臧九高, 王梅香, 沙翔

泰州市人民醫(yī)院心血管內(nèi)科,江蘇泰州 225300

慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是多種心血管疾病的終末階段,其發(fā)病人數(shù)逐年增長[1-2],目前臨床上缺乏早期評估CHF病情及預(yù)后的標(biāo)志物,無法為其預(yù)后不良高?；颊叩母深A(yù)及個體化診療提供依據(jù)。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在心血管系統(tǒng)中的作用正受到越來越多關(guān)注,lncRNA參與多種心血管疾病的病理生理過程,可作為診斷疾病、評估病情及預(yù)后的標(biāo)志物[3]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),沉默lncRNA SOX2-OT通過增加miR-2355-3p表達改善CHF大鼠心功能,減輕炎癥反應(yīng)[4]。因此本文擬將外周血lncRNA SOX2-OT和miR-2355-3p作為標(biāo)志物,分析CHF患者外周血lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平及其對預(yù)后的意義。

1 資料和方法

1.1 研究對象

選擇本院2018年1月—2021年1月收治的CHF患者90例(CHF組),男59例,女31例,年齡(63.95±9.95)歲,體質(zhì)指數(shù)(23.31±6.41)kg/m2;合并高血壓79例,糖尿病46例。CHF組按心功能分級分亞組。另選擇同期體檢健康志愿者100例(對照組),男62例,女38例,年齡(60.77±11.35)歲,體質(zhì)指數(shù)(22.93±5.68)kg/m2;合并高血壓71例,糖尿病39例。兩組間一般資料比較差異無顯著性(P>0.05)。CHF納入標(biāo)準(zhǔn):①符合指南CHF診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];②符合美國紐約心臟病協(xié)會(NYHA)心功能分級Ⅱ～Ⅳ級[5];③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并急慢性感染、自身免疫性疾病、惡性腫瘤;②住院期間死亡。對照組均進行超聲檢查排除心臟結(jié)構(gòu)性及功能性異常。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),患者或家屬均知情同意。

1.2 外周血lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p的檢測

入組時采集空腹外周靜脈血3～5 mL,提取RNA,反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,進行熒光定量PCR。反應(yīng)體系參照試劑盒說明書配置,引物由上海生工公司合成,以GAPDH為內(nèi)參。引物序列l(wèi)ncRNA SOX2-OT上游5′-TGCTAGGTCAGGGCTTTAG-3′,下游5′-CTAATGGCTAGCTAGCTAC-3′。miR-2355-3p上游5′-TGCAGTATGCTGAGCGATC-3′,下游試劑盒內(nèi)通用序列。GAPDH上游5′-GTAGCTGACGATCGAGCTA-3′,下游5′-TGACTGATCAGACTGACGA-3′。反應(yīng)條件:95 ℃ 3 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,重復(fù)40個循環(huán)。根據(jù)公式2-ΔΔCt計算lncRNA SOX2-OT和miR-2355-3p水平。

1.3 觀察指標(biāo)

CHF患者入組時全自動生化分析儀檢測超敏C反應(yīng)蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、N末端B型腦鈉肽前體(N-terminal B-type brain natriuretic peptide precursor,NT-proBNP)水平。HP5500型彩色多普勒超聲測定左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction,LVEF)水平。CHF患者出院后門診、電話等隨訪1年,終點事件為出院后1年內(nèi)發(fā)生主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE),MACE包括心力衰竭再入院、惡性心律失常、心源性死亡及全因死亡。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平的比較

與對照組比較,CHF組lncRNA SOX2-OT升高,miR-2355-3p降低,且NYHA分級越高,上述變化越明顯(P<0.05;表1)。

表1 各組lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平的比較

2.2 不同心功能分級CHF患者hs-CRP、NT-proBNP、LVEF水平的比較

CHF組患者NYHA分級越高,hs-CRP、NT-proBNP水平越高,LVEF水平越低(P<0.05;表2)。

表2 不同心功能分級CHF患者hs-CRP、NT-proBNP、LVEF水平的比較

2.3 CHF組各指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果

CHF組lncRNA SOX2-OT與miR-2355-3p、LVEF呈負相關(guān),與hs-CRP、NT-proBNP呈正相關(guān);miR-2355-3p與hs-CRP、NT-proBNP呈負相關(guān),與LVEF呈正相關(guān)(P<0.05;圖1)。

圖1 CHF組各指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果

2.4 lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p對CHF預(yù)后的預(yù)測價值

以CHF組lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p中位數(shù)為界,將患者分為高表達者和低表達者,隨訪1年,CHF患者MACE發(fā)生率lncRNA SOX2-OT高表達者高于低表達者,miR-2355-3p低表達者高于高表達者(P<0.05;圖2)。ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),外周血lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p預(yù)測MACE曲線下面積分別為0.870(95%CI 0.794～0.946)和0.710(95%CI 0.596～0.824),lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p對CHF患者MACE具有良好的預(yù)測價值(圖3)。

圖2 不同lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平CHF患者預(yù)后的K-M曲線

圖3 lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p預(yù)測CHF患者預(yù)后的ROC曲線

3 討 論

早期評估CHF的病情及預(yù)后,篩選預(yù)后不良的高危CHF患者,有助于為患者制定個體化治療方案,以改善其預(yù)后。近些年lncRNA及miRNA在心血管疾病中的作用受到越來越多關(guān)注。在CHF、心肌梗死、心肌炎等疾病的發(fā)病過程中,多種lncRNAs及miRNAs表達的變化不僅在局部心肌組織中發(fā)揮生物學(xué)作用,還能在血液循環(huán)中異常表達并作為評估病情的標(biāo)志物[6-8]。lncRNA SOX2-OT在心力衰竭模型中表達增加,過表達lncRNA SOX2-OT加重心肌損害,沉默lncRNA SOX2-OT減輕心肌損害[3,9]。本研究在CHF患者外周血中檢測到lncRNA SOX2-OT表達增加,且隨NYHA心功能分級增加呈增加趨勢,表明在CHF的發(fā)生及發(fā)展過程中存在lncRNA SOX2-OT表達增加,高表達的lncRNA SOX2-OT可能以加劇心肌細胞損害的方式參與CHF的發(fā)生及發(fā)展。

在CHF動物模型中,沉默lncRNA SOX2-OT通過增加miR-2355-3p表達改善心功能,抑制心肌損害及炎癥反應(yīng)[3]。本研究在CHF患者中觀察了lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p軸的變化及意義。CHF患者外周血miR-2355-3p表達水平低于對照組,且隨著心功能分級增加呈降低趨勢,且lncRNASOX2-OT與miR-2355-3p呈負相關(guān),提示CHF發(fā)病過程中可能存在lncRNA SOX2-OT與miR-2355-3p的靶向調(diào)控作用。上述兩種非編碼RNA與心功能指標(biāo)NT-proBNP、LVEF及炎癥指標(biāo)hs-CRP均具有相關(guān)性,表明lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p軸的變化在CHF的發(fā)病過程中加重心功能損害,促進炎癥反應(yīng)激活。

炎癥反應(yīng)在CHF的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,多項炎癥標(biāo)志物對CHF患者的預(yù)后具有預(yù)測價值[10-11]。MACE是目前臨床研究中評估CHF預(yù)后常用的終點事件,CHF患者累積MACE發(fā)生率為20%～40%[12-13]。本研究中CHF患者出院后進行了1年隨訪,進一步分析lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p軸與預(yù)后的關(guān)系,經(jīng)K-M曲線及ROC曲線驗證發(fā)現(xiàn),lncRNA SOX2-OT表達增加者、miR-2355-3p表達降低者MACE發(fā)生率增加,lncRNA SOX2-OT和miR-2355-3p對MACE具有預(yù)測價值。

綜上所述,CHF患者外周血lncRNA SOX2-OT表達增加,miR-2355-3p表達降低,lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p表達的變化與心功能損害的加重、炎癥反應(yīng)的激活具有相關(guān)性,且兩者對出院后1年內(nèi)發(fā)生MACE具有預(yù)測價值。以上結(jié)果為今后發(fā)現(xiàn)CHF新的預(yù)后評估標(biāo)志物提供了新思路,也為深入認識lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p軸在CHF中的作用及機制提供了依據(jù)。