潘雪央 陸俊鍇 華建權(quán)

摘要：副溶血弧菌引起的急性肝胰腺壞死病是南美白對(duì)蝦的主要病害之一。通過(guò)在飼料中添加BT肽并進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)來(lái)探究BT肽是否能夠增強(qiáng)南美白對(duì)蝦的天然免疫力。結(jié)果表明，在飼料中添加BT肽可以顯著提高南美白對(duì)蝦對(duì)副溶血弧菌的抗病能力，但是免疫保護(hù)的持續(xù)時(shí)間稍顯不足，其原因有待進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞：南美白對(duì)蝦；BT肽；副溶血弧菌；免疫

中圖分類(lèi)號(hào)：S941??? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

經(jīng)過(guò)幾十年的發(fā)展，南美白對(duì)蝦（Litopenaeus vananmei）已經(jīng)成為我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的主導(dǎo)品種；但同時(shí)，疾病爆發(fā)、養(yǎng)殖環(huán)境惡化和種質(zhì)退化等問(wèn)題都嚴(yán)重困擾著該產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展，尤其是副溶血性弧菌引起的急性肝胰腺壞死病，每年都給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失，成為制約南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖發(fā)展的一個(gè)關(guān)鍵性因素。目前并無(wú)有效快速的方法防治對(duì)蝦疾病。

BT肽是土壤細(xì)菌Brevibacillus texasporus分泌的一種帶正電的含13個(gè)氨基酸殘基的非核糖體脂肽。體外試驗(yàn)表明，BT肽是天然免疫受體TLR2的特異配體，其可作為“標(biāo)志性微生物產(chǎn)物”（PAMP）被TLR2識(shí)別后激活Toll/TLRs天然免疫信號(hào)通道而增強(qiáng)天然免疫能力。飼料添加BT肽喂養(yǎng)雞，可以顯著的增加活性氧和一氧化氮的含量，并抑制雞大腸桿菌病、壞死性腸炎、沙門(mén)氏菌病等疾病的爆發(fā)。慈溪市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局金湯東高級(jí)工程師在對(duì)同為節(jié)肢動(dòng)物的昆蟲(chóng)蜜蜂的研究中發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)飼喂含BT肽飼料的10箱蜜蜂沒(méi)有爆發(fā)任何疾病，但飼喂不含BT肽的常規(guī)飼料的10箱蜜蜂中有3箱爆發(fā)了歐洲幼蟲(chóng)病。

目前，BT肽在水產(chǎn)動(dòng)物上的應(yīng)用還未有報(bào)道，如能對(duì)其在水產(chǎn)動(dòng)物疾病爆發(fā)的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，將可能極大地推動(dòng)水產(chǎn)動(dòng)物無(wú)抗養(yǎng)殖和疾病預(yù)防的發(fā)展。本試驗(yàn)?zāi)康氖窃谀厦腊讓?duì)蝦喂食含BT肽的飼料與常規(guī)飼料下，經(jīng)過(guò)副溶血性弧菌的攻毒，來(lái)證實(shí)BT肽是否對(duì)南美白對(duì)蝦的成活具有保護(hù)效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)在寧波市海洋與漁業(yè)研究院創(chuàng)新基地進(jìn)行；副溶血性弧菌由寧波市海洋與漁業(yè)研究院提供，菌株來(lái)源于寧波市域送檢的南美白對(duì)蝦樣本中提取且?guī)в卸玖蚋比苎曰【?；南美白?duì)蝦苗種由慈溪市傅金利水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)采購(gòu)且為其大田生產(chǎn)的同一批次，平均規(guī)格0.8厘米。飼料由強(qiáng)普公司生產(chǎn)，蛋白含量42%，不同階段投喂不同粒徑的飼料，分別是含96ppmBT肽的0#破碎、0#、1號(hào)破碎、1號(hào)料及不含BT肽的0#破碎、0#、1號(hào)破碎、1號(hào)料。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間

6月10日開(kāi)始至7月30日結(jié)束。

1.3 試驗(yàn)方法

取同一批次同規(guī)格的對(duì)蝦苗430尾，放置于6個(gè)活水箱（設(shè)3個(gè)實(shí)驗(yàn)并行組、3個(gè)對(duì)照組），每個(gè)活水箱容積約5m3，先暫養(yǎng)7天，淘汰部分因移植造成的折損（見(jiàn)表1）；對(duì)照組投喂普通飼料、實(shí)驗(yàn)組投喂BT肽添加飼料（普通飼料混合96 ppm BT肽加工而成），進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)；在各組飼料中加入活性副溶血弧菌（每kg飼料加入約6×109CFU），隨后分別投喂連續(xù)投喂七天，而后各組對(duì)蝦在相同條件下養(yǎng)殖50天；及時(shí)撈去死蝦，觀察并記錄各活水箱中對(duì)蝦的死亡情況及最后存活對(duì)蝦數(shù)量（見(jiàn)表2）。

2 試驗(yàn)結(jié)果

攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（如圖），副溶血弧菌侵染對(duì)蝦后，實(shí)驗(yàn)組的成活率顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦對(duì)副溶血弧菌的抗病能力比對(duì)照組強(qiáng)。

3 討論

副溶血性弧菌引起的肝胰腺壞死綜合癥是目前南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中影響最大、養(yǎng)殖戶(hù)的最為關(guān)心的問(wèn)題，如果能找到一個(gè)解決方案，必將給南美白對(duì)蝦生產(chǎn)帶來(lái)巨大的影響和利好。目前生產(chǎn)中，控制副溶血性弧菌的最常用的方法，一是改善養(yǎng)殖生產(chǎn)環(huán)境，二是飼料中添加乳酸菌類(lèi)微生態(tài)制劑，來(lái)抑制弧菌在腸道中的繁殖。

實(shí)驗(yàn)條件下BT肽對(duì)南美白對(duì)蝦主要疾病-副溶血性弧菌的攻毒試驗(yàn)，目的是為了了解BT肽對(duì)南美白對(duì)蝦主要疾病-副溶血性弧菌的抑制效果，也為大田試驗(yàn)打下理論上的基礎(chǔ)。試驗(yàn)表明，BT肽對(duì)副溶血弧菌侵染南美白對(duì)蝦后，其抗病能力顯著提高。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)也表明，攻毒前二天的對(duì)蝦死亡明顯高于攻毒后幾天；攻毒的保護(hù)率也顯不足；說(shuō)明單一的攻毒其效果有限，其原因需要進(jìn)一步進(jìn)行研究；使用方法需要進(jìn)一步完善。

另外，在系統(tǒng)改進(jìn)方面，沈美雄等［10］在鰻鱺自循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中，發(fā)現(xiàn)了一種水面雙路排污器，具體是通過(guò)攔魚(yú)孔板將排污器分為進(jìn)污區(qū)與排污區(qū)，進(jìn)污區(qū)共有通向養(yǎng)殖池底及養(yǎng)殖池水面的帶有池面污物收集臂板的兩路進(jìn)污通道，具備導(dǎo)流養(yǎng)殖池池底及池面污物至魚(yú)廁所，截留大顆粒雜物及病死鰻鱺的功能，值得借鑒和后期改進(jìn)。

本次試驗(yàn)在實(shí)施養(yǎng)殖過(guò)程中取得了一定的成效，但也不可避免的發(fā)現(xiàn)了一些問(wèn)題，以便在后期的循環(huán)水養(yǎng)殖中引起注意，少走彎路，減少損失，提高養(yǎng)殖產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益。建議如下：（1）水流推動(dòng)設(shè)備養(yǎng)殖前期每天1次，每次1～2個(gè)小時(shí)；中后期每天2～3次，每次1～2個(gè)小時(shí)。（2）糞污收集設(shè)備耗電較高，建議養(yǎng)殖前期每隔5～7天開(kāi)啟一次；后期每隔3～5天開(kāi)啟一次，以減輕用電消耗。（3）加州鱸發(fā)病較為頻繁，成活率略低，建議加強(qiáng)養(yǎng)殖期間的池塘消毒和魚(yú)病防治工作。（4）相比3種魚(yú)類(lèi)，湘云鯽抗逆性最強(qiáng)，成活率最高，值得優(yōu)先推廣。（5）減少非必要人員驚擾，為魚(yú)類(lèi)營(yíng)造安全的生長(zhǎng)與攝食環(huán)境。

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