黃保成 胡秀月 韋嬌君 王燦琴 韋仕巖 王曉國

（1 田林縣科學(xué)技術(shù)情報(bào)研究所，廣西 田林 533300；2 田林縣經(jīng)濟(jì)作物站，廣西 田林 533300；3 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所，廣西 南寧 530007）

靈芝Ganoderma lucidum，是一種珍貴的食藥用真菌[1]，主要分布于我國的熱帶、亞熱帶地區(qū)，以海南省、貴州省、云南省分布種類最多[2-3]。靈芝在我國被視為寶貴的中藥材，中醫(yī)學(xué)家認(rèn)為靈芝具有滋補(bǔ)強(qiáng)體、扶正固本、延年益壽等功效[4]，有著悠久的食用歷史，可用于泡茶、泡酒、入菜等[5]。目前，我國栽培推廣的靈芝品種較少，且部分品種因長(zhǎng)年使用已出現(xiàn)減產(chǎn)、品質(zhì)下降等退化現(xiàn)象。靈芝優(yōu)良新品種選育已成為食用菌育種工作者的首要任務(wù)，而野生靈芝種質(zhì)資源的挖掘是靈芝新品種選育的重要途徑之一。因此采集具有優(yōu)良性狀的野生靈芝菌株[6]，并馴化栽培勢(shì)在必行[7]。

筆者對(duì)一株野生靈芝進(jìn)行生物學(xué)特性研究，探索該菌株菌絲最佳生長(zhǎng)條件，為野生靈芝馴化栽培及種質(zhì)創(chuàng)新提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 供試菌株及培養(yǎng)基

供試野生靈芝子實(shí)體于2019 年采自廣西壯族自治區(qū)百色市靖西市湖潤(rùn)鎮(zhèn)，經(jīng)組織分離、純化和鑒定，獲得純菌株，編號(hào)為JXLZ-3，保藏于廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所。供試培養(yǎng)基為PDA 培養(yǎng)基。該菌株人工栽培子實(shí)體見圖1。

圖1 人工栽培靈芝JXLZ-3子實(shí)體

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)溫度試驗(yàn)

將供試菌株接種于PDA 培養(yǎng)基（規(guī)格9 cm 平皿）中，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱避光活化培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，用直徑5 mm的打孔器從菌落邊緣取大小相同的圓形菌塊，轉(zhuǎn)接于空白PDA 培養(yǎng)基上，然后分別置于15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)避光培養(yǎng)6 d。每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。

在培養(yǎng)過程中觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)，采用“十”字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲平均生長(zhǎng)速度。

菌絲平均生長(zhǎng)速度=菌落半徑（mm）∕培養(yǎng)天數(shù)（d）。

1.2.2 培養(yǎng)基pH試驗(yàn)

設(shè)置PDA 培養(yǎng)基pH 為4、5、6、7、8、9、10、11，高溫滅菌后倒平板，接種后于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱避光培養(yǎng)7 d。每個(gè)處理5 個(gè)重復(fù)。接種、觀察及測(cè)量方法同1.2.1。

1.2.3 培養(yǎng)基碳源試驗(yàn)

PDA 培養(yǎng)基分別加入等量的蔗糖、果糖、乳糖、麥芽糖、淀粉、葡萄糖，配制不同碳源培養(yǎng)基，高壓滅菌后倒平板，接種后于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱避光培養(yǎng)7 d。每個(gè)處理5 個(gè)重復(fù)。接種、觀察及測(cè)量方法同1.2.1。

1.2.4 培養(yǎng)基氮源試驗(yàn)

PDA 培養(yǎng)基中分別加入等量的酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、硝酸銨、硫酸銨、尿素、硝酸鉀，配制不同氮源培養(yǎng)基，高壓滅菌后倒平板，接種后于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱避光培養(yǎng)7 d。每個(gè)處理5 個(gè)重復(fù)。接種、觀察及測(cè)量方法同1.2.1。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用DPS 軟件對(duì)以上單因素試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和差異顯著性比較，用字母標(biāo)記法表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)溫度對(duì)靈芝JXLZ-3 菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

由表1、圖2 可知，培養(yǎng)溫度為15～30 ℃時(shí)，靈芝JXLZ-3 菌株菌絲均能生長(zhǎng)，溫度為30 ℃，菌絲潔白濃密且整齊，長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)，為菌絲最適生長(zhǎng)溫度。培養(yǎng)溫度為20 ℃、25 ℃，菌絲長(zhǎng)速（均指平均生長(zhǎng)速度，下同）顯著慢于30 ℃，長(zhǎng)勢(shì)也相對(duì)較弱；培養(yǎng)溫度為15 ℃，菌絲長(zhǎng)速較慢，稀疏細(xì)弱；35 ℃下培養(yǎng)6 d菌絲不萌發(fā)，但再在25 ℃下培養(yǎng)菌絲又可恢復(fù)生長(zhǎng)。試驗(yàn)培養(yǎng)溫度間菌絲長(zhǎng)速均存在極顯著差異。

表1 不同培養(yǎng)溫度下靈芝JXLZ-3菌株菌絲長(zhǎng)速

圖2 不同培養(yǎng)溫度靈芝JXLZ-3菌株菌落形態(tài)（培養(yǎng)6 d）

2.2 培養(yǎng)基pH對(duì)靈芝JXLZ-3菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

由表2、圖3 可知，靈芝JXLZ-3 菌株菌絲在8 個(gè)pH 處理培養(yǎng)基上均可正常生長(zhǎng)，其菌絲長(zhǎng)速排序：pH 5>pH 4>pH 6>pH 7>pH 8>pH 10>pH 9>pH 11。pH 5 的培養(yǎng)基上，菌絲長(zhǎng)速最快，潔白濃密且整齊，長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)；pH 4 的培養(yǎng)基上，菌絲長(zhǎng)速及長(zhǎng)勢(shì)次之，但該pH的培養(yǎng)基質(zhì)地較軟，不利于轉(zhuǎn)接操作；pH 6、7、8的培養(yǎng)基上，菌絲長(zhǎng)速隨pH上升而下降，長(zhǎng)勢(shì)變?nèi)?；pH 9、10的培養(yǎng)基上，菌絲雖長(zhǎng)速較慢，但潔白濃密且整齊，長(zhǎng)勢(shì)表現(xiàn)較佳；pH 11的培養(yǎng)基上，菌絲長(zhǎng)速最慢，且與其他pH處理有極顯著差異。

表2 不同pH培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長(zhǎng)速

圖3 不同pH培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3菌株菌落形態(tài)（培養(yǎng)7 d）

綜合菌絲長(zhǎng)速和長(zhǎng)勢(shì)，pH 4～6的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最好，最適pH為5。

2.3 供試碳源對(duì)靈芝JXLZ-3 菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

由表3、圖4可知，靈芝JXLZ-3菌株菌絲在以果糖、蔗糖、葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基上長(zhǎng)速較快，且三者間無顯著性差異，菌絲潔白濃密、菌落邊緣整齊，長(zhǎng)勢(shì)良好；在以淀粉或麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)速次之，菌絲濃密與整齊程度稍差，二者間無極顯著差異；在以乳糖為碳源的培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)速較慢，與其他碳源處理有顯著差異，菌絲較稀疏、細(xì)弱，長(zhǎng)勢(shì)較弱。

表3 不同碳源培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長(zhǎng)速

圖4 供試碳源培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3菌株菌落形態(tài)（培養(yǎng)7 d）

綜合靈芝JXLZ-3 菌株菌絲長(zhǎng)速、長(zhǎng)勢(shì)，培養(yǎng)基最適碳源為果糖。

2.4 供試氮源對(duì)靈芝JXLZ-3菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

由表4、圖5 可知，在以尿素為氮源的培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3 菌株菌絲不萌發(fā)，在其他氮源培養(yǎng)基上菌絲均能夠正常生長(zhǎng)，菌絲長(zhǎng)速排序：酵母粉>硝酸銨>硫酸銨>牛肉膏>硝酸鉀>蛋白胨。在以酵母粉、硝酸銨、硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)較快，且三者間無顯著差異，但在以酵母粉、硝酸銨為氮源的培養(yǎng)基上菌絲更潔白濃密；在以牛肉膏、硝酸鉀為氮源的培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)速次之，二者間無極顯著差異；在以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)速較慢，與其他氮源培養(yǎng)基上的菌絲長(zhǎng)速存在極顯著差異。

表4 供試氮源培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長(zhǎng)速

圖5 供試氮源培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3菌株菌落形態(tài)（培養(yǎng)7 d）

3 小結(jié)與討論

靈芝JXLZ-3 菌株菌絲在15～30 ℃均能生長(zhǎng)，最適溫度為30 ℃，與錢坤等[8]、蘭玉菲等[9]和劉冬梅等[10]的研究結(jié)果基本一致，但與雷萍等[11]報(bào)道的野生靈芝菌株菌絲生長(zhǎng)適宜溫度為26～28 ℃有些差異。靈芝菌絲生長(zhǎng)適宜溫度的差異是否與來自不同地理位置有關(guān)，有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。

在pH 4～11 的培養(yǎng)基上，靈芝JXLZ-3 菌株菌絲均能生長(zhǎng)，最適pH 為5，與白肉靈芝[12]、靈芝南GL11[13]、四川靈芝[8]的生長(zhǎng)最適培養(yǎng)基pH 分別為3、6、7 不同。說明不同靈芝菌株菌絲的最適生長(zhǎng)pH有一定的差異。

在以果糖或蔗糖為碳源培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3菌株菌絲長(zhǎng)速較快、長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，最適碳源為果糖，與劉冬梅等[10]、雷萍等[11]報(bào)道的最適碳源為可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖不同，說明不同靈芝菌株菌絲生長(zhǎng)對(duì)碳源需求有差異。在以酵母粉、硝酸銨、硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基上靈芝JXLZ-3 菌株菌絲生長(zhǎng)良好，最適氮源為酵母粉，該結(jié)果與劉冬梅等[10]、雷萍等[11]報(bào)道的最適氮源為酵母粉一致；而與錢坤等[8]研究的四川靈芝最適氮源為牛肉膏不同，與陳旭等[13]研究的靈芝南GL11 最適氮源為蛋白胨也有差異，可能與基礎(chǔ)培養(yǎng)基不同有關(guān)。

近年來廣西靈芝產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，但目前推廣栽培的靈芝品種較少且部分因常年使用出現(xiàn)退化現(xiàn)象。研究結(jié)果為廣西靈芝選育更新?lián)Q代奠定一定基礎(chǔ)。