王秀英

(臨沂市河?xùn)|區(qū)畜牧發(fā)展促進(jìn)中心，山東臨沂 276000）

新城疫(Infection with Newcastledisease virus，newcastle disease，ND)，俗稱“雞瘟”，是由新城疫病毒引起禽的一種急性、敗血性、高度接觸性傳染病。該病主要以高熱、呼吸困難、神經(jīng)紊亂、下痢、黏膜和漿膜出血為特征，具有較高的發(fā)病率和死亡率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一。新城疫一年四季均可發(fā)生，春秋季發(fā)病率相對較高，且感染不分日齡，各年齡段的雞均易感。該病傳播速度快，雞場內(nèi)一旦發(fā)生本病，可于4～5d 內(nèi)波及全群，嚴(yán)重威脅雞群健康，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。國家新城疫防治指導(dǎo)意見(2017—2020 年）規(guī)定，各地要繼續(xù)對雞實施全面免疫，根據(jù)當(dāng)?shù)貙嶋H和監(jiān)測情況對其他家禽開展免疫，及時制定實施新城疫免疫方案，做好免疫效果評價。

1 材料與方法

1.1 實驗樣品

2020—2022 年從河?xùn)|區(qū)各街道鄉(xiāng)鎮(zhèn)(芝麻墩街道、梅家埠街道、相公街道、太平街道、湯頭街道、鳳凰嶺街道、朝陽街道、八湖鎮(zhèn)、湯河鎮(zhèn)、鄭旺鎮(zhèn)）等縣區(qū)采集樣品中，選取采樣記錄完整、分類清楚的樣品，共計2135 份。樣品采集方法是采用雞翅下靜脈采血，室溫靜置自然凝固后，再經(jīng)1800r/min 離心5～8min，分離血清得到。

1.2 實驗儀器

恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、高壓滅菌器、超純水機(jī)、燒杯、量筒、玻璃棒、96 孔血凝板、冰箱、離心機(jī)、微量振蕩器、微量移液器 (20～100μL）、8 道微量移液器(20～100μL）、微量吸頭(200μL、1mL）、一次性注射器、一次性手套、加液槽等。

1.3 實驗用試劑的配制備

PBS 緩沖液的配制：稱取NaCl 8g、Na2HPO43.582g、NaH2PO41.561g，加超純水定容至1000mL，然后調(diào)節(jié)pH 值至7.2，備用。

1%雞紅細(xì)胞懸液的制備：無菌取3.8%的枸櫞酸鈉溶液，從非免疫雞翅下靜脈無菌采血，然后用適量的PBS 緩沖液稀釋后以3000r/min 離心5～10min，棄去上清液，按上述方法重復(fù)洗滌三次，然后用PBS 緩沖液配制成1%的紅細(xì)胞懸液，備用[1]。1%紅細(xì)胞制備好后，置于2～8℃冰箱保存，使用時充分混勻。

雞新城疫血凝抑制試驗抗原：抗原規(guī)格為2.0mL/瓶，試驗時將使用劑量的抗原無菌吸出現(xiàn)配現(xiàn)用，使用抗原專用稀釋液稀釋，剩余抗原放回冰箱保存。

1.4 實驗方法

1.4.1 檢驗依據(jù)

按照農(nóng)業(yè)部《新城疫診斷技術(shù)規(guī)范》 (GB/T 16550-2020）所規(guī)定方法進(jìn)行[2]。

1.4.2 檢測方法

血凝(HA）試驗：在96 孔V 型微量反應(yīng)板中，每孔加入25μL PBS 緩沖液，為了準(zhǔn)確起見，做兩排重復(fù)孔。第1 孔加入25μL 配制好的抗原，依次做25μL 倍比稀釋至第11 孔棄去(如此抗原的稀釋倍數(shù)分別為21、22、23……211），第12 孔不加抗原為紅細(xì)胞對照；每孔依次加入25μL PBS 緩沖液；然后每孔加入25 μL 1% (V/V）雞紅細(xì)胞懸液，微量振蕩1min 混合均勻，室溫下靜置30min，觀察記錄結(jié)果。

結(jié)果判斷方法，將96 孔板傾斜45° 觀察，觀察到沿著傾斜面向下呈線狀流動的為紅細(xì)胞沉淀，表示紅細(xì)胞未被病毒凝集或者未完全被病毒凝集；如果傾斜后紅細(xì)胞不流動，平鋪在孔底凝成均勻薄層，說明紅細(xì)胞被病毒凝集，做好試驗結(jié)果記錄。

血凝試驗：首先配制4 單位抗原，4 單位抗原即一個血凝單位的稀釋度的4 倍濃度。以能完全凝集的抗原最高稀釋倍數(shù)作為終點，該倍數(shù)除以4 即為含有4 單位的抗原稀釋倍數(shù)。按該倍數(shù)用抗原專用稀釋液稀釋，抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。

對抗原每孔加入25 μL PBS 緩沖液：第1 孔加入25 μL 血清，再反應(yīng)板中將血清作橫向倍比稀釋至第10 孔(如此血清的稀釋倍數(shù)分別為21、22、23……210），第11 孔與12 孔空白；第1～10孔分和12 孔別加入25 μL 的4 單位抗原，11 孔不加作為紅細(xì)胞沉淀對照孔；混勻后室溫下靜置20min；每孔加入25 μL 1% (V/V）雞紅細(xì)胞懸液，混勻后室溫下靜置30min。當(dāng)對照組的紅細(xì)胞出現(xiàn)較為明顯形狀時即可進(jìn)行結(jié)果判斷。

1.4.3 試驗結(jié)果判定

能夠使4 單位抗原凝集雞紅細(xì)胞的作用完全被抑制的血清最高稀釋倍數(shù)，稱為該血清的抗體效價，以2 的指數(shù)表示。第11 孔不含抗原，為紅細(xì)胞對照，第12 孔不含血清為抗原對照。結(jié)果判定，第11 孔紅細(xì)胞對照孔全部沉降，第12孔抗原對照孔全部凝集，該試驗成立。被檢雞血清HI 效價≤1∶4 判為陰性；血凝≥1∶16 時判為陽性，抗體合格；血凝=1∶8 時，認(rèn)為可疑，需要重檢一次。

2 結(jié)果與分析

河?xùn)|區(qū)2020—2022 年新城疫免疫抗體檢測結(jié)果顯示，2020—2022 年合格率分別為88.71%、91.04%、94.99%，平均合格率為91.66% (見表1）。其中2020 年最低為88.71%，但也超過了國家農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)。分析上述數(shù)據(jù)可見，通過每年春秋兩次全面免疫，河?xùn)|區(qū)新城疫抗體趨于穩(wěn)定，合格率超出了國家標(biāo)準(zhǔn)，總體來說免疫效果可以，并有逐年升高的趨勢。

表1 2020—2022 年河?xùn)|區(qū)新城疫免疫抗體合格率

2020—2022 年春、秋季節(jié)的血清樣品進(jìn)行檢測對比，其中春季樣品786 份，秋季樣品922份，共計1708 份。由表1 可知，從2020—2022年春季抗體合格率分別為92.07%、92.30%、95.97%，平均合格率為93.51%。由表1 可知，秋季抗體合格率分別為89.54%、90.74%、92.84%，平均合格率為91.11%。分析以上數(shù)據(jù)可知，被檢春季和秋季樣品數(shù)量不同，合格數(shù)也有差別，但是雞群春季免疫抗體平均合格率差異不明顯，均達(dá)到了90%以上的水平，春季略高于秋季。

2020—2022 年共采集血清樣品2135 份，涉及規(guī)模場12 個，樣品數(shù)為1537 份，散養(yǎng)戶23戶，樣品數(shù)為598 份。由表1 可知，規(guī)模場新城疫免疫抗體合格率為95.71%，散養(yǎng)戶抗體合格率較低為81.27%，規(guī)模場和散養(yǎng)場平均抗體合格率為91.66%。散養(yǎng)戶合格率相對規(guī)模場較低，平均合格率低14.5%。由此可見，規(guī)模場對新城疫的免疫足夠重視，免疫效果較好，散養(yǎng)戶需要規(guī)范新城疫免疫程序，加強免疫，進(jìn)一步提高雞群對新城疫病毒的抵抗能力，避免疾病的暴發(fā)。

由表1 可知，2020—2022 年種雞場抗體合格率處于較高的水平，分別為98.10%、98.89%、99.24%，平均合格率為98.78%。由此可見，河?xùn)|區(qū)種雞場新城疫免疫抗體處于較高的水平，基本做到了免疫無疫。

3 討論

通過分析檢測數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，雖然各養(yǎng)殖場、各散養(yǎng)戶經(jīng)過新城疫疫苗免疫，雖然雞群的抗體合格率處于較高水平，但仍然存在少量抗體較低的個體，從而導(dǎo)致免疫失敗的現(xiàn)象發(fā)生，這也增加了新城疫暴發(fā)的風(fēng)險。分析原因可能由以下幾種：第一，雛雞的母源抗體的影響，由于種雞的免疫抗體水平存在個體差異，從而新孵出的雛雞的母源抗體水平也有高有低。母源抗體高的雛雞進(jìn)行新城疫首免時，會被母源抗體中和掉，不能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。母源抗體低的雛雞，又按照常規(guī)來進(jìn)行首免，那么在收到強度侵入時，可能導(dǎo)致新城疫疫情的發(fā)生[3,4]。第二，疫苗保存和運輸存在問題。有的防疫員在預(yù)防注射的過程中無冷藏設(shè)備，部分養(yǎng)殖戶沒有按要求注射，造成疫苗效價降低或者失效。另外可能免疫接種時，注射劑量不足，免疫密度偏低，或不按免疫程序免疫，都會造成免疫失敗[5]。第三，免疫抑制問題，雞場中非傳染性因素和傳染性因素(一些免疫抑制病的影響如：雞傳染性法氏囊病、雞馬立克氏病、雞傳染性貧血、禽白血病以及網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞增殖癥等）都會對新城疫的免疫形成免疫抑制。另外應(yīng)激因素、日糧中缺乏某種維生素，飼料中霉菌毒素含量高等多種因素也可導(dǎo)致免疫抑制[6]。

此外，從業(yè)者的飼養(yǎng)管理水平、飼養(yǎng)密度、衛(wèi)生條件、消毒頻次及飼料的質(zhì)量等都會影響雞群的健康以及機(jī)體的免疫功能，從而造成機(jī)體的抗體水平和抗體持續(xù)時間不均勻。當(dāng)新城疫病毒侵襲時，一般抗體水平低的雞會先發(fā)病，隨后在較短時間內(nèi)傳播給其他雞群。

4 改進(jìn)措施

目前評價新城疫疫苗免疫效果的重要依據(jù)仍然是抗體水平的監(jiān)測，抗體滴度是指導(dǎo)疫病防治工作的重要指標(biāo)。結(jié)合本次調(diào)查分析結(jié)果，河?xùn)|區(qū)養(yǎng)雞業(yè)新城疫的防控應(yīng)該采取以下措施：首先提高從業(yè)者的綜合素質(zhì)以及對新城疫病毒的深入了解，讓廣大養(yǎng)殖場戶深刻的認(rèn)識到新城疫病毒防控的緊迫性及持續(xù)做好流行病學(xué)調(diào)查與抗體水平監(jiān)測等工作的重要性。提高養(yǎng)殖場的應(yīng)急處置能力，從而把風(fēng)險和損失降至最低。其次，要制定科學(xué)規(guī)范的免疫程序，根據(jù)抗體水平監(jiān)測結(jié)果及時更新和調(diào)整相應(yīng)的免疫程序，盡可能提高疫苗的免疫效果。最后，加強飼養(yǎng)管理，飼料補給方面，以滿足長勢營養(yǎng)需求為主，注意補充硒元素和各種維生素，確保不同階段的雞的營養(yǎng)需求。同時要注意飼養(yǎng)環(huán)境的管理，加強通風(fēng)管理，確保舍內(nèi)空氣清潔衛(wèi)生，注意防控各類不良應(yīng)急，可嘗試用電解多維等，達(dá)到抗應(yīng)激的目的[7]。另外，規(guī)模雞場盡量做到全進(jìn)全出，對于雞場新城疫防控來說也是一項十分有效的舉措。

5 小結(jié)

通過對2020—2022 年河?xùn)|區(qū)雞新城疫免疫抗體合格率、不同高發(fā)季節(jié)抗體合格率、規(guī)模場和散養(yǎng)戶以及種雞場的免疫抗體水平監(jiān)測及分析來看，養(yǎng)雞場戶經(jīng)過每年春秋兩次新城疫的全面免疫，免疫抗體合格率雖有高有低，但基本處于較高水平，超過了國家農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%以上的標(biāo)準(zhǔn)[8]。另外從規(guī)模場和散養(yǎng)戶的對比數(shù)據(jù)來看，規(guī)模場抗體合格率高出散養(yǎng)場14.5%，可見規(guī)模場免疫工作做得更加細(xì)致到位，散養(yǎng)戶雖然養(yǎng)殖條件方面相對差，但也應(yīng)該強化思想認(rèn)識，做到規(guī)范免疫，盡量提高抗風(fēng)險能力。從河?xùn)|區(qū)種雞場抗體合格率來看三年來穩(wěn)定在98%以上，基本做到了免疫無疫。