郝自強,田葳,王欣茹,魏文靜,楊瑞,王淑君(1. 安徽中醫(yī)藥大學藥學院,合肥230012;2. 沈陽藥科大學藥學院,沈陽 110016;3. 遼寧中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院,沈陽 110034;4. 長三角藥物高等研究院,江蘇 南通 226133;5. 江西中醫(yī)藥大學,南昌 330004)
西甲硅油乳劑屬于消泡類藥[1],主要用來治療因氣體過度產(chǎn)生或聚集導致的腹部膨脹、腸胃氣脹,聯(lián)合其他藥物治療功能性消化不良以及輔助腹部影像學檢查等,還可以用于治療嬰幼兒胃腸功能紊亂及兒童便秘[2-8]。西甲硅油作為西甲硅油乳劑中起主要消泡作用的成分,為二甲硅油與二氧化硅復合物,其中二甲硅油的含量為90.5%~99.5%,膠態(tài)二氧化硅的含量為4.0%~7.0%,本品為灰白色或乳白色黏稠油狀液體[9]。因西甲硅油沒有紫外吸收光譜特征峰,而紅外特征吸收明顯且專屬性好,故目前已報道的國內(nèi)外各種西甲硅油的含量測定方法均采用紅外分光光度法(FTIR),在1260 cm-1波數(shù)附近測定吸光度,對西甲硅油乳劑破乳后用甲苯[10]或正己烷[11]提取,采用0.5 mm溴化鉀(KBr)液體吸收池,以透射法測定。目前《中國藥典》暫未收錄西甲硅油乳劑中的西甲硅油含量測定方法,僅有《西甲硅油乳劑進口藥品注冊標準》可供參考[12],其他各國藥典目前僅查到美國藥典收錄西甲硅油乳劑中西甲硅油的含量測定方法[13]。本文建立了一種衰減全反射傅里葉變換紅外(ATR-FTIR)光度法快速地測定西甲硅油乳劑中西甲硅油的含量,巧妙采用液體石蠟減少正己烷的揮發(fā)性并省去液體吸收池等附件帶來的誤差,優(yōu)于以往的方法,可用于西甲硅油乳劑中西甲硅油含量的快速測定,現(xiàn)報道如下。
Agilent Cary 630 FTIR光譜儀,配有衰減全反射(ATR)附件(安捷倫科技有限公司);PX85Z型分析天平(奧豪斯儀器有限公司,d=0.01 mg);SB25-12D型超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)。
西甲硅油對照品(含量:95.4%,湖南九典宏陽,批號:T202105YB203);西甲硅油乳劑(德國柏林化學股份有限公司,批號:01005A、04080A、04081A);液體石蠟(批號:20220602)、正己烷(批號:20211028)、甲醇(批號:20211118)、無水硫酸鈉(批號:20210514)(分析純,國藥集團化學試劑有限公司)。
2.1.1 對照品溶液的制備 稱取西甲硅油對照品1200 mg,用正己烷定容至10 mL量瓶中,加無水硫酸鈉0.3 g,振搖,離心(4000 r·min-1,5 min),取上清液,即得。后續(xù)試驗所需濃度以液體石蠟稀釋得。
2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱定西甲硅油乳劑約5.4 g,置于具塞錐形瓶中,加甲醇2.5 mL,混勻,超聲5 min,精密加正己烷5 mL,混勻,超聲5 min,靜置,分取正己烷層,加無水硫酸鈉1 g,混勻后離心(4000 r·min-1,5 min),取上清液,即得。后續(xù)試驗所需濃度以液體石蠟稀釋得。
2.1.3 空白溶液的制備 分別取正己烷和液體石蠟適量于離心管中,加入適量無水硫酸鈉干燥,振搖,離心(4000 r·min-1,5 min),取上清液,即得。
2.1.4 光譜測定條件 使用ATR附件,掃描范圍4000~650 cm-1,分辨率4 cm-1,掃描次數(shù)為64次,選取特征吸收峰波數(shù)1260 cm-1,試驗操作為將樣品直接涂布在ATR附件金剛石檢測窗口,以特征吸收峰測定峰高計為吸光度。
取質(zhì)量濃度為60 mg·mL-1西甲硅油對照品、液體石蠟和正己烷,分別按“2.1.4”項下條件進樣測定。結果顯示,西甲硅油的紅外特征吸收峰在1260 cm-1波數(shù)處,液體石蠟和正己烷對西甲硅油的特征吸收峰均無干擾(見圖1)。
圖1 西甲硅油對照品、液體石蠟和正己烷光譜圖Fig 1 Spectra of simethicone reference,liquid paraffin and n-hexane
取質(zhì)量濃度為60 mg·mL-1的西甲硅油對照品,按“2.1.4”項下的試驗條件連續(xù)測定6次,結果顯示西甲硅油紅外特征吸收峰的位置穩(wěn)定,均為1260 cm-1波數(shù),吸光度的RSD(n=6)為1.4%,表明試驗儀器的精密度良好。
精密量取西甲硅油對照品儲備液0.1、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5 mL,置于不同5 mL離心管中,加液體石蠟稀釋至2.0 mL,分別配成5.724、28.62、45.79、57.24、68.688、85.86 mg·mL-1的西甲硅油對照品溶液,按“2.1.4”項下的試驗條件測定1260 cm-1波數(shù)處的吸光度。以對照品溶液濃度為橫坐標(X),吸光度為縱坐標(Y),繪制標準曲線。得到的線性關系方程為Y=0.0036X+0.0079,相關系數(shù)r=0.9993(n=6),結果表明西甲硅油在5.724~85.86 mg·mL-1與吸光度線性關系良好。
取批號為01005A的西甲硅油乳劑樣品,按照“2.1.2”項下方法平行配制6份供試品溶液并測定含量,分別按“2.1.4”項下的試驗條件測定,結果測得西甲硅油乳劑中西甲硅油的含量分別為100.0%、102.5%、104.5%、102.5%、103.8%、105.8%,平均值為103.2%,RSD為1.9%(n=6),顯示本次試驗的方法重復性良好。
取1.0 mL已知含量39.14 mg·mL-1的樣品溶液(批號:01005A)于5 mL離心管中,共9份,分為3組,分別加入質(zhì)量濃度38.16 mg·mL-1西甲硅油對照品0.8、1.0、1.2 mL,用液體石蠟稀釋至3 mL,超聲5 min使混合均勻,按照“2.1.4”項下條件測定含量,結果在相當于標示量限度85%~110%內(nèi),低、中、高濃度樣品的平均加樣回收率分別為98.8%、102.5%、103.1%,RSD分別為0.68%、0.44%、0.65%,表明本法準確度符合規(guī)定。
取3批西甲硅油乳劑樣品(批號:01005A、04080A、04081A),按“2.1.2”項下方法制備溶液,按“2.1.4”項下方法測定并計算樣品含量,結果測得3批西甲硅油乳劑樣品的含量分別為39.14、39.88、40.38 mg·mL-1,平均含量為39.80 mg·mL-1,RSD為1.3%(見表1),說明本法適用于西甲硅油乳劑中西甲硅油的含量測定。
表1 ATR-FTIR光度法與美國藥典方法(FTIR)的結果比較Tab 1 ATR-FTIR spectrophotometry method and United States Pharmacopoeia method(FTIR)
取西甲硅油乳劑樣品(批號:01005A),按“2.1.2”項下方法制備溶液,再按“2.1.4”項下方法,分別于0、2、4、6、8、10、12 h測定1260 cm-1處的吸光度值,結果西甲硅油吸光度的RSD為1.8%,結果表明樣品待測溶液在室溫下12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。
目前僅有美國藥典中收錄了的西甲硅油乳劑中西甲硅油的含量測定方法,操作如下:① 精密稱定西甲硅油對照品50 mg,置于具塞錐形瓶中,加稀鹽酸溶液(2 → 5)50 mL,振蕩5 s,再精密加入甲苯25 mL,選用往復搖床200 r·min-1,振搖10 min;然后離心(4000 r·min-1,30 min),取出后立即將約5 mL的上層有機層(甲苯)轉(zhuǎn)移到含有約1 g無水硫酸鈉的10 mL離心管中,劇烈振搖后,離心(4000 r·min-1,10 min),取上清液作為對照品溶液。② 分別取3批西甲硅油乳劑樣品,精密稱定西甲硅油乳劑約1.35 g,按“①”項下方法處理,取上清液作為供試品溶液;③ 精密量取25 mL的甲苯,按“①”項下方法處理,取上清液作為空白溶液。選擇0.5 mm KBr液體吸收池,測定波長為(1260±4)cm-1。按公式=(AU/AS)(CS/CU)×100%計算,其中AU:供試品溶液的吸光度;AS:對照品溶液的吸光度;CS:標準溶液中西甲硅油中的濃度(mg·mL-1);CU:供試品溶液中西甲硅油的濃度(mg·mL-1)。
取3批西甲硅油乳劑樣品(批號:01005A、04080A、04081A),分別按照美國藥典方法(FTIR)以及本文方法(ATR-FTIR)進行含量測定,并對測定結果進行比較(見表1)。美國藥典中規(guī)定含西甲硅油應為標示量的85%~110%,本文方法測定含量結果為標示量的99.5%,美國藥典方法測定的含量結果為標示量的99.3%,均符合藥典規(guī)定,同時兩種方法的RSD均小于2%,但本文方法更簡便快捷,安全性更高。
林翔等[14]對于ATR的原理進行了研究,ATR的原理是基于光內(nèi)反射,當反射元件的折射率(n1)大于樣品的折射率(n2),并且入射角θ大于臨界角θ(sinθ=n2/n1)時,就會發(fā)生全反射。如果在入射輻射的頻率范圍內(nèi)有樣品的吸收區(qū),則部分入射輻射被吸收,在反射輻射中相應頻率的部分形成吸收帶,攜帶出樣品的結構信息,這就是ATR譜。FTIR的ATR法與透射法相比,其差別主要是附件系統(tǒng):ATR法用到衰減全反射附件,透射法通常采用KBr壓片或者是吸收池,因此只要在FTIR上配置ATR附件即可實現(xiàn)ATR測試(見圖2)。對于一些能涂在全反射晶體反射面上的液體,可用一般測量固體樣品的ATR附件,直接把液體涂在晶體反射面上進行測定。但對于低沸點液體,或不能在全反射晶體的反射面上形成液層的高沸點液體,必須使用帶液體池的ATR附件[15]。
圖2 衰減全反射操作臺以及原理示意圖Fig 2 Operating of attenuating total reflection and principle sketch map
目前已知的兩種方法中,西甲硅油乳劑中的西甲硅油含量測定均采用0.5 mm KBr液體吸收池,以透射法測定,而本文采用的是反射法,雖然透射法靈敏度高于反射法[16],但由于西甲硅油和稀釋用的液體石蠟在室溫下均具有低揮發(fā)性,反射法的靈敏度已滿足西甲硅油乳劑中西甲硅油的含量測定,而透射法需要將測定所需的液體樣品注入到KBr液體吸收池中,無論采用甲苯還是正己烷作為溶劑,均有較大揮發(fā)性,易導致配制的對照品溶液和供試品溶液濃度在加入KBr液體吸收池密封前發(fā)生偏離,繼而導致測量的不確定度上升[17]。除此之外,在此過程中如果操作不當,會帶入氣泡,并且KBr液體吸收池易吸收空氣中的水分,使KBr液體吸收池窗片模糊發(fā)毛,導致透光率下降,基線噪音上升,檢測靈敏度下降,而本文采用的ATR-FTIR光度法,不僅在稀釋劑選擇上降低了溶劑的揮發(fā)性,而且操作簡便,減少了因為操作不當對試驗結果的影響。
目前已報道的國內(nèi)外各種西甲硅油的含量測定方法均采用紅外分光光度法(FTIR),在1260 cm-1波數(shù)附近測定吸光度,采用0.5 mm溴化鉀(KBr)液體吸收池,以透射法測定,應用的理論是朗伯比爾定律,其公式為A=lg(1/T)=Kbc,其中K為摩爾吸光系數(shù),A為吸光度,b為吸收層厚度,c為吸光物質(zhì)的濃度,因此需要精準的控制光程,即液膜厚度。
而衰減全反射法是根據(jù)麥克斯韋理論,其公式如下:dP=λ1/[2πn1√sin2θ=(n2/n1)2],其中λ1為紅外光束在反射介質(zhì)中的波長,θ為入射角,n1、n2分別為晶體材料和樣品的折射率,當檢測條件固定時,光程即液膜厚度也是固定的,因此相比于采用0.5 mm溴化鉀(KBr)液體吸收池的方法更加簡便快捷。
李舸遠等[18]研究發(fā)現(xiàn)液體石蠟能與二甲硅油以任意比例混溶,對選取的二甲硅油的紅外特征吸收無干擾且具有低揮發(fā)性,為本試驗的溶劑選擇提供了依據(jù)。本研究是對西甲硅油乳劑含量測定方法的探討,需破乳后用提取劑提取,方可對西甲硅油進行測定,目前國內(nèi)外已報道的測定西甲硅油含量的方法,采用甲苯或正己烷作為西甲硅油的溶劑,但甲苯在提取過程容易乳化[17],造成分層困難,加上甲苯屬于易制毒類的管控試劑,購買使用較煩瑣,最終選擇正己烷作為溶劑。繼而對正己烷、液體石蠟以及西甲硅油三者的溶解情況進行考察,發(fā)現(xiàn)3種試劑可以任意比例混溶,且正己烷、液體石蠟對西甲硅油的紅外特征吸收無干擾,并且在加入液體石蠟后能有效降低正己烷的揮發(fā)性,故本研究采用液體石蠟作為稀釋劑。
本方法受外界環(huán)境影響小,適用范圍更廣,尤其適用于濕度較高、KBr窗片不易于保存的地區(qū),如長三角區(qū)域;由于KBr窗片容易吸濕導致窗片發(fā)毛,需要經(jīng)常更換,此方法省去了KBr窗片的應用,在檢測費用上也更加低廉;在簡便性上不用液體池,直接滴在檢測平臺上即可,省時省力;減少了有機溶劑如正己烷或甲苯的揮發(fā)性,這兩個有機溶劑對人體均有危害,因此可以減少操作人員的意外吸入。本方法的不足之處是不能大批量、長時間進行含量測定,因為在操作過程中發(fā)現(xiàn)ATR操作臺在長時間使用后,會造成發(fā)熱,繼而加速混合溶劑中正己烷的揮發(fā),影響試驗結果。除此之外,本試驗并未考察正己烷與液體石蠟的混合比例是否對試驗結果存在影響,所以在混合體系的比例方面還有待于進行進一步研究。