劉光姣, 王曉光, 王 焱, 王 雪, 申衛(wèi)東

1.解放軍總醫(yī)院京中醫(yī)療區(qū)旃壇寺門診部,北京 100034;2.解放軍總醫(yī)院 耳鼻喉科,北京 100039

冠心病(coronary artery disease,CAD)患者病死率位居心血管疾病首位,且隨著年齡增長而增加,近年來有逐年增加的趨勢(shì)。準(zhǔn)確評(píng)估患者病情對(duì)于改善CAD患者預(yù)后具有重要意義[1-2]。非編碼RNA,如微小RNA(microRNA,miRNA)、環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)等,可參與調(diào)控血管新生、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)、血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與凋亡等,在心血管疾病的病理機(jī)制中發(fā)揮重要作用[3]。微小RNA-655(microRNA-665,miR-665)參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡,還參與調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞衰老[4-5]。有研究報(bào)道,在心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌組織中,miR-665表達(dá)下調(diào),上調(diào)miR-665表達(dá)可通過調(diào)節(jié)瞬時(shí)受體電位通道M7表達(dá)改善大鼠心肌纖維化[6]。生物信息學(xué)分析(http://bioinfo.life.hust.edu.cn/lncRNASNP#!/)顯示,miR-665與環(huán)狀RNA人腎結(jié)核蛋白4(circular RNA human nephronophthisis 4,circNPHP4)有靶向結(jié)合位點(diǎn),推測(cè)circNPHP4可能與CAD有關(guān)。而Gensini積分可有效評(píng)估患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度。本研究旨在探討CAD患者circNPHP4、miR-665表達(dá)與冠狀動(dòng)脈狹窄程度及主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取自2020年8月至2022年5月于解放軍總醫(yī)院確診為CAD的95例患者為研究對(duì)象,并將其納入CAD組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合CAD診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],且經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查確診;(2)首次發(fā)病。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并心肌病等其他心血管疾病;(2)既往慢性心力衰竭、心肌梗死、先天性心臟病;(3)冠狀動(dòng)脈移植術(shù)等治療史;(4)合并肝腎功能不全、精神疾病;(5)合并惡性腫瘤。根據(jù)Gensini評(píng)分[8],將患者分為輕度病變組(n=39)、中度病變組(n=35)、重度病變組(n=21)。另選擇同期于本院行冠狀動(dòng)脈造影檢查未見明顯病變者90例納入對(duì)照組。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號(hào):2022013)。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 治療方法 患者口服阿司匹林腸溶片治療,首次劑量300 mg/d,病情穩(wěn)定后,調(diào)整劑量為100～200 mg/d維持治療。

1.2.2 血清circNPHP4、miR-665水平檢測(cè) 采用RT-qPCR檢測(cè)血清circNPHP4、miR-665相對(duì)表達(dá)量。于患者入院24 h內(nèi)及對(duì)照組體檢當(dāng)日,采集空腹靜脈血5 ml,3 000 r/min離心(離心半徑10 cm),離心20 min后,收集血清,于-20℃保存?？俁NA提取試劑(R1030,北京普利萊)提取血清總RNA,cDNA第一鏈合成試劑盒(KGA1315,江蘇凱基)合成cDNA后,進(jìn)行RT-qPCR擴(kuò)增,引物購自金斯瑞生物科技有限公司,其中circNPHP4上游引物序列(5′-3′):GGACACATAGTGGAGAAAAG,下游引物序列(5′-3′):GGACACATAGTGGAGAAAAG;miR-665上游引物序列(5′-3′):ACCAGGAGGCTGAGGC,下游引物序列(5′-3′):GAACATGTCTGCGTATCTC;分別以GAPDH、U6為內(nèi)參,采用2-△△Ct法計(jì)算circNPHP4、miR-665相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 隨訪 對(duì)所有患者進(jìn)行隨訪,時(shí)間為6個(gè)月,記錄患者M(jìn)ACE發(fā)生情況,包括復(fù)發(fā)性心絞痛、心肌梗死、心搏驟停、嚴(yán)重心律失常等。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與CAD組一般資料比較 對(duì)照組與CAD組年齡、男性比例、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙史比例、高血壓比例、糖尿病比例、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CAD組高密度脂蛋白膽固醇水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 對(duì)照組與CAD組一般資料比較/例(百分率/%)

2.2 對(duì)照組與CAD組血清circNPHP4、miR-665表達(dá)水平比較 CAD組患者血清circNPHP4表達(dá)水平高于對(duì)照組,miR-665表達(dá)水平低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 對(duì)照組與CAD組血清circNPHP4、miR-665表達(dá)水平比較

2.3 不同冠狀動(dòng)脈病變程度患者血清circNPHP4、miR-665水平及Gensini評(píng)分比較 輕度組、中度組、重度組患者血清circNPHP4水平、血清miR-665水平、Gensini評(píng)分比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度患者血清circNPHP4、miR-665水平及Gensini評(píng)分比較

2.4 相關(guān)性分結(jié)果 CAD患者circNPHP4與miR-665呈負(fù)相關(guān)(r=-0.509,P<0.05),circNPHP4與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.528,P<0.05),miR-665與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.648,P<0.05)。見圖1。

圖1 相關(guān)性分結(jié)果(a.circNPHP4與miR-665相關(guān)性;b.circNPHP4與Gensini評(píng)分相關(guān)性;c.miR-665與Gensini評(píng)分相關(guān)性)

2.5 Logistic回歸分析 患者術(shù)后MACE發(fā)生率為22.11%(21/95)。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示,circNPHP4、Gensini評(píng)分是CAD患者發(fā)生MACE的危險(xiǎn)因素(P<0.05),miR-665是CAD患者發(fā)生MACE的保護(hù)因素(P<0.05)。見表4。

表4 Logistic回歸分析

3 討論

circRNA在心血管疾病的病理過程中發(fā)揮重要作用。有研究報(bào)道,circRNA與心肌梗死、心力衰竭、心肌炎、心臟發(fā)育等密切相關(guān),其參與CAD的病理過程,如調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬、細(xì)胞周期與衰老、血管生成及免疫調(diào)節(jié)等多個(gè)過程[9-10]。外周血中circRNA表達(dá)常作為心血管疾病病情與預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物,如circRNA-000864在急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者中表達(dá)水平升高,是STEMI患者經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)后發(fā)生MACE的影響因素[11]。本研究結(jié)果顯示,CAD組患者血清circNPHP4表達(dá)水平顯著升高,提示circNPHP4可能與CAD的發(fā)生有關(guān)。目前,有關(guān)circNPHP4的研究報(bào)道較少。circNPHP4為circRNA之一,在人表皮角化細(xì)胞和包皮成纖維細(xì)胞中可被檢測(cè)。有研究報(bào)道,CAD患者血漿中circNPHP4表達(dá)顯著上調(diào),與Syntax評(píng)分呈正相關(guān),對(duì)CAD具有良好的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)能力,其機(jī)制可能與circNPHP4調(diào)節(jié)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞粘附作用有關(guān)[12]。

miRNA可參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞自噬等過程,與CAD、AS、急性心肌梗死等心血管疾病發(fā)生有關(guān)[13]。miR-665可參與調(diào)控心肌纖維化、心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)與凋亡、腫瘤細(xì)胞遷移與侵襲等,其異常表達(dá)與多種疾病的發(fā)生相關(guān)[14-15]。有研究報(bào)道,miR-665在CAD中表達(dá)下調(diào),上調(diào)miR-665表達(dá)可靶向調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子β受體1表達(dá),抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖[16]。在氧-葡萄糖剝奪/復(fù)氧(OGD/R)誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞模型中,過表達(dá)miR-665可通過抑制生長抑制因子5表達(dá),促進(jìn)OGD/R誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖并抑制凋亡[17]。本研究結(jié)果顯示,CAD組患者血清miR-665表達(dá)水平低于對(duì)照組,提示miR-665水平變化與CAD發(fā)生有關(guān);隨著冠狀動(dòng)脈病變程度的升高,CAD患者血清circNPHP4表達(dá)水平逐漸升高,miR-665表達(dá)水平逐漸降低,提示CAD患者血清circNPHP4、miR-665水平變化與冠狀動(dòng)脈狹窄程度有關(guān);相關(guān)性分析結(jié)果顯示,CAD患者血清circNPHP4、miR-665表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān),提示circNPHP4可能靶向負(fù)調(diào)控miR-665表達(dá)參與CAD的進(jìn)展。AS的形成與血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMCs)增殖、凋亡有關(guān)。circRNA可通過海綿吸收miRNA表達(dá),參與調(diào)節(jié)VSMCs增殖。Wang等[18]研究報(bào)道,circARHGAP32通過調(diào)節(jié)miR-665/成纖維細(xì)胞生長因子2軸,促進(jìn)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移。由此推測(cè),circNPHP4可能通過調(diào)節(jié)miR-665表達(dá),調(diào)節(jié)VSMCs增殖,促進(jìn)AS形成,導(dǎo)致CAD發(fā)生。

Gensini積分可用于評(píng)估冠狀動(dòng)脈病變的嚴(yán)重程度,CAD患者Gensini評(píng)分顯著升高[19]。本研究結(jié)果顯示,CAD患者血清circNPHP4表達(dá)水平與Gensini評(píng)分呈正相關(guān),miR-665表達(dá)水平與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān),提示circNPHP4水平越高、miR-665水平越低,冠狀動(dòng)脈狹窄程度越嚴(yán)重,檢測(cè)circNPHP4、miR-665水平對(duì)判斷冠狀動(dòng)脈病變程度具有一定的參考價(jià)值;Logistic回歸分析顯示,circNPHP4是影響CAD患者發(fā)生MACE的危險(xiǎn)因素,miR-665是保護(hù)因素,提示檢測(cè)circNPHP4、miR-665水平可判斷患者預(yù)后,有利于對(duì)患者進(jìn)行危險(xiǎn)分層,對(duì)臨床治療具有一定的指導(dǎo)意義,但其臨床應(yīng)用仍需擴(kuò)大樣本量做進(jìn)一步研究。

綜上所述,CAD患者血清circNPHP4表達(dá)水平升高,miR-665表達(dá)水平降低。血清circNPHP4、miR-665水平與冠狀動(dòng)脈Gensini評(píng)分相關(guān),是CAD患者發(fā)生MACE的影響因素,可作為評(píng)估患者病情與預(yù)后的標(biāo)志物。