史美佳 ，祝世軍 ，吳益春 ，羅海軍 ，郭海波 ，朱鮮燕

1. 舟山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院（舟山 316000）；2. 國(guó)家海洋食品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心（舟山 316000）；3. 浙江海洋大學(xué)食品與藥學(xué)學(xué)院（舟山 316000）

鄰苯二甲酸酯（PAEs）是一組人造有機(jī)化合物，通常用作增塑劑，如聚氯乙烯（PVC）等[1]。PAEs通過(guò)氫鍵和范德華力與聚合物基質(zhì)連接，因此在生產(chǎn)和使用塑料制品時(shí)，它們很容易釋放到周?chē)沫h(huán)境介質(zhì)中[2]。隨著廣泛的生產(chǎn)和利用，PAEs通常存在于不同的環(huán)境介質(zhì)中，如水、土壤、大氣和沉積物。高濃度的PAEs對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成了潛在的威脅。大量的流行病學(xué)和毒理學(xué)研究證明PAEs對(duì)人類(lèi)和動(dòng)物具有致癌、致突變和致畸的作用[3]，且對(duì)動(dòng)物的生殖發(fā)育具有毒性。因此，美國(guó)環(huán)境保護(hù)局已將六種PAEs（DMP、DEP、DNBP、BBP、DEHP和DNOP）列為優(yōu)先污染物（USEPA 2013）。Cai等[4]發(fā)現(xiàn)在珠江三角洲區(qū)域蔬菜中PAE濃度高達(dá)11.2 mg/kg。PAEs在生態(tài)系統(tǒng)中的流動(dòng)性也可能通過(guò)食物鏈對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成潛在風(fēng)險(xiǎn)[5]。并且PAEs在食物中吸收轉(zhuǎn)運(yùn)受很多因素的影響，如不同PAEs的理化性質(zhì)等。

此研究在浙江東部區(qū)域7個(gè)市內(nèi)采集了517個(gè)蔬菜水果樣品，測(cè)定了包括EPA規(guī)定優(yōu)先監(jiān)測(cè)的6種PAEs化合物在內(nèi)的16種PAEs含量，通過(guò)此來(lái)了解浙江不同地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品和不同種類(lèi)果蔬中PAEs污染狀況，進(jìn)一步分析農(nóng)產(chǎn)品中PAEs對(duì)人體潛在的健康風(fēng)險(xiǎn)，為浙江地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全提供基礎(chǔ)科學(xué)依據(jù)，更好地保障人們的飲食健康。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

16種PAEs（DMP、DEP、DIBP、DBP、DMEP、BMPP、DEEP、DPP、DHXP、BBP、DBEP、DCHP、DEHP、DPHP、DNOP、DNP）混標(biāo)濃質(zhì)量度為1 000 μg/mL（Bepure公司），純度均大于99.9%，置于-20℃冰箱中保存，以丙酮為溶劑，經(jīng)稀釋配制成10 μg/mL的混標(biāo)溶液，于0～8 ℃貯存。正己烷、丙酮、乙酸乙酯（HPLC級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；提取鹽包和純化管[納譜分析技術(shù)（蘇州）有限公司]。

Agilent 7890B-7000C三重串聯(lián)四級(jí)桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫科技公司）；Eppendorf冷凍自平衡離心機(jī)（德國(guó)艾本德股份有限公司）；Multi Reax多孔位漩渦振蕩器（德國(guó)Heidolph公司）；MS3 BS25振蕩器（IKA公司）。

1.2 儀器工作條件

（1）色譜條件

HP-5MS色譜柱（30 m×250 μm×0.25 μm），進(jìn)樣口溫度280 ℃，不分流進(jìn)樣，柱溫程序：初始溫度60 ℃，保持1.0 min，以20 ℃/min升至220 ℃（保持1.0 min），以5 ℃/min升至250 ℃（保持1.0 min），以20℃/min升至290 ℃（保持8.0 min）；載氣流量1.0 mL/min，進(jìn)樣量1 μL。

（2）質(zhì)譜條件

離子源：EI；電離能量：70 eV；離子源溫度：280℃；輔助通道溫度：280 ℃；溶劑延遲：4 min。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品采集

選擇浙江省7個(gè)市杭州、寧波、湖州、嘉興、紹興、溫州、舟山，采集蔬菜包括葉菜類(lèi)、豆類(lèi)、茄果類(lèi)等和水果包括漿果類(lèi)、瓜類(lèi)等，共采集樣本517批次，每個(gè)樣本1 kg。采集的樣品經(jīng)勻漿機(jī)充分勻漿后，置于-20 ℃冰箱冷凍保存。

1.3.2 樣品前處理

稱(chēng)取10.00 g（精確至0.01 g）1.3.1小節(jié)制備的果蔬樣品于50 mL離心管中，加入10 mL提取液（V正己烷∶V乙酸乙酯=1∶1），用渦旋振蕩器充分混勻后，添加陶瓷均質(zhì)石，加入鹽包（硫酸鎂6 g，乙酸鈉1.5 g），充分振蕩2 min，按4 000 r/min離心6 min，取上清液于15 mL裝有PSA（400 mg）純化離心管中，渦旋振蕩1 min，按4 000 r/min離心6 min。取上清樣液過(guò)膜于進(jìn)樣瓶中，供GC-MS分析使用。

1.4 健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

文章基于美國(guó)環(huán)保署（US EPA）（2013）中的有毒有害物質(zhì)對(duì)人體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)模型，對(duì)所采集的樣品中帶有的PAEs進(jìn)行健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，按式（1）計(jì)算。

式中：HQ為有毒有害物質(zhì)的非致癌風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)，當(dāng)HQ超過(guò)1時(shí)，則存在健康風(fēng)險(xiǎn)，小于1時(shí)，則為可接受風(fēng)險(xiǎn)；RfD為經(jīng)口攝入?yún)⒖紕┝浚蘥/（kg·d），DMP、DEP、DIBP、DBP、BBP、DEHP的RfD分別為10 000，800，800，100，200和20 μg/（kg·d）[6]，按式（2）計(jì)算。

式中：Cfood為果蔬中PAEs的總含量，μg/kg；EDI為居民每日攝入量μg/（kg·d）；CR為果蔬日均攝入量，g/d；Bw為居民平均體重，成人以60 kg計(jì)，蔬菜人均日攝入為0.5 kg/d，水果為0.35 kg/d，兒童以15 kg計(jì)，蔬菜人均日攝入量為0.3 kg/d，水果為0.2 kg/d[7]。按式（3）計(jì)算。

式中：R為致癌風(fēng)險(xiǎn)，當(dāng)R＜1×10-6時(shí)無(wú)致癌風(fēng)險(xiǎn)，反之有一定的致癌風(fēng)險(xiǎn)。CSF為致癌斜率系數(shù)，DEHP為致癌物，致癌斜率系數(shù)為0.014 mg/（kg·d-1）[6]。

1.5 雌激素當(dāng)量的計(jì)算

此研究所涉及果蔬中的DBP、DEHP、DEP具有微弱的雌激素活性，3種PAEs的雌激素效力EP值[8]分別為4×10-5，3×10-7和5×10-7。以雌激素當(dāng)量（EEQ，estrogenic equaivalence）來(lái)衡量果蔬中PAEs的雌激素效應(yīng)，按式（4）計(jì)算。

式中：EEQ為雌激素當(dāng)量，ng E2/d；EPi為果蔬中鄰苯二甲酸酯單體的雌激素效力，以雌激素中活性最強(qiáng)的雌二醇（E2，estradiol）作為標(biāo)準(zhǔn)，EP＜1則該化合物雌激素活性比E2弱，反之亦然；Ci為每天果蔬中鄰苯二甲酸酯單體的濃度，μg/（kg·d）。雌激素當(dāng)量（EEQ）活性相當(dāng)于待測(cè)樣品單位質(zhì)量中含有多少濃度的雌二醇含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Excel軟件進(jìn)行作圖及分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 浙江不同地區(qū)設(shè)施農(nóng)產(chǎn)品中PAEs的總含量

對(duì)浙江地區(qū)7個(gè)市采集的517批次設(shè)施農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行16種鄰苯二甲酸酯類(lèi)PAEs污染情況分析，包括6種優(yōu)先控制的PAEs在內(nèi)。如表1所示，16種PAEs的總含量（∑16PAEs）在0.72～4 394.75 μg/kg之間，平均含量為103.30 μg/kg，檢出率為100%；6種優(yōu)先控制污染物的總含量（∑6PAEs）在nd-324.99 μg/kg之間，平均含量為36.82 μg/kg，檢出率92.84%。16種PAEs除了BBP、BMPP、DPHP、DHXP、DPP未檢出，其余均有檢出，檢出率高的單體為DIBP（79.30%）、DBP（78.14%）、DEHP（67.12%）、DEP（65.57%）。

表1 果蔬中PAEs的檢出率和平均含量

浙江省不同地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品中PAEs的含量狀況如圖1所示，浙江這七個(gè)市農(nóng)產(chǎn)品中ΣPAEs平均含量的順序依次為：湖州＞杭州＞嘉興＞紹興＞溫州＞舟山＞寧波。不同城市果蔬中PAEs含量受很多方面的影響，如果蔬種植環(huán)境周?chē)I(yè)化城市化的程度[9]、地區(qū)的農(nóng)膜使用量[10]等。舟山、溫州、寧波地區(qū)靠海，環(huán)境中和土壤中的PAEs可能低于內(nèi)陸地區(qū)，富集在植物中的PAEs也相對(duì)較少。

圖1 浙江省不同地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品中PAEs的含量狀況

2.2 浙江不同類(lèi)別蔬菜和水果中PAEs的含量和組成

此研究抽取的蔬菜涉及GB 2763——2021食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量[11]中的8個(gè)大類(lèi)，除了莖類(lèi)蔬菜，芽菜類(lèi)蔬菜其他均有涉及，水果覆蓋了GB 2763——2021中所有的水果大類(lèi)。

蔬菜中，葉菜類(lèi)∑16PAEs平均含量為252.57 μg/kg，高于豆類(lèi)108.05 μg/kg和鱗莖類(lèi)106.74 μg/kg，具有明顯差異。US EPA優(yōu)先控制的6種PAEs總含量（∑6PAEs）豆類(lèi)最高56.58 μg/kg，其次是葉菜類(lèi)49.53 μg/kg、鱗莖類(lèi)44.50 μg/kg和茄果類(lèi)40.84 μg/kg。水果中，16種PAEs含量最高的是柑橘類(lèi)，∑16PAEs為138.93 μg/kg，其次是漿果類(lèi)71.19 μg/kg和核果類(lèi)67.76 μg/kg。水果中優(yōu)先控制的6種PAEs總含量（∑6PAEs）最高的為柑橘類(lèi)39.07 μg/kg，其次是漿果類(lèi)32.90 μg/kg和熱帶水果類(lèi)21.35 μg/kg，如表2所示?？傮w看來(lái)，蔬菜類(lèi)的PAEs總含量高于水果類(lèi)，莖葉類(lèi)蔬菜高于其他蔬菜，這與Wang等[12]研究結(jié)果類(lèi)似，這可能是因?yàn)榍o類(lèi)和葉類(lèi)蔬菜的表面積大，PAE暴露時(shí)間較長(zhǎng)。除此之外，PAEs的積累還受到塑料薄膜的使用方式，溫室覆蓋的時(shí)間，溫室高度和年齡和塑料薄膜的類(lèi)型的影響[13]。

表2 果蔬中不同系類(lèi)PAEs的含量 單位：μg/kg

對(duì)檢出的PAEs組分進(jìn)行分析，如圖2所示，不同細(xì)類(lèi)果蔬的PAEs不僅在含量上有顯著的差別，而且構(gòu)成比例也不同。蔬菜PAEs總含量最高的葉菜類(lèi)和水果PAEs總含量最高的柑橘類(lèi)中，DMEP占比最大，占比分別為64.8%和33.7%。其他各類(lèi)果蔬中的主要PAEs組分為DINP，DBP，DIBP，DEHP，四種PAEs組分（∑4PAEs）占∑16PAEs含量的68.4%～95.2%。漿果類(lèi)水果PAEs含量這四個(gè)組分占比平均，均為20%。瓜類(lèi)果蔬中PAEs含量中DINP占比相對(duì)最高，其中蔬菜類(lèi)瓜類(lèi)（49%）、水果瓜類(lèi)（64.3%）。由類(lèi)別特征分析，瓜類(lèi)農(nóng)產(chǎn)品比較容易富集DINP。DBP占比相對(duì)最高的蔬菜類(lèi)別為水生類(lèi)（41.8%）、茄果類(lèi)（37.7%），水果類(lèi)別為熱帶和亞熱帶類(lèi)水果（23.4%）。DMP、DEP普遍有檢出，但占比較小，這與王曉燕[14]研究海南省11個(gè)縣市農(nóng)作物的結(jié)果相似。對(duì)比其他報(bào)道中DEHP、BBP占比相對(duì)最高，此研究中浙江地區(qū)果蔬中PAEs組成未檢測(cè)到BBP，且DEHP占比低于DINP、DBP等，具體原因有待探究。關(guān)注食品中優(yōu)控PAEs化合物的同時(shí)，非優(yōu)控PAEs的高檢出、高濃度也需得到一定程度的重視。

圖2 不同種類(lèi)果蔬中PAEs組成

2.3 健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

考慮到鄰苯二甲酸酯類(lèi)塑化劑的致癌、致畸、致突變的作用和潛在的雌激素效應(yīng)以及不同PAEs同系物的累積暴露風(fēng)險(xiǎn)，文章進(jìn)一步對(duì)浙江地區(qū)果蔬進(jìn)行以下健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

采取1.4小節(jié)的公式，評(píng)估了US EPA有RfD值規(guī)定的5種PAEs（DEHP、DBP、DIBP、DEP、DMP）對(duì)浙江省成人和兒童的單一和聯(lián)合非致癌風(fēng)險(xiǎn)。假設(shè)不同的PAE互相之間不產(chǎn)生化學(xué)作用，將5種PAEs的非致癌風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)之和定義為總非致癌風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)，如圖3、圖4所示蔬菜的成人總非致癌風(fēng)險(xiǎn)為8.3×10-3，兒童總非致癌風(fēng)險(xiǎn)為2.0×10-2，水果的總成人非致癌風(fēng)險(xiǎn)為4.0×10-3，兒童總非致癌風(fēng)險(xiǎn)為9.2×10-3，非致癌指數(shù)均小于1，總體非致癌風(fēng)險(xiǎn)可接受。單一非致癌風(fēng)險(xiǎn)：DEHP＞DBP＞DIBP＞DEP＞DMP，其中DEHP和DBP的數(shù)值為10-3級(jí)別，DEHP兒童蔬菜的非致癌風(fēng)險(xiǎn)達(dá)到10-2級(jí)別。所測(cè)果蔬中PAEs非致癌風(fēng)險(xiǎn)均在可接受范圍內(nèi)，對(duì)人體健康危害較小。這與柴超等[15]和曹雙瑜等[16]報(bào)道果蔬中PAEs健康風(fēng)險(xiǎn)基本一致，長(zhǎng)鏈的PAEs，尤其是DEHP、DBP和DIBP，主要通過(guò)飲食暴露給人體，而短鏈的PAEs，如DMP、DBP通過(guò)飲食暴露給人體的貢獻(xiàn)相對(duì)較低[17-18]。對(duì)蔬菜和水果的細(xì)類(lèi)進(jìn)行分析，如圖3，蔬菜中總非致癌風(fēng)險(xiǎn)最大的細(xì)類(lèi)是豆類(lèi)，其次是葉菜類(lèi)、鱗莖類(lèi)，對(duì)單一PAE來(lái)說(shuō)，單一非致癌風(fēng)險(xiǎn)最大的蔬菜細(xì)類(lèi)是葉菜類(lèi)（HQDEHP=0.023）。這與王家文等[19]報(bào)道結(jié)果相似。水果中總非致癌風(fēng)險(xiǎn)最大的細(xì)類(lèi)是漿果類(lèi)（如草莓），其次是柑橘類(lèi)、熱帶和亞熱帶類(lèi)水果。單一非致癌風(fēng)險(xiǎn)最大的水果細(xì)類(lèi)是漿果類(lèi)（HQDEHP=0.29）。有研究表明[20]，植物表面帶有細(xì)絨毛或表面越粗糙，可以滯留更多附著在植物表面的顆粒物，從而富集DEHP能力越強(qiáng)。

圖3 不同蔬菜中PAEs非致癌健康危害

圖4 不同水果中PAEs非致癌健康危害

圖5 不同果蔬中DEHP致癌風(fēng)險(xiǎn)

對(duì)果蔬中的DEHP致癌風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分析，DEHP具有潛在致癌性，其致癌風(fēng)險(xiǎn)R值大于1×10-6，均處于10-6次數(shù)量級(jí)，與非致癌風(fēng)險(xiǎn)一致，成人風(fēng)險(xiǎn)略低于兒童，水果略低于蔬菜。但DEHP作為B2類(lèi)致癌物質(zhì)[21]，常將1×10-5作為致癌風(fēng)險(xiǎn)的控制標(biāo)準(zhǔn)。此研究所有樣品致癌風(fēng)險(xiǎn)雖＞1×10-6，但＜1×10-5，總體上致癌風(fēng)險(xiǎn)較小[6]。

為了對(duì)PAEs中的潛在雌激素效應(yīng)進(jìn)行評(píng)估，文章通過(guò)1.5小節(jié)公式結(jié)合文獻(xiàn)中的數(shù)據(jù)計(jì)算DBP、DEP、DEHP三種PAEs相應(yīng)的雌激素當(dāng)量（EEQ）。如表3，蔬菜平均EEQ水平為0.48 ng E2/d，豆類(lèi)的EEQ水平最高為0.67 ng E2/d，豆類(lèi)本身就是雌激素含量較高的蔬菜[22]。水果平均EEQ水平為0.20 ng E2/d，柑橘類(lèi)的EEQ水平最高為0.39 ng E2/d。但對(duì)食物中PAEs潛在的雌激素效應(yīng)研究甚少，沒(méi)有一個(gè)明確的界限值，參考文獻(xiàn)[23]中水的EEQ達(dá)到0.27 ng E2/L時(shí)，就會(huì)對(duì)導(dǎo)致魚(yú)卵致死。成年的斑馬魚(yú)一般長(zhǎng)4.5 cm，成人的體積是其的千倍，對(duì)于同一個(gè)數(shù)量級(jí)的EEQ暴露水平對(duì)于人體的危害相對(duì)較小。相比較羅瓊等[8]對(duì)食用油中PAEs的EEQ值18.91 ng E2/d，果蔬雌激素效應(yīng)要明顯低于食用油。

表3 不同果蔬中雌激素效應(yīng) 單位：ng E2/d

3 結(jié)論

（1）浙江地區(qū)果蔬中16種鄰苯二甲酸酯總體檢出率為100%，平均檢出含量103.30 μg/kg，單體DIBP、DBP、DEHP、DEP檢出率較高。浙江省不同市果蔬中∑6PAEs平均值從大到小依次為湖州、杭州、嘉興、紹興、溫州、舟山、寧波。

（2）不同品種果蔬中PAEs總含量較高的蔬菜種類(lèi)為葉菜類(lèi)、豆類(lèi)、鱗莖類(lèi)，水果種類(lèi)為柑橘類(lèi)和漿果類(lèi)。果蔬中主要PAEs組分為DINP，DBP，DIBP，DEHP，四種PAEs組分（∑4PAEs）占∑16PAEs含量的68.4%～95.2%。

（3）對(duì)浙江省果蔬進(jìn)行非致癌性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、致癌性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和潛在雌激素效應(yīng)評(píng)估，發(fā)現(xiàn)PAEs通過(guò)攝入果蔬途徑對(duì)人體造成危害的可能性較小，其暴露風(fēng)險(xiǎn)均在可接受的范圍內(nèi)，說(shuō)明浙江地區(qū)果蔬總體是安全的。