敦 康，郭永輝，付 莉，隋思強(qiáng)，柴倩雯，王若琳

（1.河北省藥品審評(píng)中心，河北 石家莊 050091；2.河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050071；3.河北省藥品職業(yè)化檢查員總隊(duì)，河北 石家莊 050091；4.河北科技大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院，河北 石家莊 050018）

桂利嗪（Cinnarizine）是一種哌嗪類化合物（其分子結(jié)構(gòu)如圖1 所示）。此藥屬于鈣通道阻滯劑。其作用機(jī)理為阻止血管平滑肌中的細(xì)胞膜鈣離子（Ca2+）向膜內(nèi)流動(dòng)，促使血管擴(kuò)張，從而改善腦部供血狀況。近幾十年，此藥在臨床上多用于治療缺血性腦血管病，包括腦血栓形成、腦動(dòng)脈硬化等；還可以用于預(yù)防和治療如暈車、眩暈等運(yùn)動(dòng)病，緩解由梅尼埃病或前庭系統(tǒng)疾病造成的眩暈、耳鳴等癥狀。此藥是抗眩暈治療的一線藥物[1-2]。此外，臨床上還使用桂利嗪聯(lián)合其他藥物進(jìn)行皮膚瘙癢、蕁麻疹等過(guò)敏性皮膚病的治療[3-4]。最新研究表明，桂利嗪在抗曼氏血吸蟲(chóng)[5]、治療COVID-19 相關(guān)凍瘡樣病變[6]等領(lǐng)域具有顯著的應(yīng)用效果。桂利嗪原料藥為《中國(guó)藥典》2020版收載品種，藥典對(duì)其性狀、檢查、鑒別含量測(cè)定等方面均有規(guī)范說(shuō)明。本文參考《中國(guó)藥典》及其他相關(guān)文獻(xiàn)[7-17]，采用紫外- 可見(jiàn)分光光度法與酸堿滴定法分別測(cè)定桂利嗪的純度，比較分析測(cè)定結(jié)果。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范及國(guó)家相關(guān)計(jì)量法規(guī)的要求，分析上述測(cè)定過(guò)程的不確定度。在本文中，筆者主要是分析紫外- 可見(jiàn)分光光度法與酸堿滴定法聯(lián)合測(cè)定桂利嗪純度的效果。

圖1 桂利嗪結(jié)構(gòu)式

1 儀器與試藥

卡爾費(fèi)休氏滴定儀V30，由瑞士Mettler Toledo公司生產(chǎn)；UV-2550 型紫外- 可見(jiàn)分光光度儀，由日本Shimadzu 儀器公司生產(chǎn)；箱式電阻爐SX2.5-10，由上海百典儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)；精密電子天平XPR226DR，由梅特勒托利多科技（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)；Agilent 7896 氣相色譜儀，由美國(guó)安捷倫科技公司生產(chǎn)?？栙M(fèi)休試液，由上海市國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：532069 ；水為實(shí)驗(yàn)室自制去離子水；分析純乙酸酐、冰乙酸、結(jié)晶紫，由天津化學(xué)試劑公司生產(chǎn)；桂利嗪樣品，批號(hào)：180119061。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外-可見(jiàn)分光光度法

2.1.1 供試品溶液的配置 取桂利嗪原料，精密稱取適量，用鹽酸溶液（9 →1000）配置成含桂利嗪7.5 μg?mL-1的溶液，即為供試品溶液。

2.1.2 試驗(yàn)條件 選取253 nm 波長(zhǎng)為特征吸收峰，測(cè)定該波長(zhǎng)處的吸光度，以吸收系數(shù)（）為575來(lái)計(jì)算，測(cè)定供試品的純度。

2.1.3 方法學(xué)研究

2.1.3.1 線性關(guān)系考察 精密稱取50.00 mg 桂利嗪置于50 mL 量瓶中，用鹽酸溶液（9 →1000）溶解并定容至刻度，搖晃均勻，配置成1000 μg·mL-1濃度的溶液作為貯備液。分別精密移取0.01 mL、0.02 mL、0.04 mL、0.08 mL、0.15 mL 至10 mL 量瓶中，用上述鹽酸溶液稀釋定容至刻度，搖晃均勻。按“2.1.2”項(xiàng)下檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定，記錄吸光度值。以樣品濃度(X，μg·mL-1) 為橫坐標(biāo)，以吸光度(Y) 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸線性方程為Y=6 698.8X+1.556 2，r=0.999 9。結(jié)果表明，桂利嗪試樣溶液在1 ～100 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，溶液吸光度與濃度具有良好的線性關(guān)系。

2.1.3.2 儀器精密度 取供試品溶液按照“2.1.2”項(xiàng)下試驗(yàn)方法，連續(xù)重復(fù)測(cè)試6 次，記錄吸光度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13%(n=6)，結(jié)果表明測(cè)試儀器的精密度良好。

2.1.3.3 方法精密度 平行配制6 份桂利嗪供試品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下試驗(yàn)方法，每份桂利嗪供試品溶液重復(fù)測(cè)試3 次，6 份桂利嗪供試品溶液的吸光度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41% (n=6)，結(jié)果表明測(cè)試方法的精密度良好。

2.1.4 紫外- 可見(jiàn)分光光度法純度標(biāo)準(zhǔn)值 數(shù)學(xué)模型的建立。采用紫外- 可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行純度測(cè)定，根據(jù)計(jì)算公式，確定桂利嗪純度的計(jì)算數(shù)學(xué)模型為:W紫外-可見(jiàn)分光光度法=A/×（1/100）/C。式中:W紫外-可見(jiàn)分光光度法為相對(duì)純度，A 為桂利嗪吸光度值，C 為桂利嗪濃度。

純度的測(cè)定方法：制備10 份桂利嗪供試品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下試驗(yàn)方法每份溶液重復(fù)測(cè)試3 次。桂利嗪溶液濃度（μg?mL-1）分別為0.007 495、0.007 503、0.007 473、0.007 438、0.007 470、0.007 445、0.007 513、0.007 523、0.007 478、0.007 478，桂利嗪溶液吸光度測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 桂利嗪溶液吸光度

格拉布斯（Grubbs）檢驗(yàn)：格拉布斯檢驗(yàn)可以用來(lái)剔除可疑值。對(duì)10 組檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行格拉布斯檢驗(yàn)，剔除測(cè)試中出現(xiàn)的可疑值。計(jì)算平均值x和標(biāo)準(zhǔn)偏差s。計(jì)算偏離值：平均值與最小值之差記為a1；最大值與平均值之差記為a2。a1和a2兩個(gè)值中最大者為可疑值。平均值為99.61%，s=0.079 74。經(jīng)計(jì)算，G=1.785，查閱格拉布斯臨界值表可知：G0.95(10)=2.176。G ＜G0.95(10)，因此可知在兩組數(shù)據(jù)中不存在可疑值。

確定標(biāo)準(zhǔn)值：由桂利嗪的純度測(cè)量數(shù)據(jù)確定桂利嗪紫外-可見(jiàn)分光光度法純度值為99.61%，s=0.079 74。

2.1.5 其他雜質(zhì)測(cè)定 受限于紫外-可見(jiàn)分光光度定量分析方法學(xué)的特點(diǎn)，樣品中的水分、熾灼殘?jiān)腿軇埩粼谧贤? 可見(jiàn)分光光度法系統(tǒng)中難以檢測(cè)，因此在利用紫外- 可見(jiàn)分光光度法測(cè)定純度時(shí)需要去掉水分、熾灼殘?jiān)腿軇埩魧?duì)數(shù)值的影響。

2.1.5.1 水分 采用卡爾費(fèi)休方法測(cè)定桂利嗪中的水分含量。用無(wú)水甲醇作為溶劑，溶解精密稱取的供試品，然后將溶液迅速放置于水分測(cè)定儀中進(jìn)行測(cè)試，重復(fù)測(cè)試10 次后取平均數(shù)據(jù)，得到平均值為0.142%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.010%(n=10)。

2.1.5.2 熾灼殘?jiān)?桂利嗪中的熾灼殘?jiān)凑铡吨袊?guó)藥典》2020 版熾灼殘?jiān)鼨z查項(xiàng)下要求測(cè)定。熾灼殘?jiān)鼫y(cè)定重復(fù)10 次，取平均值為0.037 9%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.003 3%(n=10)。

2.1.5.3 溶劑殘留 桂利嗪中的溶劑殘留使用氣相色譜法測(cè)定。測(cè)定條件為：色譜柱C P 9 210-w ax（30 m×320 μm×1.8 μm）載氣：氮?dú)猓涣魉伲? mL/min ；分流比：20:1 ；檢測(cè)器：FID 檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；進(jìn)樣方式：頂空；頂空平衡時(shí)間：30 分鐘；頂空加熱溫度：100℃；定量環(huán)溫度：105℃；傳輸線溫度：110℃；程序升溫：起始溫度為35℃，維持5 分鐘，以每分鐘3℃的速率升溫至50℃，維持2 分鐘，再以每分鐘20℃的速率升溫至200℃，維持7 分鐘。結(jié)果桂利嗪中的溶劑殘留測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果平均值為0，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0 (n=10)。測(cè)定結(jié)果：桂利嗪中的水分為0.142%，熾灼殘?jiān)鼮?.0379%，溶劑殘留為0，總計(jì)0.180%。桂利嗪標(biāo)準(zhǔn)值為99.61%×(100%-0.180%)=99.43%。

2.1.6 紫外- 可見(jiàn)分光光度法的不確定度評(píng)估 根據(jù)“2.1.4”項(xiàng)下的數(shù)學(xué)模型可知，紫外- 可見(jiàn)分光光度法不確定度來(lái)自吸光度，包括由容量瓶、溫度、移液管、天平以及儀器本身示值等影響因素的綜合作用，所以桂利嗪溶液吸光度的不確定度計(jì)算公式為

2.2 酸堿滴定法

2.2.1 測(cè)定方法 取桂利嗪約0.15 g，精密稱定質(zhì)量，加冰乙酸20 mL 與乙酸酐4 mL 溶解后，加結(jié)晶紫指示液1 滴，用高氯酸（HClO4）滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液呈綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)進(jìn)行校正。每l mL 的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于18.43 mg 的桂利嗪。空白液的制備：取冰乙酸20 mL，乙酸酐4 mL，加結(jié)晶紫指示液1 滴與高氯酸滴定液（0.5 mol?L-1）0.05 mL，搖勻即得。

2.2.2 計(jì)算公式 桂利嗪含量計(jì)算公式：A=C×(VV0)×18.43/0.1/m×100%。式中：A 為以無(wú)水物計(jì)算所得桂利嗪的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%) ；C 為鹽酸滴定液的濃度(mol?L-1) ；V 為供試品消耗的鹽酸滴定液體積(mL) ；V0為空白試驗(yàn)消耗鹽酸滴定液的體積，即0.05 mL；m為供試品的稱樣量(g)。

2.2.3 純度測(cè)定 酸堿滴定法測(cè)定桂利嗪純度的結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 桂利嗪酸堿滴定法測(cè)定結(jié)果

由表2 可知，酸堿滴定法測(cè)定的桂利嗪化學(xué)純度值為99.47%，在桂利嗪紫外- 可見(jiàn)分光光度法純度值不確定度范圍之內(nèi)，表明上述桂利嗪的純度值及不確定度真實(shí)準(zhǔn)確。經(jīng)計(jì)算，采用紫外- 可見(jiàn)分光光度法與酸堿滴定法相結(jié)合的方式來(lái)測(cè)定桂利嗪純度的標(biāo)準(zhǔn)值及其不確定度為99.56%±0.08% (k=2，P=0.93)。

3 討論

本論文對(duì)桂利嗪紫外- 可見(jiàn)分光光度法定值方法進(jìn)行了系統(tǒng)考察，對(duì)紫外- 可見(jiàn)分光光度法測(cè)試條件進(jìn)行了優(yōu)化。本文采用紫外- 可見(jiàn)分光光度法和酸堿滴定法兩種不同的分析方法綜合測(cè)定桂利嗪的純度值，其中采用紫外- 可見(jiàn)分光光度法定值方法分別平行測(cè)定10 次，純度標(biāo)準(zhǔn)值及不確定度為99.43%±0.08%(k=2，P=0.95) ；酸堿滴定法測(cè)定桂利嗪化學(xué)純度值為99.47%。兩種不同方法的結(jié)果相互印證，有效地避免了單一方法帶來(lái)的分析原理誤差，使純度結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。

紫外- 可見(jiàn)分光光度法和酸堿滴定法作為測(cè)定桂利嗪純度的經(jīng)典方法，具有操作簡(jiǎn)便、可靠、快速的特點(diǎn)，對(duì)其進(jìn)行不確定度評(píng)估十分重要。本研究為以桂利嗪作為主要成分的藥劑等提供了有效物質(zhì)含量測(cè)定方法的參考，同時(shí)也為桂利嗪純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制和申報(bào)工作提供了科學(xué)依據(jù)。本文中建立的不確定度評(píng)估數(shù)學(xué)模型和定值方法也為其他藥物進(jìn)行純度測(cè)量和不確定度評(píng)估提供了科學(xué)參考。