馬黎娟 馮瑪莉 仝立國 劉 霞

山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原 030000

藏柴胡為傘形科植物窄竹葉柴胡[Bupleurum marginatum Wall.ex DC. var. stenophyllum（Wolff）Shan et Y. Li]的干燥根，《滇南本草》中首次提到的柴胡與窄竹葉柴胡完全一致[1]。藏柴胡主產(chǎn)于滇、川、黔、藏等地區(qū)[2]，生長(zhǎng)在海拔2700 ～4000 米的高山、林下、山坡、溪邊或路旁，在貴州省藥材標(biāo)準(zhǔn)中以“竹葉柴胡”的名稱收載[3]，當(dāng)?shù)赜米鞑窈?，秋季開花前采挖，去除雜質(zhì)并干燥，味苦、辛，微寒。解表和里，升陽解郁，用于寒熱往來，胸滿，脅痛，口苦，耳聾，頭眩，瘧疾，中氣不足，脫肛，月經(jīng)不調(diào)，陰挺等證。藏柴胡從西藏引進(jìn)，因產(chǎn)量高、活性成分含量高，在康樂、臨洮、渭源、萬榮等地廣泛種植[4]。本文將藏柴胡的藥材鑒定、化學(xué)成分、藥理毒性以及代謝等方面的文獻(xiàn)并進(jìn)行了整理和總結(jié)，為柴胡屬藥用資源的開發(fā)提供理論參考。

1 藥材鑒定

已知我國柴胡屬植物有36 種17 變種7 變型，藥用柴胡二十余種，不同品種藥材性狀較為接近，但藥物作用相差甚遠(yuǎn)，臨床易混淆使用影響藥物療效甚至可能產(chǎn)生毒副作用。北柴胡是市場(chǎng)上流通最為廣泛的柴胡屬藥材，近年來由于北柴胡產(chǎn)量低，有些商戶或藥商濫用藏柴胡，因此本文從性狀、色譜-光譜以及分子技術(shù)方面對(duì)藏柴胡進(jìn)行鑒定。

1.1 性狀鑒別

藏柴胡[5]根頭部有多數(shù)毛狀葉殘基，根多不分枝或少分枝，主根發(fā)達(dá)，木質(zhì)化，外皮深紅棕色，紡錘狀，有細(xì)縱皺紋和稀疏的小橫突起，長(zhǎng)10 ～15 cm，直徑5 ～8 mm。根部表面顏色較淺，莖基部有密集的節(jié)，質(zhì)堅(jiān)韌不易折斷，斷面略顯纖維性。近根頭部殘留1 ～3 個(gè)莖基，皮部較厚呈黑棕色環(huán)，氣味濃郁，久嚼辛辣味明顯，有刺喉感。甘肅產(chǎn)藏柴胡外觀性狀與北柴胡有很大差異，根部長(zhǎng)，柔軟，皮部比例大，有非常密集的節(jié)，且節(jié)多隆起。

1.2 色譜-光譜技術(shù)

席嘯虎等[6]應(yīng)用近紅外光譜技術(shù)（near infrared，NIRS）建立了藏柴胡和北柴胡定量校正模型，實(shí)現(xiàn)了柴胡皂苷（SS）a、SSc 和SSd 三種指標(biāo)性成分的快速同步檢測(cè)。周麗娟等[7]采用電噴霧檢測(cè)器（CAD）代替蒸發(fā)光檢測(cè)器（ELSD）檢測(cè)紫外吸收較弱的皂苷類成分，利用高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器（HPLC-CAD）建立較為簡(jiǎn)便高效的指紋圖譜來評(píng)價(jià)柴胡質(zhì)量。石麗霞等[8]采用HPLC-ELSD、UV建立柴胡總多糖、單糖特征圖譜，通過不同單糖物質(zhì)的量比來鑒定柴胡的種類。樊洪利等[9]建立了藏柴胡與多批次北柴胡頂空-氣相色譜-離子遷移譜（HS-GC-IMS）的揮發(fā)性指紋圖譜，快速鑒別藏柴胡與北柴胡。

1.3 分子鑒定技術(shù)

DNA 條形碼分子鑒定技術(shù)[10]是利用基因組中一段公認(rèn)、相對(duì)較短的DNA 序列來進(jìn)行物種鑒定，可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)形態(tài)鑒別方法的不足。賴晶等[11]用細(xì)胞核基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（internal transcribed spacer，ITS）通用引物對(duì)收集到的藏柴胡與北柴胡進(jìn)行測(cè)序，特異性優(yōu)化得到一種穩(wěn)定、可重復(fù)的特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）方法和體系來準(zhǔn)確鑒別藏柴胡。夏召弟等[12-13]利用核糖體DNA 第二內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（intemal transcribed spacer 2，ITS2）條形碼分子鑒定技術(shù)對(duì)不同種屬柴胡進(jìn)行鑒定，分析種內(nèi)種間遺傳距離、核型似近系數(shù)聚類分析，兩相結(jié)合將藏柴胡與其易混藥材區(qū)分。蔣研風(fēng)羊[14]也提供了一種基于序列特征擴(kuò)增區(qū)域標(biāo)記技術(shù)（sequence characterized amplified regions，SCAR）鑒定藏柴胡的方法。

2 化學(xué)成分及其藥理活性

藏柴胡作為貴州民族用藥，具有解表和里，升陽解郁的功效。現(xiàn)有研究表明藏柴胡有解熱、抗炎、抗病毒以及保護(hù)肝臟的作用。關(guān)于藏柴胡的化學(xué)成分研究報(bào)道較少，文章對(duì)近年來藏柴胡化學(xué)成分進(jìn)行整理，共鑒定得到柴胡皂苷類成分46 種，揮發(fā)油類成分89 種，黃酮類成分3’，4’-二甲氧基檞皮素、蘆丁，生物堿類成分柳葉木蘭堿，苯丙素類成分異綠原酸A 等。

2.1 柴胡皂苷類

柴胡皂苷類成分屬藏柴胡中數(shù)量最多、含量最大，研究最為廣泛的一類化合物，從藏柴胡中檢測(cè)得到的皂苷類成分含量遠(yuǎn)高于北柴胡，方偉等[15]研究發(fā)現(xiàn)藏柴胡SSa 和SSd 的含量約為北柴胡含量的3 ～4 倍，這與課題組前期[16-17]發(fā)現(xiàn)藏柴胡總皂苷含量明顯高于藥典規(guī)定的北柴胡品種得出的結(jié)論一致，提示藏柴胡有作為藥典柴胡使用的基礎(chǔ)優(yōu)勢(shì)。同時(shí)方偉課題組首次[18-19]從藏柴胡提取物中分離并鑒定出SSb1、SSb2、SSi、SSf、SSI、SSs、hydroxysaikosaponin a，結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 藏柴胡中已提取分離出的化合物結(jié)構(gòu)

FANG 等[20]在293T-Gluc 細(xì)胞抗甲型流感病毒A/WSN/33（H1N1）試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)竹葉柴胡中新SSk、SSn 和SSh 比陽性對(duì)照利巴韋林具有更強(qiáng)的抑制活性和選擇性，從藏柴胡中分離到的SSa、SSb3、SSd、SSi、SSI、SSs 對(duì)流感病毒W(wǎng)SN33 也具有較為明顯的抑制作用，驗(yàn)證了13，28-環(huán)氧基、糖鏈類型和烯烴鍵類型有抗病毒活性和選擇性。

王惠等[21-22]以二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)甘肅產(chǎn)地藏柴胡與北柴胡有相似的抗炎作用。抗炎作用機(jī)制可能為柴胡皂苷降低毛細(xì)血管通透性，抑制炎癥因子滲出，阻止炎癥介質(zhì)組胺分泌及白細(xì)胞游走。

醋制藏柴胡可減輕及保護(hù)CCl4所致小鼠急性肝損傷的抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)。有研究報(bào)道SSd 可通過下調(diào)HMGB1 蛋白的過度表達(dá)及其下游炎癥因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，抑制JAK/STAT 通路，緩解CCl4誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激性肝損傷[21-22]。

2.2 多糖類

近年來，植物多糖作為一種重要的生物活性物質(zhì)和低毒性物質(zhì)，受到了生物醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。趙亞等[23]發(fā)現(xiàn)不同分子量醋柴胡多糖對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)（delayed-type hypersensitivity，DTH）小鼠具有免疫抑制作用，作用機(jī)制可能與其降低小鼠腸道派氏結(jié)中淋巴細(xì)胞數(shù)量以及抑制淋巴細(xì)胞干擾素（interferon，INF）-γ 水平和升高白介素（interleukin，IL）-4 水平有關(guān)。有關(guān)藏柴胡多糖成分還未進(jìn)行深入挖掘，其免疫作用有待進(jìn)一步研究與驗(yàn)證。

2.3 黃酮類

柴胡根部作為藥效部位長(zhǎng)期使用，除含有大量的皂苷類成分以外，還檢測(cè)到了黃酮類成分。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其地上部分黃酮類化合物含量遠(yuǎn)高于根部。李慧敏等[24]發(fā)現(xiàn)柴胡不同部位總黃酮均有較強(qiáng)的抗氧化能力，作為食品天然抗氧化劑具有較大潛力，因此可加強(qiáng)柴胡地上部分開發(fā)，擴(kuò)大藥材藥用范疇，節(jié)省柴胡植物資源。

2.4 揮發(fā)油類

柴胡揮發(fā)油是一種具有解熱及抗炎作用的有效成分[25]。據(jù)報(bào)道，目前已從柴胡屬植物中鑒定出數(shù)百種揮發(fā)油成分，其中大部分為萜類和脂肪族化合物[26]。課題組前期從藏柴胡中共鑒定得到89 種揮發(fā)油類成分，其中含量較高的有1-甲基-4-（1，2，2- 三甲基環(huán)戊基）苯、十五烷酸、羅漢柏烯、β-杜松烯等。藏柴胡、北柴胡水煎液[27]與阿司匹林對(duì)2，4-二硝基苯酚致熱大鼠模型有極其相似的解熱作用[28]，作用機(jī)制可能是降低血中炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-6、腫瘤壞死因子和前列腺素E2含量，調(diào)節(jié)下丘腦環(huán)磷酸腺苷及精氨酸升壓素的合成分泌。孟美黛[29]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)柴胡石油醚部位可改善CUMS大鼠抑郁樣狀態(tài)，因此可對(duì)藏柴胡的低極性部位進(jìn)行深入探索，觀察其成分、含量以及藥理作用與北柴胡之間的異同，從而更好地充分利用現(xiàn)有資源。

3 安全性

為了降低藥物成本，醫(yī)師或藥商使用非藥典或地方標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定使用的藥材，忽視了不同種屬藥材藥效或毒性差異，造成無法挽回的事故屢屢發(fā)生。孫蓉[30]課題組發(fā)現(xiàn)柴胡醇提組分皂苷含量及毒性均高于水提組分，根據(jù)臨床應(yīng)用和現(xiàn)代研究，柴胡皂苷治療后，肝功能異常和肝損傷的大鼠體重發(fā)生下降，并且隨著劑量的增加，病變加重。即驗(yàn)證了柴胡皂苷的藥效與毒性之間的關(guān)系。有文獻(xiàn)報(bào)道柴胡粗皂苷對(duì)血小板的聚集有明顯抑制，出現(xiàn)顯著的抗凝血性導(dǎo)致溶血。張國松等[31]考察了抗氧化劑對(duì)柴胡總皂苷溶血的影響，結(jié)果表明溶血程度與濃度呈劑量依賴性，添加抗氧化劑后其溶血效果明顯減弱。

關(guān)于柴胡屬植物安全性評(píng)價(jià)的相關(guān)報(bào)道主要集中在柴胡皂苷并未對(duì)揮發(fā)油等其他藥效成分進(jìn)行評(píng)價(jià)。臨床實(shí)踐中，藏柴胡常作湯劑使用，目前尚不清楚其他成分是否協(xié)同或拮抗柴胡的毒性作用。此外，大多數(shù)研究都集中在體外細(xì)胞水平上，缺乏相關(guān)動(dòng)物模型和臨床數(shù)據(jù)的支持，以及對(duì)藏柴胡最大臨床安全劑量的研究。

4 代謝組學(xué)

代謝組學(xué)是指基因組、微生物組和環(huán)境相互作用所產(chǎn)生的生物系統(tǒng)的代謝反應(yīng)，而代謝物組學(xué)是指組織或生物體液中代謝物的組成和濃度，兩術(shù)語在文獻(xiàn)中可互換使用。代謝組學(xué)即深入了解植物自身代謝或由于藥物作用而引起的人類和微生物代謝物與代謝途徑的變化和改變[32]。

XIA 等[33]共指認(rèn)藏柴胡44 個(gè)化合物，主成分分析（PCA 分析）共得出藏柴胡與北柴胡之間24 種差異代謝物，從整體化學(xué)組成上比較了兩種柴胡化學(xué)成分的差異。葉耀輝等[34]利用超高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UHPLC-Q-TOF-MS）建立了多批不同產(chǎn)地北柴胡的指紋圖譜，從共有峰中鑒定出13 個(gè)皂苷類化合物，PCA 分析發(fā)現(xiàn)影響不同產(chǎn)地樣品的差異成分主要是柴胡皂苷類。中藥的安全性作為首要問題，傳統(tǒng)的安全評(píng)估方法不能夠完全準(zhǔn)確評(píng)估其安全性，因此課題組現(xiàn)進(jìn)一步研究藏柴胡的藥物代謝組學(xué)，尋找藥效物質(zhì)作用靶器官及代謝通路，藥效-毒性之間的關(guān)系[35]。

5 展望

據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì)，柴胡目前的年用量已達(dá)1 萬余噸，并且伴隨柴胡為主要原料的藥品不斷開發(fā)上市。但柴胡的供應(yīng)缺口連年加大，野生柴胡資源卻連年減少，南柴胡也未能扛起藥用柴胡的大旗，不能滿足市場(chǎng)要求。藏柴胡有著與藥用柴胡相似的解熱、抗炎、保肝等藥理作用，其產(chǎn)量高，柴胡皂苷含量高，可作為柴胡藥材的重要來源，具有成為藥用柴胡補(bǔ)充品種的趨勢(shì)。藏柴胡的化學(xué)成分報(bào)道相對(duì)較少，多組學(xué)研究尚有許多不足，且藏柴胡作為北柴胡的偽品存在，其臨床應(yīng)用以及基礎(chǔ)研究尚不全面，不同給藥劑量、給藥時(shí)間所產(chǎn)生的藥理或毒性作用之間的關(guān)系，作用靶點(diǎn)、作用機(jī)制與北柴胡是否完全一致尚不明了，為更合理利用藏柴胡這一寶貴資源，上述均是亟待解決的重要問題。