鄒新，產(chǎn)柳佳，易冰，羅柳蓮，丁世磊，裴棟，邸多隆※，趙立春※

[1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200；2.廣西壯瑤藥工程技術(shù)研究中心，廣西 南寧 530200；3.柳州市中醫(yī)醫(yī)院（柳州市壯醫(yī)醫(yī)院）藥學(xué)部，廣西 柳州 545026；4.中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所中國科學(xué)院西北特色植物資源化學(xué)重點實驗室，甘肅 蘭州 730000]

枸杞（Lyciumbarbarum，LB）系茄科枸杞屬落葉多棘刺灌木植物，我國主產(chǎn)區(qū)在寧夏、甘肅、山西等省份[1,2]，明代《本草綱目》將枸杞列為上品并記載枸杞全草可入藥，現(xiàn)代藥理研究也表明，果實、葉子、根皮均有藥用價值[3]，枸杞果實和根皮被2020 年版中國藥典收錄。枸杞的果實深加工過程中，枸杞籽作為廢料被拋棄，長期以來沒有得到有效利用。枸杞籽具有抗氧化、降血糖、改善認知損害、抗疲勞耐缺氧等藥用價值[4-8]，而相關(guān)化學(xué)成分的研究主要停留在脂肪酸、胡蘿卜素、維生素E 等成分的研究[9,10]，缺乏系統(tǒng)和全面的化學(xué)成分分析。為了充分利用枸杞資源，本文對枸杞籽油的脂肪酸和揮發(fā)油化學(xué)成分進行了綜合分析。采用超臨界CO2提取的枸杞籽油為原料，對枸杞籽油進行甲酯化處理進行GC-MS 分析；利用水蒸氣蒸餾法提取枸杞籽油中的揮發(fā)油，用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)分別分析揮發(fā)油和脂肪酸化學(xué)成分。本研究旨在為枸杞籽進一步研究和開發(fā)利用提供研究基礎(chǔ)。

1 材料方法

1.1 儀器

YH-400A型電子天平（宇恒電子衡器有限公司），SXKW數(shù)顯控溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司），Thermo ScientificTMTSQ 8000TMEvo 賽默飛三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國Thermo Scientific），DZKWS-8 電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）。

1.2 試劑

乙酸乙酯（LC-MS）、正庚烷（色譜純）、14%三氟化硼甲醇溶液（上海阿拉丁生化科技有限公司）。

1.3 材料

寧夏枸杞（Lycium barbarum）籽油由中國科學(xué)院蘭州化物所提供。

2 試驗方法

2.1 試驗參數(shù)和分析條件

2.2 枸杞籽油脂肪酸甲酯化

甲酯化采用三氟化硼法（借鑒GB5009.168-2016，GBT17376-2008 并稍作更改）：0.5g枸杞籽油置于50mL燒瓶中加7 mL 14%三氟化硼甲醇溶液和沸石，接上冷凝管，煮沸5 min，從冷凝管頂部加入5 mL正庚烷，停止加熱并立刻從水浴上取下燒瓶，立刻加入20 mL 飽和氯化鈉溶液，塞住燒瓶，劇烈震搖20 s，繼續(xù)加入飽和氯化鈉溶液至燒杯頸部，靜置分層，吸取2 mL 上層正庚烷溶液于離心管中，加入適當無水硫酸鈉進行脫水，20 ℃保存作為供試品溶液。

2.3 枸杞籽油揮發(fā)油提取

揮發(fā)油提取，按照《中國藥典》第四部附錄通則2204 揮發(fā)油測定法。枸杞籽油100 g 樣品和一定量的水混合，倒入揮發(fā)油提取裝置中，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時為止，電熱套緩緩加熱至沸騰，溫度保持在110℃，沸騰4h，靜置冷卻，開啟活塞使油層下降至恰與刻度0 線平齊，讀取揮發(fā)油凹液面處的體積，收集得到110 ℃餾分；同理枸杞籽油100 g 樣品和一定量的水混合，提取150 ℃揮發(fā)油，收集得到150 ℃揮發(fā)油餾分，吸取上述揮發(fā)油餾分分別置于離心管中用乙酸乙酯稀釋100 倍，加入適當無水硫酸鈉進行脫水，20℃保存作為供試品溶液。

3 結(jié)果和分析

水蒸氣蒸餾法提取得到110 ℃枸杞籽油揮發(fā)油約0.5 mL，提取150 ℃枸杞籽油揮發(fā)油約4 mL，實驗通過GC-MS 技術(shù)分析枸杞籽油脂肪酸和揮發(fā)油成分，獲得GC-MS 總離子流圖，見圖1、圖2 和圖3。通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫（NIST2.3）與譜庫的數(shù)據(jù)匹配度（SI）均達到85%以上，結(jié)合人工圖譜解析，查閱相關(guān)文獻確定其化學(xué)成分，用峰面積歸一法確定各組分相對含量，見表1和表2。

圖1 枸杞籽油脂肪酸總離子流圖Fig.1 The total ion current diagram of fatty acids in Lycium barbarum seed oil

圖2 枸杞籽油110 ℃揮發(fā)油總離子流圖Fig.2 The total ion chromatogram of volatile oil from Lycium barbarum seed oil at 110 ℃

圖3 枸杞籽油150 ℃揮發(fā)油總離子流圖Fig.3 The total ion chromatogram of volatile oil from Lycium barbarum seed oil at 150 ℃

表1 枸杞籽油脂肪酸成分及相對含量Table 1 The fatty acid composition and relative contents of Lycium barbarum seed oil

表2 枸杞籽油揮發(fā)性成分及相對含量Table 2 Volatile oil composition and relative contents of Lycium barbarum seed oil

3.1 枸杞籽油脂肪酸成分分析

如表1 所示，共鑒定出22 種化合物，其相對含量占總量89.82%；飽和脂肪酸有棕櫚酸甲酯、棕櫚酸乙酯、硬脂酸甲酯、二十烷酸甲酯、二十二烷酸甲酯、二十四烷酸甲酯和二十六烷酸甲酯；不飽和脂肪酸有棕櫚油酸甲酯、亞油酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸乙酯和反油酸乙酯。其他化合物有（E,Z）-2,4-Decadienal、羅漢柏烯、Benzoic acid,2-（1-oxopropyl）-,methyl ester、Methyl-linolenate、Ethyl 6,9,12-hexadecatrienoate、6,9,12-Octadecatrienoic acid,methyl ester、2,2'-亞甲基雙-（4-甲基-6-叔丁基苯酚）、二十五烷、三十六烷、三十四烷。主要成分有亞油酸甲酯（50.03%）、油酸甲酯（11.19%）、棕櫚酸甲酯（7.53%）、亞油酸乙酯（4.82%）、硬脂酸甲酯（3.57%）和二十二烷酸甲酯（2.53%）。

3.2 枸杞籽油揮發(fā)油成分分析

如表2 所示，枸杞籽油110 ℃和150 ℃鑒定出的共同化合物11 種分別是Di-epi- -cedrene-(I)（Di-epi--雪松烯）、2-epi- -Funebrene（2-epi- -柏木萜烯）、羅漢柏烯、（+）-花側(cè)柏烯、4-乙氧基苯甲酸乙酯、雪松醇、棕櫚酸乙酯、cis,cis,cis-6,9,12-Octadecatrienoic acid, propyl ester、亞油酸乙酯、反油酸乙酯和2,2'-亞甲基雙-（4-甲基-6-叔丁基苯酚），其中酯類5 種，烯類4 種，醇類1 種；總體上亞油酸乙酯含量較多分別是30.99%和31.04%；2,2'-亞甲基雙-（4-甲基-6-叔丁基苯酚）分別是8.31%和1.26%；反油酸乙酯分別是8.91%和8.59%；羅漢柏烯分別是7.52%和5.68%；棕櫚酸乙酯分別是0.41%和7.41%；雪松醇分別是2.58%和1.18%；（+）-花側(cè)柏烯分別是1.48%和0.73%；4-乙氧基苯甲酸乙酯分別是0.72%和0.75%；2-epi- -Funebrene 分別是0.79%和0.55%。110 ℃單獨檢測到雪松烯（0.52%）；150 ℃單獨檢測到2-Isopropyl-5-methyl-1-heptanol（0.16%）、（+）-1,7-二表- -雪松烯（0.35%）、9-Nonadecene（0.37%）、十七烷酮（0.23%）、9-十六碳烯酸乙酯（0.23%）、亞油酸甲酯（0.43%）、2-十九烷酮（0.43%）和反式-13-十八碳烯酸（0.29%）。

4 討論

亞油酸是人體必需的脂肪酸，可以防癌抗腫瘤，降血脂抗動脈粥樣硬化[11-16]，油酸抑制癌細胞在低轉(zhuǎn)移癌細胞中的生存[17]，棕櫚酸可以降低血清中膽固醇的含量[18]還可以作為滅蚊劑使用[19]，（E,Z）-2,4-Decadienal可以用來做香料，枸杞籽油中鑒定出的亞油酸、油酸、硬脂酸、棕櫚酸與湯麗華等[10]試驗結(jié)果一致，含量有些許差別，可能是不同來源和提取方法造成枸杞含量存在差異。揮發(fā)油中亞油酸乙酯和棕櫚酸乙酯含抗炎作用[20,21]。羅漢柏烯可以抗白蟻和抗真菌活性[7]，雪松醇是一種生物活性倍半萜，可以抑制炎癥反應(yīng)和減輕氧化應(yīng)激[22]。

通過對比110 ℃和150 ℃枸杞籽揮發(fā)油GC-MS分析，發(fā)現(xiàn)兩者含量和成分有些許差異，這可能是與提取的溫度有關(guān)，另外150 ℃時揮發(fā)油產(chǎn)量大于110 ℃揮發(fā)油的產(chǎn)量，表明可能150 ℃更適合枸杞籽油揮發(fā)油提取。

5 結(jié)論

近年來，對于枸杞的研究主要是果實和根皮，對枸杞籽的研究較少。本文對枸杞籽脂肪酸和不同溫度揮發(fā)油成分分析發(fā)現(xiàn)，其含有豐富的脂肪酸和藥用活性物質(zhì)，總體上可以防癌抗腫瘤、降血脂、抗炎、抗菌和抗氧化，具有較高的食藥用價值，通過枸杞籽脂肪酸和不同溫度揮發(fā)油化學(xué)成分分析為枸杞籽的相關(guān)研究提供基礎(chǔ)依據(jù)。