劉明松，鄧亞偉，忻曉東，梁董茜，李春花,2*，劉曉明

1. 河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河北 石家莊 050200

2. 河北省中藥組方制劑技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 石家莊 050090

3. 河北省藥品審評中心，河北 石家莊 050090

三化湯（Sanhua Decoction）為國家中醫(yī)藥管理局公布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》第55 首，來源于金·劉完素《素問病機(jī)氣宜保命集》卷中[1]。原文記載：“中風(fēng)外有六經(jīng)之形證，先以加減續(xù)命湯，隨證治之，內(nèi)有便溺之阻格，復(fù)以三化湯主之?！笨梢娙瘻委熤酗L(fēng)臨床應(yīng)用已久[2]。全方由大黃、枳實(shí)、羌活、厚樸4 味藥組成，君藥大黃與枳實(shí)、厚樸3 藥合用，瀉熱祛瘀、通腹降氣，再加羌活祛風(fēng)解表，有升有降、表里結(jié)合，共治內(nèi)風(fēng)外風(fēng)，是中醫(yī)治療中風(fēng)的經(jīng)典方[3-5]。

目前，有關(guān)三化湯的研究多集中于臨床、藥理和含量測定等方面，對其量值傳遞研究較少[6]。在國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心組織起草的《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》要求中明確指出，經(jīng)典名方基準(zhǔn)樣品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（critical quality attributes，CQAs）的研究應(yīng)包括特征圖譜、指標(biāo)成分含量及干膏率等關(guān)鍵信息[7-8]。本研究在文獻(xiàn)考證結(jié)合煎煮工藝結(jié)果的基礎(chǔ)上確定三化湯制備工藝，制備了15 批基準(zhǔn)樣品煎液，通過構(gòu)建其特征圖譜并對指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測定，確定其含量及轉(zhuǎn)移率范圍，并結(jié)合出膏率分析飲片-基準(zhǔn)樣品量值傳遞規(guī)律，為其質(zhì)量研究提供科學(xué)依據(jù)，也為三化湯中藥復(fù)方制劑進(jìn)一步研究提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters H-Class 型超高效液相色譜儀、Empower工作站，美國Waters 公司；YP2002 型電子天平，上海津平科學(xué)儀器有限公司；D5.5-L 型煎藥壺，潮州市潮安區(qū)康雅順電器有限公司；Milli-QReference超純水系統(tǒng)，法國Millipore 公司；KQ500D 型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；HCP-1000A型高速多功能粉碎機(jī)，浙江省永康市金穗機(jī)械制造廠；HWS-28 型恒溫水浴鍋、DHG-9030A 型電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.2 試藥

對照品厚樸酚（批號PS012117，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.5%）、紫花前胡苷（批號PS010688，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.5%）、紫丁香苷（批號PS012100，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.86%）、柚皮苷（批號PS012062，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.5%）、新橙皮苷（批號PS011239，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.54%）、橙皮苷（批號 PS011588，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.54%）、蕓香柚皮苷（PS012543，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.5%），均購自成都普斯生物科技股份有限公司；對照品大黃酚（批號20120320）、蘆薈大黃素（批號20120320），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%，購自上海源葉生物科技有限公司；對照品和厚樸酚（批號MUST-20032205，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）、大黃酸（批號MUST-11032801，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）、大黃素（批號MUST-19100810，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%），購自成都曼思特生物科技有限公司。甲醇，色譜級，賽默飛世爾科技有限公司；甲酸，色譜級，天津大茂化學(xué)試劑廠；三氯甲烷，天津大茂化學(xué)試劑廠；乙腈，色譜級，天津市康科德科技有限公司。

不同產(chǎn)地及批號飲片見表1，經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院段緒紅副教授鑒定，大黃為蓼科大黃屬植物藥用大黃RheumofficinaleBaill.的干燥根和根莖，枳實(shí)為蕓香科柑橘屬植物酸橙CitrusaurantiumL.的干燥幼果，羌活為傘形科羌活屬植物羌活NotopterygiumincisumTing ex H. T. Chang 的干燥根莖和根，厚樸為木蘭科厚樸屬植物厚樸Magnolia officinalisRehd. et Wils.的干燥干皮及枝皮，以上均為符合《中國藥典》2020 年版炮制要求的飲片。通過隨機(jī)數(shù)表法對表1 中不同批次三化湯飲片進(jìn)行隨機(jī)組合，結(jié)果見表2。

表1 三化湯飲片來源信息Table 1 Source information of Sanhua Decoction herbal pieces

表2 三化湯隨機(jī)組合Table 2 Random combination table of Sanhua Decoction

2 方法與結(jié)果

2.1 三化湯基準(zhǔn)樣品的制備

三化湯原文記載“每服三兩，水三升，煎至一升半，終日服之?！苯?jīng)文獻(xiàn)考證，確定處方中各飲片所用劑量及加水量，最終明確煎煮工藝。確定全方為厚樸、大黃、枳實(shí)、羌活各30 g，粉碎過10 目篩，加純水2100 mL，浸泡0.5 h，開蓋，武火煮沸后，保持文火（500 W）微沸狀態(tài)約90 min，200 目濾網(wǎng)濾過，濾液放涼，調(diào)整體積至1050 mL，即得三化湯基準(zhǔn)樣品。同法制備三化湯各單味飲片及缺大黃、缺枳實(shí)、缺厚樸、缺羌活的陰性樣品溶液。

2.2 三化湯基準(zhǔn)樣品特征圖譜的建立

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Acquity UPLC?BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～5 min，10%～13%乙腈；5～11 min，13%～17%乙腈；11～31 min，17%～25%乙腈；31～32 min，25%～29%乙腈；32～40 min，29%～34%乙腈；40～43 min，34%～47%乙腈；43～55 min，47%～75%乙腈；體積流量0.2 mL/min；進(jìn)樣體積2 μL；柱溫35 ℃；檢測波長255 nm。三化湯基準(zhǔn)樣品UPLC 圖見圖1-A，混合對照品圖見圖1-B。

圖1 三化湯基準(zhǔn)樣品的UPLC 圖譜 (A) 和對照品圖譜 (B)Fig. 1 UPLC chromatogram (A) and comparator chromatogram (B) of substance benchmarks in Sanhua Decoction

2.2.2 供試品溶液的制備 精密吸取“2.1”項制備的煎液2 mL，甲醇定容至10 mL 量瓶中，搖勻，靜置，取上清液過0.22 μm 濾膜，即得供試品溶液。

2.2.3 對照品溶液的制備 分別取異歐前胡素、大黃酸、大黃素、大黃酚、和厚樸酚、厚樸酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、紫丁香苷、紫花前胡苷、柚皮苷、橙皮苷、蕓香柚皮苷和新橙皮苷對照品適量，精密稱定，甲醇定容，制成質(zhì)量濃度為25.21、15.25、16.11、19.13、17.29、18.22、16.34、12.31、42.11、72.08、210.64、36.24、45.62、171.97 μg/mL 的混合對照品溶液。

2.2.4 精密度考察 取S1 號供試品溶液，按“2.2.2”項下方法制備，按“2.2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，色譜圖中新橙皮苷（13 號峰）保留時間適中且峰形較好、分離度高，因此以新橙皮苷為參照峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰面積，結(jié)果顯示各共有峰相對保留時間的RSD 均＜0.5%，相對峰面積的RSD 均＜1.5%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性考察 取同一批三化湯基準(zhǔn)樣品，平行制備6 份供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，以新橙皮苷（13 號峰）為參照峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰面積，結(jié)果顯示各共有峰相對保留時間的RSD 均＜0.8%，相對峰面積的RSD 均＜1.8%，表明該方法重復(fù)性好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件，分別于制樣后0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣，以新橙皮苷（13 號峰）為參照峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰面積，結(jié)果顯示，各共有峰相對保留時間的RSD 均＜0.9%，相對峰面積的RSD 均＜2.6%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3 三化湯特征圖譜評價及飲片-基準(zhǔn)樣品量值傳遞關(guān)系研究

2.3.1 基準(zhǔn)樣品相似度評價 將表2 不同批次飲片組合按“2.2.2”項制備方法制備15 批三化湯基準(zhǔn)樣品供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件測定，記錄色譜圖。將S1～S15 批基準(zhǔn)樣品特征圖譜導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012 版）”生成疊加圖（圖2），以S1 為參照圖譜，時間窗寬度0.1 s，設(shè)置中位數(shù)法，Marker 峰匹配，并生成對照圖譜（R），S1～S15 批基準(zhǔn)樣品相似度結(jié)果分別為0.996、0.981、0.988、0.994、0.985、0.997、0.993、0.995、0.995、0.998、0.987、0.994、0.991、0.997、0.984，可見，各批次三化湯基準(zhǔn)樣品特征圖譜相似度均大于0.98。

圖2 15 批三化湯基準(zhǔn)樣品特征圖譜Fig. 2 Characteristic chromatogram of substance benchmarks in 15 batches of Sanhua Decoction

圖3 三化湯基準(zhǔn)樣品與單味飲片的UPLC 圖譜Fig. 3 UPLC chromatogram of Sanhua Decoction benchmark samples and single herbal pieces

2.3.2 特征峰歸屬 按“2.2.2”項方法制備各單味飲片和陰性供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。通過基準(zhǔn)樣品與各單味飲片（圖3）及陰性供試品圖譜（圖4）比對，將各特征峰進(jìn)行歸屬，全處方共歸屬26 個特征峰，其中峰6、7、14、15、16、17（蘆薈大黃素）、18（大黃酸）、21（大黃素）、25（大黃酚）、26（大黃素甲醚）歸屬于大黃；峰1、2、4、22（和厚樸酚）、24（厚樸酚）歸屬于厚樸；峰3、8、10（蕓香柚皮苷）、11（柚皮苷）、12（橙皮苷）、13（新橙皮苷）歸屬于枳實(shí)；峰5、9（紫花前胡苷）、19、20、23（異歐前胡素）歸屬于羌活。

圖4 三化湯基準(zhǔn)樣品與陰性樣品的UPLC 圖譜Fig. 4 UPLC chromatogram of Sanhua Decoction benchmark samples and negative sample

2.3.3 量值傳遞關(guān)系研究 以每味藥中的1 個特征峰為參照峰（大黃參照峰為15 號，枳實(shí)參照峰為13號，羌活參照峰為9 號，厚樸參照峰為22 號），對基準(zhǔn)樣品與各單味飲片共有峰峰面積比值作分析，結(jié)果見表3。各單味藥與基準(zhǔn)樣品中對應(yīng)共有峰峰面積雖存在差異，但大部分特征峰比值變化較小，結(jié)果表明各單味藥特征圖譜中主要物質(zhì)成分可以從飲片-基準(zhǔn)樣品較為完整地傳遞，且各物質(zhì)成分歸屬關(guān)系清晰。

表3 三化湯基準(zhǔn)樣品與各藥味飲片中特征峰峰面積比值Table 3 Peak area ratio of characteristic peaks between Sanhua Decoction benchmarks sample and each herbal pieces

2.4 三化湯基準(zhǔn)樣品及各單位飲片中指標(biāo)成分含量測定方法的建立

2.4.1 色譜條件

（1）枳實(shí)飲片、羌活飲片、基準(zhǔn)樣品（紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷）UPLC 定量色譜條件：Acquity UPLC?BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色譜柱；流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～10 min，10%～17%乙腈；10～28 min，17%～26%乙腈；體積流量0.2 mL/min；進(jìn)樣體積2 μL；柱溫35 ℃；檢測波長290 nm。對照品見圖5-A，基準(zhǔn)樣品見圖5-B。

圖5 混合對照品 (A) 和三化湯基準(zhǔn)樣品指標(biāo)性成分 (B) 含量測定色譜圖Fig. 5 Chromatogram for content determination of mixed control sample (A) and reference standard components of Sanhua Decoction (B)

（2）大黃飲片、厚樸飲片、基準(zhǔn)樣品（蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、和厚樸酚、厚樸酚）UPLC 定量色譜條件：Acquity UPLC?BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色譜柱；流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～8 min，30%～42%乙腈；8～18 min，42%～46%乙腈；18～22 min，46%～50%乙腈；22～30 min，50%～72%乙腈；體積流量0.2 mL/min；進(jìn)樣體積2 μL；柱溫35 ℃；游離總蒽醌（蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚）檢測波長254 nm，混合對照品色譜圖見圖5-A，基準(zhǔn)樣品見圖5-B；和厚樸酚、厚樸酚檢測波長295 nm，混合對照品色譜圖見圖5-A，基準(zhǔn)樣品見圖5-B。

2.4.2 三化湯基準(zhǔn)樣品含量測定供試品溶液的制備（1）紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷：同“2.2.2”項下制法制備供試品溶液。

（2）游離總蒽醌、和厚樸酚、厚樸酚：精密量取基準(zhǔn)樣品湯液25 mL，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取3 次，每次20 mL，合并三氯甲烷溶液，蒸干，殘渣加適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜置，過0.22 μm 濾膜，即得供試品溶液。

2.4.3 單味飲片含量測定溶液的制備

（1）枳實(shí)：取飲片粉末約0.1 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇30 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1.5 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，過0.22 μm 濾膜，即得。

（2）羌活：取飲片粉末約0.1 g，精密稱定，分別置不同具塞錐形瓶中，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過0.22 μm 濾膜，即得。

（3）大黃、厚樸：含量測定供試品溶液的制備參照《中國藥典》2020 年版。

2.4.4 對照品溶液的制備 取紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、和厚樸酚、厚樸酚對照品適量，精密稱定，甲醇溶解，制得質(zhì)量濃度分別為248.01、908.02、992.01、68.42、86.01、64.41、74.80、32.41、204.01、156.80 μg/mL 的各對照品溶液。

2.4.5 線性關(guān)系考察 取不同質(zhì)量濃度的指標(biāo)性成分對照品溶液，采用“2.4.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算回歸方程，結(jié)果如表4 所示，結(jié)果表明蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、和厚樸酚、厚樸酚、紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表4 指標(biāo)性成分含量測定方法學(xué)考察Table 4 Methodological investigation of determining of content of index components

2.4.6 精密度考察 取同一批三化湯基準(zhǔn)樣品（S1），參照“2.4.2”項下方法制備供試品溶液1 份，按“2.4.1”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、和厚樸酚、厚樸酚、紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷峰面積的RSD 值均小于1.95%，RSD 見表4，表明儀器精密度良好。

2.4.7 重復(fù)性考察 取同一批三化湯基準(zhǔn)樣品，按“2.4.2”項下方法平行制備6 份供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進(jìn)樣檢測，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、和厚樸酚、厚樸酚、紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD 值均小于2.68%，RSD 見表4，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.8 穩(wěn)定性考察 取同一批三化湯基準(zhǔn)樣品（S1），參照“2.4.2”項下方法制備供試品溶液1 份，按“2.4.1”項下色譜條件，分別在制樣后0、2、4、8、12、18、24 h 進(jìn)行測定，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、和厚樸酚、厚樸酚、紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷峰面積的RSD 見表4，結(jié)果表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.9 加樣回收率考察 精密量取已測知指標(biāo)成分含量的三化湯基準(zhǔn)樣品（S1）共6 份，分別按已知質(zhì)量濃度的80%、100%和120%加入對照品，采用“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，測定樣品中各指標(biāo)成分含量，計算加樣回收率，結(jié)果如表4 所示，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、和厚樸酚、厚樸酚、紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷的平均加樣回收率均在95%～105%，RSD 均小于3.0%，表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.4.10 樣品測定 取三化湯基準(zhǔn)樣品（S1～S15）和各單味藥材飲片，分別按照“2.4.2”“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.4.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，計算三化湯基準(zhǔn)樣品和單味飲片中指標(biāo)成分的含量。

2.5 三化湯飲片-基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率考察

按照公式計算三化湯飲片-基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分的轉(zhuǎn)移率。

w為基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)性成分的含量，W為飲片中指標(biāo)性成分的含量

由表5、6 結(jié)果可知，15 批三化湯基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分紫花前胡苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.39%～0.72%，平均轉(zhuǎn)移率為（28.08±5.28）%；柚皮苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)在2.70%～3.77%，平均轉(zhuǎn)移率為（45.07±5.17）%；新橙皮苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)在1.69%～3.88%，平均轉(zhuǎn)移率為（41.03±4.75）%；和厚樸酚與厚樸酚總質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.11%～0.32%，平均總轉(zhuǎn)移率為（3.32±0.92）%；大黃游離總蒽醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.10%～0.28%，平均轉(zhuǎn)移率為（16.54±3.57）%。

表5 三化湯飲片-基準(zhǔn)樣品紫花前胡苷、柚皮苷、新橙皮苷含量及轉(zhuǎn)移率Table 5 Content and transfer rate of nodakenin, naringenin and neohesperidin in Sanhua Decoction herbal pieces-benchmark samples

2.6 出膏率測定

按“2.1”項下制備方法制備15 批基準(zhǔn)樣品湯液，精密吸取50 mL 于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，真空干燥48 h 后，置干燥器中至恒定質(zhì)量，稱定質(zhì)量，計算得到各批次三化湯基準(zhǔn)樣品出膏率。

其中m表示干膏質(zhì)量，M表示飲片質(zhì)量，v代表取樣體積，V代表湯液總體積

分別取15 批對應(yīng)批號的大黃、枳實(shí)、羌活、厚樸單味飲片，按“2.1”項下方法制備得到4 味藥單味飲片水煎液，按照上述制備方法，得到單味飲片出膏率。出膏率結(jié)果見表7。全處方共計120 g，則理論出膏率＝大黃出膏率×25%＋枳實(shí)出膏率×25%＋羌活出膏率×25%＋厚樸出膏率×25%，其中枳實(shí)出膏率最高（44.61%±3.01%），厚樸的出膏率最低（13.61±0.67）%，各批次處方干膏轉(zhuǎn)移率為64.43%～76.22%，均保持在均值的±10%。

表8 三化湯基準(zhǔn)樣品出膏率及轉(zhuǎn)移率Table 8 Paste yield rate and transfer rate of Sanhua Decoction benchmark samples

3 討論

3.1 處方組成及計量考證

經(jīng)典名方療效確切且應(yīng)用歷史悠久，但存在著古今劑量換算及炮制差異等眾多難點(diǎn)問題。經(jīng)文獻(xiàn)考證，金元與唐宋時期處方劑量折算類似[9-10]，宋代1 兩合今39～41 g[11-12]，與國家中醫(yī)藥管理局和國家藥品監(jiān)督管理局公布的“古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息表（25 首方劑）”信息中金時期1 兩約為41.30 g 基本吻合，“每服三兩”也就是每服處方117.00～123.00 g，“大黃、枳實(shí)、羌活、厚樸各等分”則四味藥各29.25～30.75 g；參考苑禎等[13]對宋元時期“升”的考證，得到處方現(xiàn)代計量單位換算：金元時期1 升折合今約為702 mL。最終確定處方為大黃、枳實(shí)、羌活、厚樸均為生品各30 g，加水“三升”（2100 mL），煎至“一升半”（1050 mL）。

3.2 色譜條件分析

本實(shí)驗采用UPLC 建立三化湯特征圖譜和指標(biāo)成分含量測定方法，前期實(shí)驗分別采用乙腈-0.1%磷酸水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液和乙腈-0.1%甲酸水溶液做流動相，經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，采用乙腈-0.1%甲酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫時，基線平穩(wěn)，色譜峰分離效果較好。

另外考察不同體積流量（0.2、0.3、0.4 mL/min）對色譜峰的影響，當(dāng)體積流量升高時，主要成分色譜峰分離度較低，當(dāng)體積流量控制在0.2 mL/min 時，色譜峰峰形較好。波長在250～260 nm 時，特征圖譜出峰較多，整體成分信息較為全面；255 nm 波長下基線平穩(wěn)，各成分色譜峰分離效果較好，故最終選擇255 nm 作為特征圖譜的最佳波長。

3.3 指標(biāo)成分的選擇及量值傳遞研究

基準(zhǔn)樣品中柚皮苷和新橙皮苷專屬性強(qiáng)且含量遠(yuǎn)高于其他成分，在特征圖譜中較為明顯，2 成分在熱水中水溶性較好，有研究證明，新橙皮苷對柚皮苷具有一定的增溶作用[14]，且兩者轉(zhuǎn)移率均大于40%，前期實(shí)驗研究發(fā)現(xiàn)辛弗林在含量測定圖譜中有明顯陰性干擾，因此未選擇其作為枳實(shí)的測定指標(biāo)成分。基準(zhǔn)樣品中紫花前胡苷相比于《中國藥典》2020 年版規(guī)定的羌活測定指標(biāo)成分異歐前胡素和羌活醇UPLC 分離效果更好，而且在進(jìn)行TLC 鑒別過程中紫花前胡苷的分離度較好、表征明顯，更有利于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，因此選擇其作為指標(biāo)成分之一?；鶞?zhǔn)樣品中游離總蒽醌、和厚樸酚與厚樸酚極性較低，作者采用三氯甲烷作提取溶劑制備基準(zhǔn)樣品中游離總蒽醌、和厚樸酚與厚樸酚含量測定供試品，有效降低了大極性成分對于檢測指標(biāo)的干擾，同時縮短了檢測時間，并通過切換不同波長，增強(qiáng)了檢測指標(biāo)色譜峰信號。

以指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率在均值的±30%為衡量標(biāo)準(zhǔn)，15 批三化湯基準(zhǔn)樣品中紫花前胡苷、柚皮苷和新橙皮苷轉(zhuǎn)移率結(jié)果均符合該規(guī)定，但部分批次和厚樸酚與厚樸酚總量、游離總蒽醌的轉(zhuǎn)移率未在均值的±30%范圍內(nèi)，其中220105、220502 批次厚樸中明顯略高于均值的30%，分析原因可能是制備過程中受煎煮環(huán)境等因素影響導(dǎo)致指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率相差較大，后期制劑生產(chǎn)可考慮適當(dāng)剔除部分批次轉(zhuǎn)移率過低的飲片或采用混批投料方式來保證量值傳遞的均一性。大黃中游離蒽醌類化合物與厚樸中厚樸酚已被證明均是三化湯發(fā)揮治療腦卒中的重要成分[15-16]，厚樸酚與和厚樸酚是同一化學(xué)結(jié)構(gòu)的同分異構(gòu)體，具有疏水性烯丙基聯(lián)苯酚類結(jié)構(gòu)[17]，水溶性較差，轉(zhuǎn)移率較低；隨著提取時間增加，部分游離蒽醌并不穩(wěn)定，會產(chǎn)生氧化分解[18]，后期制劑生產(chǎn)中應(yīng)改進(jìn)提取工藝，以期提高藥效成分含量。

經(jīng)典名方基準(zhǔn)樣品作為制劑開發(fā)的中間體，是制劑前期生產(chǎn)的重要部分[19]，更是建立飲片-中間體-制劑質(zhì)量控制體系的關(guān)鍵，闡明方中關(guān)鍵成分量值傳遞規(guī)律，可以保證基準(zhǔn)樣品的均一、穩(wěn)定[20-22]。本研究通過建立不同批次基準(zhǔn)樣品特征圖譜對三化湯整體成分信息進(jìn)行表征和相似度評價，并對其共有峰進(jìn)行了指認(rèn)與歸屬，所建立的特征圖譜相似度均大于0.98，含量測定結(jié)果顯示基準(zhǔn)樣品各指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率基本控制在均值的±30%，各批次處方干膏轉(zhuǎn)移率均在均值的90%～110%，波動范圍在規(guī)定的均值±10%，表明基準(zhǔn)樣品制備工藝及處方轉(zhuǎn)移率較為穩(wěn)定，可為后續(xù)三化湯制劑的進(jìn)一步開發(fā)提供參考。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突