的主要單位，下丘腦-垂體-性腺軸功能紊亂，從而造成血清E2、E2/T水平上升，T水平下降，由此可得腎陰虛與下丘腦-垂體-性腺軸密切相關［11-13］。由實驗研究結果得，模型組小鼠CRH、CORT、T3、T4、TSH、E2、E2/T水平上升，T水平下降，鐵皮楓斗顆粒組可以改善緩解相關指標，T4這一指標的異常，可能與本實驗造模藥左甲狀腺素鈉片主要成分是T4有關［5］。cAMP/PKA通路與炎癥免疫反應相關，CREB是該通路下游重要的信號蛋白，cAMP/PKA/CREB信號通路的激活也可以促進多巴胺神經元的存活，從而調控神經-內分泌-免疫系統(tǒng)［14-15］。由本實驗結果模型組PKA、CREB表達顯著下調，鐵皮楓斗顆粒組可以上調相關指標，通過調節(jié)神經-內分泌-免疫系統(tǒng)從而起到養(yǎng)陰功效。

中醫(yī)認為“百病從虛而入”“邪之所湊，其氣必虛”“氣陰不足，則諸病蜂起”，現(xiàn)代醫(yī)學認為免疫力低下是指機體呈現(xiàn)不抵抗狀態(tài)，也即中醫(yī)的虛證可以引起機體的免疫功能下降而致病。脾臟和胸腺是人體至關重要的免疫器官，脾臟是免疫細胞發(fā)生免疫應答的場所，胸腺是機體胸腺依賴淋巴細胞分化、發(fā)育、成熟的場所，因此脾臟和胸腺指數的變化可以反映機體的免疫功能變化，免疫抑制會使臟器萎縮，從而臟器指數下降［16］。補體系統(tǒng)是先天性免疫防御的重要組成部分，具有免疫調節(jié)和免疫黏附等作用，C3在免疫應答的多環(huán)節(jié)中發(fā)揮作用［17］，也有研究認為C3可作為腎陰虛診斷的客觀指標［18］。IL-6為機體炎癥介質，參與炎癥反應，在免疫調節(jié)中發(fā)揮著重要的作用［19］。在本研究中，模型組小鼠臟器指數下降、血清C3水平下降和IL-6水平升高，鐵皮楓斗顆?？梢蕴嵘K器指數，增加血清C3水平和降低IL-6水平而增加免疫蛋白水平及免疫細胞生長分化、減少炎癥等，通過對證候的改善發(fā)揮益氣養(yǎng)陰功效而表現(xiàn)出增強免疫力的作用。“氣能生津，津能載氣”，氣虛和陰虛互為因果、互相影響；“環(huán)核苷酸-內分泌-免疫”系統(tǒng)各部分也相互作用、彼此制約［20-21］，神經內分泌系統(tǒng)通過神經遞質、分泌激素來調節(jié)免疫功能，免疫系統(tǒng)通過分泌細胞因子反饋神經內分泌系統(tǒng)［17］，胸腺可以產生和分泌胸腺激素和細胞因子，其中以cAMP作為第二信使，發(fā)揮著免疫調節(jié)作用，且均與氣陰兩虛證候密切相關［22］。

4 小結

綜上所述，本研究通過構建氣陰兩虛證小鼠模型，從環(huán)核苷酸水平、內分泌系統(tǒng)和免疫功能及與益氣養(yǎng)陰之間的關系研究產品中醫(yī)功效。“辨證保健”理論是現(xiàn)代中醫(yī)學發(fā)展的產物，是“精準保健”“科學保健”“個性保健”的指導原則，鐵皮楓斗顆粒作為已上市產品，基于“證候-功效”的動物實驗研究可以為將要進行的益氣養(yǎng)陰中醫(yī)功效人體隨機對照試驗以及多種證候對比的人體大樣本研究奠定基礎。

利益沖突聲明：無。

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（2022-11-15收稿 本文編輯：吳珊）

基金項目：國家重點研發(fā)計劃（2018YFC17068003）作者簡介：郭琳琳（1995.10—），女，碩士研究生在讀，研究方向：中藥產業(yè)化及產品開發(fā)，E-mail：grl15131951718@163.com通信作者：王林元（1961.10—），男，碩士，教授，博士研究生導師，研究方向：中醫(yī)藥基本理論與中藥新技術，E-mail：wangly@bucm.edu.cn；趙晉燕（1979.11—），女，碩士，主管藥師，研究方向：藥理毒理學研究，E-mail：jinyanzhao1979@163.com