袁勝男，張新莊，劉 婧，范小雪，曹 亮，王振中，肖 偉,

杏貝止咳顆粒對(duì)豚鼠感染后咳嗽的治療作用

袁勝男1，張新莊2，劉 婧2，范小雪2，曹 亮2，王振中2，肖 偉1, 2*

1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210023 2. 江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001

探討杏貝止咳顆粒對(duì)豚鼠感染后咳嗽（post-infectious cough，PIC）的治療作用。除對(duì)照組外，將3～4周齡SPF級(jí)雄性Hartley豚鼠采用鼻滴脂多糖、煙熏、辣椒素霧化激發(fā)來(lái)構(gòu)建PIC豚鼠模型。造模成功后分為模型組及杏貝止咳顆粒低、中、高劑量（0.93、1.86、3.72 g/kg）組、阿斯美（21.62 mg/kg）組和蘇黃止咳膠囊（313.88 mg/kg）組，末次給藥后24 h，通過(guò)辣椒素霧化誘咳測(cè)定咳嗽次數(shù)及潛伏期，采用ELISA法檢測(cè)血清、肺泡灌洗液和肺組織中P物質(zhì)（substance P，SP）、降鈣素相關(guān)基因肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）、神經(jīng)肽A（neurokinin A，NKA）、神經(jīng)肽B（neurokinin B，NKB）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nerve growth factor，NGF）、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）和緩激肽（bradykinin，BK）含量，血液分析儀測(cè)定肺泡灌洗液中白細(xì)胞分類，并用蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察肺組織病理變化。與對(duì)照組比較，模型組豚鼠體質(zhì)量上升緩慢，咳嗽次數(shù)明顯增多（＜0.001），咳嗽潛伏期明顯縮短（＜0.001），中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞占比顯著升高（＜0.01、0.001），血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK含量均顯著增高（＜0.05、0.01、0.001），肺組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。與模型組比較，杏貝止咳顆粒能夠改善PIC豚鼠體質(zhì)量增加緩慢趨勢(shì)，顯著減少咳嗽次數(shù)（＜0.001），延長(zhǎng)咳嗽潛伏期（＜0.001），顯著降低白細(xì)胞中嗜酸性細(xì)胞和中性粒細(xì)胞比例（＜0.01、0.001），顯著降低豚鼠血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK含量（＜0.05、0.01、0.001），改善肺組織病理變化。杏貝止咳顆粒對(duì)PIC豚鼠具有治療作用。

感染后咳嗽；豚鼠；杏貝止咳顆粒；咳嗽敏感性；神經(jīng)源性炎癥

感染后咳嗽（post-infectious cough，PIC）又稱感冒后咳嗽，患者遭受急性上呼吸道感染后，感染本身癥狀消失，胸部X線檢查正常，而咳嗽仍然遷延不愈，持續(xù)時(shí)間3周以上[1]。臨床上，11%～40%慢性咳嗽屬PIC[2-3]，造成PIC的誘因有空氣污染、受寒、過(guò)度疲勞后病毒或細(xì)菌感染、物理化學(xué)刺激或年老防御功能退化等多種因素。目前，PIC病機(jī)尚不十分明確，但大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，患者感染病原體后，呼吸道上皮損傷，氣道的屏障作用減弱，使得支氣管及肺部咳嗽敏感器暴露，被氣道炎癥激活產(chǎn)生咳嗽反射，同時(shí)產(chǎn)生神經(jīng)源性炎癥，使得氣道處于高反應(yīng)狀態(tài)，咳嗽反射的敏感性（cough reflex sensitivity，CRS）增加，致使PIC發(fā)生[4-5]。

多年臨床應(yīng)用資料分析顯示杏貝止咳顆粒對(duì)PIC患者有較好的療效，前期研究也證實(shí)，源自臨床驗(yàn)方的杏貝止咳顆粒，可延長(zhǎng)咳嗽模型動(dòng)物的咳嗽潛伏期，降低咳嗽次數(shù)，增加小鼠氣道酚紅排出量和豚鼠氣道排痰量，降低炎癥模型動(dòng)物的耳腫脹和足趾腫脹，改善細(xì)菌感染小鼠死亡率。但杏貝止咳顆粒對(duì)PIC的療效和作用機(jī)制尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。故本研究采用脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）致PIC的造模方法[6]，模擬PIC的病理表現(xiàn)，觀察杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠的生物效應(yīng)，并初步探討其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論支撐。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性Hartley豚鼠105只，3～4周齡，體質(zhì)量220～250 g，購(gòu)自青島康大愛(ài)博生物科技有限公司，合格證號(hào)No.370823221100097572，許可證號(hào)SCXK（魯）2021-0003，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理批準(zhǔn)號(hào)2022080501。動(dòng)物飼養(yǎng)于江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司屏障環(huán)境下，室溫（22±2）℃，相對(duì)濕度50%～60%。

1.2 藥品與試劑

杏貝止咳顆粒（批號(hào)200405）由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司提供；阿斯美（批號(hào)SY141AA）購(gòu)自第一三共制藥（上海）有限公司；蘇黃止咳膠囊（批號(hào)21011811）購(gòu)自揚(yáng)子江集團(tuán)有限公司；LPS（批號(hào)0000114327）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；辣椒素（批號(hào)1018I021）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；南京香煙（焦油量、煙氣煙堿量、煙氣一氧化碳量分別為11、1.1、11 mg）購(gòu)自江蘇中煙工業(yè)有限責(zé)任公司；舒泰50（批號(hào)BN8G4VA）購(gòu)自法國(guó)維克有限公司；鹽酸賽拉嗪注射液（批號(hào)20210102）購(gòu)自長(zhǎng)沙拜特生物科技研究所有限公司；P物質(zhì)（substance P，SP）、降鈣素相關(guān)基因肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）、神經(jīng)肽A（neurokinin A，NKA）、神經(jīng)肽B（neurokinin B，NKB）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nerve growth factor，NGF）、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）和緩激肽（bradykinin，BK）ELISA試劑盒（貨號(hào)分別為DG40023G、DG40040G、DG40027G、DG40028G、DG96320Q、DG96307Q、DG96300Q，批號(hào)均為202208）購(gòu)自北京冬歌博業(yè)生物科技有限公司。

1.3 儀器

自制煙箱（1 m×1 m×0.5 m）；YLS-8A型多功能誘咳引喘儀（上海欣軟信息科技有限責(zé)任公司）；FCI-280型電熱恒溫培養(yǎng)箱（日本ASONE公司）；BY-R20型醫(yī)用離心機(jī)（北京白洋醫(yī)療器械有限公司）；EnSpire-23001437型酶標(biāo)儀（美國(guó)PerkinElmer公司）。

2 方法

2.1 給藥劑量設(shè)計(jì)

杏貝止咳顆粒臨床用量為1次1袋，1袋4 g，3次/d。本研究采用4周齡雄性豚鼠，體質(zhì)量以300 g計(jì)，參照第3版《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》及相關(guān)文獻(xiàn)，按體表面積等效劑量法計(jì)算豚鼠等效劑量為930 mg/kg，按照1、2、4倍設(shè)定藥物低、中、高劑量組，分別為930、1860、3720 mg/kg。阿斯美按等效劑量系數(shù)折算法計(jì)算豚鼠等效劑量為21.62 mg/kg，蘇黃止咳膠囊按等效劑量系數(shù)折算法計(jì)算豚鼠等效劑量為313.88 mg/kg。

2.2 動(dòng)物分組、模型制備與給藥

105只SPF級(jí)雄性Hartley豚鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，除空白組15只外，剩余90只豚鼠置于自制煙箱中，用8支香煙和50 g鋸末制造煙霧，熏煙30 min，1次/d，連續(xù)10 d，自由進(jìn)食飲水。之后分別在第11、14、17天以舒泰50麻醉，滴鼻0.4 mg/mL LPS溶液（1 μL/g），在第12、13、15、16、18天，將豚鼠置于誘咳引喘儀中，以1×10?4mol/L辣椒素溶液霧化吸入激發(fā)3 min，每日觀察各組豚鼠狀態(tài)。模型制備成功后根據(jù)咳嗽次數(shù)隨機(jī)分組，將豚鼠分為對(duì)照組、模型組及杏貝止咳顆粒低、中、高劑量（930、1860、3720 mg/kg）組和阿斯美（21.62 mg/kg）組、蘇黃止咳膠囊（313.88 mg/kg）組，每組15只。于第19天開始給藥，各給藥組ig相應(yīng)藥物（10 mL/kg），對(duì)照組和模型組ig等體積生理鹽水，1次/d，連續(xù)7 d。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.3.1 體質(zhì)量 每日稱定豚鼠體質(zhì)量，計(jì)算體質(zhì)量變化率。

體質(zhì)量變化率＝(給藥期體質(zhì)量－第1天體質(zhì)量)/第1天體質(zhì)量

2.3.2 咳嗽敏感性 于末次給藥24 h后，把豚鼠放入多功能誘咳引喘儀的密閉鐘罩內(nèi)，使用辣椒素溶液霧化吸入3 min，從儀器判斷的第一聲響亮咳聲開始，記錄首次咳嗽時(shí)間和8 min內(nèi)咳嗽次數(shù)（包含霧化吸入3 min內(nèi)人工記錄的咳嗽次數(shù)）。

2.3.3 血清中細(xì)胞因子檢測(cè) 咳嗽次數(shù)測(cè)定后，im舒泰50（20 mg/kg）和ip鹽酸賽拉嗪注射液（2 mg/kg）麻醉后，仰臥位固定豚鼠，剪開腹部皮膚，分離腹主動(dòng)脈采血，冰上靜置30 min，3000 r/min離心15 min，收集血清，?80 ℃保存?zhèn)溆?。按照ELISA試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)SP、CGRP、NKA、NKB、BK、PGE2和NGF含量。

2.3.4 肺泡灌洗液中細(xì)胞因子檢測(cè)及細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 采血后，打開胸腔，于豚鼠劍突上5 mm處采用倒“T”字形切口剪開皮膚，上至下顎，左右至腋下，分離皮下結(jié)締組織和肌肉，暴露氣管；分離氣管兩側(cè)及氣管與食管間結(jié)締組織，游離氣管。止血鉗夾住右側(cè)肺支氣管，將灌流針緩緩刺入氣管，針尖不超過(guò)胸鎖關(guān)節(jié)，緩緩抽出針芯并保持灌流軟膠管不動(dòng)，用生理鹽水沖洗支氣管肺泡3次（體積分別為2、1、1 mL），合并肺泡灌洗液，4 ℃、1500 r/min離心10 min，收集上清分裝，?80 ℃保存?zhèn)溆?，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)SP、CGRP、NKA、NKB、BK、PGE2和NGF含量；收集細(xì)胞沉淀，生理鹽水重懸后進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

2.3.5 肺組織中細(xì)胞因子檢測(cè) 取右肺上葉，生理鹽水沖洗，取100 mg新鮮右肺上葉組織，加900 μL PBS和蛋白酶抑制劑，冰上充分研磨，5000×離心10 min，取上清，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)SP、CGRP、NKA、NKB、BK、PGE2和NGF含量。

2.3.6 蘇木素-伊紅（HE）染色觀察肺和支氣管組織病理變化 肺和和支氣管組織經(jīng)4%多聚甲醛固定后，常規(guī)石蠟包埋，切片厚4 μm，進(jìn)行HE染色，由病理專業(yè)人員閱片。選取同一份樣本HE切片的2個(gè)視野，采用光學(xué)顯微鏡分別觀察肺和支氣管組織病理學(xué)改變，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1、2。

表1 肺組織評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[7-8]

Table 1 Criteria for lung tissue scoring[7-8]

評(píng)分肺泡間隔增厚炎性細(xì)胞浸潤(rùn)支氣管痙攣 0單層細(xì)胞，無(wú)增厚，肺泡完整正常，無(wú)或偶見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)正常，未見(jiàn)管腔狹窄 1輕度增厚，正常厚度的1～3倍，偶可見(jiàn)肺泡壁斷裂損傷輕度，散在浸潤(rùn)輕度，散見(jiàn)，多數(shù)管腔大小正常 2中度增厚，正常厚度的3～5倍，肺泡壁斷裂有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)中度，鏡下均可見(jiàn)痙攣，管腔狹窄 3重度，正常厚度的5倍以上，肺泡壁斷裂損傷，肺泡結(jié)構(gòu)仍可見(jiàn)重度，大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)重度，嚴(yán)重痙攣，管腔嚴(yán)重狹窄

表2 支氣管評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[7-8]

Table 2 Criteria for bronchial scoring[7-8]

評(píng)分黏膜上皮腫脹和細(xì)胞脫落杯狀細(xì)胞增多炎性浸潤(rùn) 0正常，絨毛排列整齊正常，未見(jiàn)杯狀細(xì)胞增多正常，無(wú)或偶見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn) 1黏膜上皮輕度水腫，偶見(jiàn)上皮細(xì)胞脫落輕度，散見(jiàn)，多數(shù)管腔大小正常輕度，散在浸潤(rùn)，偶見(jiàn)聚集成團(tuán) 2黏膜上皮中度水腫，部分脫落，露出固有膜中度，黏液腺增生，支氣管微微擴(kuò)張中度，聚集成團(tuán)，但尚未見(jiàn)侵及支氣管黏膜下層 3黏膜上皮重度水腫，成片脫落，固有膜破壞重度，黏液腺增生，支氣管擴(kuò)張重度，大量成團(tuán)，侵及支氣管黏膜下層甚至黏膜層

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠體質(zhì)量的影響

整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，杏貝止咳顆粒低、中劑量組豚鼠分別死亡1只和2只，阿斯美組豚鼠死亡1只。造模和給藥期間對(duì)豚鼠體質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，如圖1所示，模型組豚鼠體質(zhì)量增加緩慢，給予杏貝止咳顆粒后，杏貝止咳顆粒各劑量組PIC豚鼠體質(zhì)量增加，其中以高劑量組最為明顯，與陽(yáng)性對(duì)照藥蘇黃止咳膠囊基本一致。

圖1 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠體質(zhì)量的影響

3.2 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠咳嗽敏感性的影響

如表3所示，與對(duì)照組比較，模型組豚鼠咳嗽次數(shù)顯著增多（＜0.001），咳嗽潛伏期顯著縮短（＜0.001）；與模型組比較，杏貝止咳顆粒各劑量組豚鼠咳嗽次數(shù)和延長(zhǎng)咳嗽潛伏期顯著減少（＜0.001），且呈劑量相關(guān)性，高劑量組藥效與陽(yáng)性藥阿斯美基本一致。

表3 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)的影響()

與對(duì)照組比較：##＜0.01###＜0.001；與模型組比較：*＜0.05**＜0.01***＜0.001，下表同

##< 0.01###< 0.001control group;*< 0.05**< 0.01***< 0.001model group, same as below tables

3.3 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠血清和肺泡灌洗液中細(xì)胞因子水平的影響

如圖2所示，與對(duì)照組比較，模型組血清中SP、CGRP、NKA、NKB、PGE2、BK、NGF水平均顯著升高（＜0.05、0.001）；與模型組比較，各給藥組血清中CGRP、NKA、NKB、PGE2、NGF水平均顯著降低（＜0.01、0.001），杏貝止咳顆粒各劑量組SP水平均顯著降低（＜0.05、0.001）。

如圖3所示，與對(duì)照組比較，模型組肺泡灌洗液中CGRP、NKA、NKB、PGE2和NGF水平顯著升高（＜0.05、0.001）；與模型組比較，各給藥組肺泡灌洗液中CGRP、NKB水平均顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），杏貝止咳顆粒低、高劑量組及阿斯美組和蘇黃止咳膠囊組NKA、PGE2水平均顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），杏貝止咳顆粒低、中劑量組和蘇黃止咳膠囊組NGF水平均顯著降低（＜0.001），杏貝止咳顆粒高劑量組和蘇黃止咳膠囊組BK水平均顯著降低（＜0.05）。

3.4 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠肺泡灌洗液白細(xì)胞分類的影響

如表4所示，與對(duì)照組比較，模型組白細(xì)胞總數(shù)、嗜堿性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞占比無(wú)顯著差異，中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞占比顯著升高（＜0.01、0.001），淋巴細(xì)胞占比顯著降低（＜0.001）；與模型組比較，各給藥組中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞占比顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），淋巴細(xì)胞占比顯著升高（＜0.01、0.001）。

A-對(duì)照組 B-模型組 C-杏貝止咳顆粒低劑量組 D-杏貝止咳顆粒中劑量組 E-杏貝止咳顆粒高劑量組 F-阿斯美組 G-蘇黃止咳膠囊 與對(duì)照組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001，圖3、4同

圖3 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞因子水平的影響(, n = 6)

表4 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠肺泡灌洗液白細(xì)胞分類的影響(, n = 6)

3.5 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠肺組織中細(xì)胞因子水平的影響

如圖4所示，與對(duì)照組比較，模型組肺組織中NGF、BK、NKB、PGE2、SP、CGRP和NKA水平均顯著升高（＜0.01、0.001）；與模型組比較，各給藥組NKB、PGE2水平均顯著降低（＜0.05、0.01、0.001），杏貝止咳顆粒各劑量組和阿斯美組NGF、SP和NKA水平均顯著降低（＜0.01、0.001），杏貝止咳顆粒低、中劑量組和阿斯美組BK水平均顯著降低（＜0.01、0.001）。

3.6 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠肺組織病理及評(píng)分的影響

如圖5所示，與對(duì)照組比較，模型組肺泡間隔為正常厚度的5倍以上，肺泡壁斷裂損傷，肺泡結(jié)構(gòu)仍可見(jiàn)；大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；支氣管嚴(yán)重痙攣，管腔嚴(yán)重狹窄；黏膜上皮重度水腫，成片脫落，固有膜破壞；炎性細(xì)胞大量成團(tuán)，侵及支氣管黏膜下層甚至黏膜層。與模型組比較，各給藥組肺泡間隔輕度增厚，為正常厚度的1～3倍，偶可見(jiàn)肺泡壁斷裂損傷；炎性細(xì)胞散在浸潤(rùn)；支氣管可見(jiàn)痙攣，管腔狹窄；黏膜上皮輕度水腫，偶見(jiàn)上皮細(xì)胞脫落；炎性細(xì)胞散在浸潤(rùn)。評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表5，對(duì)照組豚鼠肺和支氣管組織病理學(xué)檢查有輕微病變，與對(duì)照組比較，模型組豚鼠肺和支氣管組織病理評(píng)分均顯著升高（＜0.01、0.001）；與模型組比較，杏貝止咳顆粒高劑量組和阿斯美組肺組織評(píng)分均顯著降低（＜0.05），杏貝止咳顆粒各劑量組和阿斯美組支氣管組織評(píng)分顯著降低（＜0.05、0.01、0.001）。

圖4 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠肺組織中細(xì)胞因子水平的影響(, n = 6)

紅色箭頭表示肺泡間隔增厚，藍(lán)色箭頭表示炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黃色箭頭表示上皮細(xì)胞脫落，黑色箭頭表示管腔狹窄

表5 杏貝止咳顆粒對(duì)PIC模型豚鼠肺和支氣管組織病理學(xué)評(píng)分的影響

4 討論

氣道神經(jīng)源性炎癥所致的高CRS是PIC發(fā)病關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，受到病毒、細(xì)菌和辣椒素等刺激后，氣道C類神經(jīng)纖維上的瞬時(shí)受體電位類香草酸受體亞型1（transient receptor potential vanillic 1，TRPV1）被激活，一方面使陽(yáng)離子向胞內(nèi)流動(dòng)，興奮神經(jīng)細(xì)胞，產(chǎn)生動(dòng)作電位，引起咳嗽反射[9]；另一方面，使大量Ca2+內(nèi)流，引起神經(jīng)末梢突觸內(nèi)SP、CGRP、NKA、NKB等神經(jīng)肽大量釋放[10]，與氣道平滑肌、血管平滑肌、炎癥細(xì)胞、黏液腺體等效應(yīng)細(xì)胞作用釋放組胺、緩激肽、前列腺素、白三烯以及白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis-α，TNF-α）等炎癥介質(zhì)，產(chǎn)生神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)（主要表現(xiàn)為血漿蛋白外滲、支氣管平滑肌收縮痙攣和黏液分泌增多），降低咳嗽閾值，導(dǎo)致氣道高反應(yīng)，進(jìn)而增高CRS[11]。

在氣道炎癥釋放的細(xì)胞因子中，前列腺素F2α（prostaglandin F2α，PGF2α）與EP3結(jié)合后，激活蛋白激酶A（protein kinase A，PKA）與鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶II（calcium/CaM-dependent protein kinase II，CaMKII）作用對(duì)抗鈣調(diào)素引起的TRPV1脫敏[12]；BK與BK2受體結(jié)合，激活磷脂酶C（phospholipase C，PLC），產(chǎn)生三磷酸肌醇（inositol-1,4,5-trisphosphate，IP3）和二?；视停╠iacylglycerol，DAG），其中IP3作用胞內(nèi)鈣庫(kù)，激活CaMKII抑制TRPV1脫敏，DAG激活蛋白激酶A（protein kinase C，PKC）磷酸化TRPV1，增強(qiáng)TRPV1受體敏感性[13-14]；NGF可增加神經(jīng)元細(xì)胞膜上離子通道數(shù)量降低TRPV1激活閾值，同時(shí)也可激活PLC/PKC通路增加TRPV1受體敏感性，提示氣道炎癥的細(xì)胞因子通過(guò)影響TRPV1受體敏感性[15]，使得CRS快速動(dòng)態(tài)變化。

臨床上目前多采用H1受體拮抗劑、白三烯受體拮抗劑、糖皮質(zhì)激素等抗炎藥和止咳藥來(lái)治療PIC，但這些治療大多都是急性期咳嗽用藥，效果并不理想，且停藥后多有反復(fù)[16]。中醫(yī)藥更強(qiáng)調(diào)多組分、多環(huán)節(jié)整體治療[17]，中醫(yī)認(rèn)為PIC系風(fēng)邪犯肺、肺氣失宣所致，治療宜疏風(fēng)宣肺、止咳利咽。源自臨床國(guó)醫(yī)大師周仲瑛經(jīng)驗(yàn)方——杏貝止咳顆粒由麻黃（蜜炙）、苦杏仁、桔梗、前胡、浙貝母、百部、北沙參、木蝴蝶、甘草9味中藥配伍而成，具有清宣肺氣、止咳化痰之功效，用于外感咳嗽屬表寒里熱證，癥見(jiàn)微惡寒、發(fā)熱、咳嗽、咯痰、痰稠質(zhì)黏、口干苦、煩躁等外感咳嗽的表寒里熱證[18]。

基于杏貝止咳顆粒顯著的止咳化痰作用，推測(cè)其可能成為治療PIC的一種替代方案。為了驗(yàn)證杏貝對(duì)PIC的治療作用，建立LPS致PIC豚鼠模型，觀察杏貝對(duì)PIC豚鼠咳嗽的影響。發(fā)現(xiàn)杏貝止咳顆粒能夠顯著降低PIC豚鼠的咳嗽次數(shù)，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，療效與阿斯美、蘇黃止咳膠囊相似，且具有顆粒劑口服利用度高于膠囊劑、配伍組成無(wú)動(dòng)物藥而患者更易接受和療程較短的特點(diǎn)。結(jié)果表明，杏貝止咳顆?？梢杂行p輕和延緩PIC的咳嗽癥狀，是一種有效治療PIC的中藥。與對(duì)照組比較，模型組豚鼠咳嗽敏感性增高，肺組織增生和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著增加，血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK含量均顯著增加，經(jīng)杏貝止咳顆粒治療后，可顯著減少咳嗽次數(shù)，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，改善組織增生和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，降低肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量，減少血清、肺泡灌洗液和肺組織勻漿上清中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK的含量。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)杏貝止咳顆粒能有效改善PIC，其機(jī)制可能與減少血清、肺泡灌洗液和肺組織中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF、PGE2和BK的含量從而降低咳嗽敏感性有關(guān)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Therapeutic effect of Xingbei Zhike Granules on post-infectious cough in guinea pigs

YUAN Sheng-nan1, ZHANG Xin-zhuang2, LIU Jing2, FAN Xiao-xue2, CAO Liang2, WANG Zhen-zhong2, XIAO Wei1, 2

1. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China 2. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China

To explore the effect of Xingbei Zhike Granules (杏貝止咳顆粒, XBZK) on post-infectious cough (PIC).In addition to control group, 3—4 weeks old SPF male Hartley guinea pigs were used to establish PIC guinea pig model by nasal drops of lipopolysaccharide, smoking and capsaicin atomization. After successful modeling, guinea pigs were divided into model group, Xingbei Zhike Granules low-, medium- and high-dose (0.93, 1.86, 3.72 g/kg) groups, Asmeton (21.62 mg/kg) group and Suhuang Zhike Capsules (蘇黃止咳膠囊, 313.88 mg/kg) group. After the last administration, cough frequency and latency were measured by capsaicin atomization. Substance P (SP), calcitonin gene related peptide (CGRP), neuropeptide A (NKA) and neuropeptide B (neuropeptide B, NKB), nerve growth factor (NGF), prostaglandin E2(PGE2) and bradykinin (BK) levels in serum, alveolar lavage fluid and lung tissue were detected by ELISA. The leukocyte classification in alveolar lavage fluid was determined by blood analyzer. Pathological changes of lung tissue were observed by hematoxylin-eosin (HE) staining.Compared with control group, the weight of guinea pigs in model group was slowly increased, the number of coughs was significantly increased (< 0.001), the latent period of cough was significantly shortened (< 0.001), the proportions of neutrophils and eosinophils were significantly increased (< 0.01, 0.001), and the contents of SP, CGRP, NKA, NKB, NGF, PGE2and BK in serum, alveolar lavage fluid and lung tissue were significantly increased (< 0.01, 0.001). Hyperplasia and inflammatory cell infiltration in lung tissue were obvious. Compared with model group, Xingbei Zhike Granules improved the slow increase trend of body weight in PIC guinea pigs, significantly reduced the number of coughs (< 0.001), prolonged the cough incubation period (< 0.001), significantly reduced the proportions of eosinophils and neutrophils in white blood cells (< 0.01, 0.001), and significantly reduced the contents of SP, CGRP, NKA, NKB, NGF, PGE2and BK in serum, alveolar lavage fluid and lung tissue (< 0.05, 0.01, 0.001), relieved the histopathological changes of lung tissue.Xingbei Zhike Granule has therapeutic effect on PIC guinea pigs.

post-infectious cough; guinea pigs; Xingbei Zhike Granules; cough sensitivity; neurogenic inflammation

R285.5

A

0253 - 2670(2023)10 - 3197 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.10.017

2023-02-15

2021年國(guó)家中醫(yī)藥管理局青年岐黃學(xué)者項(xiàng)目（國(guó)中醫(yī)藥人教函[2022]6號(hào)）

袁勝男（1998—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮滤幯邪l(fā)及過(guò)程控制。E-mail: 1163855048@qq.com

肖 偉，中國(guó)工程院院士，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幮滤幯邪l(fā)及過(guò)程控制。E-mail: kanionlunwen@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]