薛濤濤，唐志書, 3，段金廒，阮凱華，楊遠(yuǎn)貴，宋忠興，許洪波*

藥蜀葵莖葉化學(xué)成分及其體外抑制α-葡萄糖苷酶和5-脂氧合酶活性研究

薛濤濤1，唐志書1, 3，段金廒2，阮凱華1，楊遠(yuǎn)貴1，宋忠興1，許洪波1*

1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué) 陜西中藥資源產(chǎn)業(yè)化省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，秦藥特色資源研究開發(fā)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（培育），陜西省中藥產(chǎn)業(yè)研究院，陜西 咸陽 712083 2. 南京中醫(yī)藥大學(xué) 江蘇省方劑高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023 3. 中國中醫(yī)科學(xué)院研究生院，北京 100700

對(duì)錦葵科蜀葵屬植物藥蜀葵莖葉的化學(xué)成分及其體外抑制α-葡萄糖苷酶和5-脂氧合酶活性進(jìn)行研究。運(yùn)用D101大孔吸附樹脂、硅膠柱、MCI凝膠、Sephadex LH-20以及半制備HPLC等多種色譜方法進(jìn)行分離純化，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)；通過測定化合物對(duì)α-葡萄糖苷酶和5-脂氧合酶體外抑制活性，評(píng)價(jià)化合物的降血糖和抗炎作用。從藥蜀葵莖葉中共分離得到24個(gè)化合物，分別鑒定為腺苷（1）、4-羥基-2,6二甲氧基苯基-β吡喃葡萄糖苷（2）、芐基--β吡喃葡萄糖苷（3）、赤蘚醇（4）、5-羥甲基-2-呋喃甲醛（5）、1-[5-(hydroxymethyl) furan-2-yl] ethenone（6）、黑麥草內(nèi)酯（7）、isololiolide（8）、4-羥基苯甲醛（9）、對(duì)羥基苯甲酸甲酯（10）、催吐蘿芙木醇（11）、(6,7,9)-roseoside（12）、二氫芥子醇（13）、3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)propan-1-ol（14）、dihydrodehydrodiconifenyl alcohol（15）、齊墩果酸3-β吡喃葡萄糖苷（16）、紫云英苷（17）、反式銀椴苷（18）、望春花黃酮醇苷（19）、apigenin 7--(6---coumaroyl-βglucopyranoside)（20）、香葉木素7--β吡喃葡萄糖苷（21）、田薊苷（22）、芒柄花素7-葡萄糖苷（23）、acacetin 7--(6--coumaroyl)-βglucopyranoside（24）。生物活性測試結(jié)果表明，化合物18、19、24對(duì)α-葡萄糖苷酶半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）為（12.2±1.3）、（2.8±0.6）、（31.1±3.9）μmol/L；化合物18、24對(duì)5-脂氧合酶的IC50為（34.76±4.3）、（25.37±2.4）μmol/L?；衔?～16、18～24為首次從該植物中分離獲得。發(fā)現(xiàn)部分化合物具有較好的體外抑制α-葡萄糖苷酶（18、19、24）和5-脂氧合酶（18、24）作用，表明其具有潛在的降血糖活性和抗炎活性。

藥蜀葵；黃酮；α葡萄糖苷酶；5-脂氧合酶；反式銀椴苷；望春花黃酮醇苷；田薊苷

藥蜀葵Linn.為錦葵科（Malvaceae）蜀葵屬的多年生直立草本植物，原產(chǎn)于歐洲和亞洲，我國多為栽培品種，收錄于歐洲藥典。作為歐洲傳統(tǒng)藥食兩用植物，藥蜀葵已有至少2000年的應(yīng)用歷史，其根、莖、葉、花和種子均可入藥，用于治療口腔和咽部黏膜刺激、干咳、輕度胃炎、皮膚燒傷，蚊蟲咬傷、黏膜炎、潰瘍、膿腫、便秘和腹瀉[1]；其莖葉可食用。此外，因藥蜀葵花色艷麗，亦作為觀賞性植物[2]。

迄今為止，關(guān)于藥蜀葵功效物質(zhì)基礎(chǔ)研究比較薄弱，其主要藥效物質(zhì)不明確。此前，僅從該植物中分離鑒定46個(gè)化合物[3]，主要為黃酮、酚酸、多糖、香豆素、甾體和氨基酸類成分[4]?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明藥蜀葵提取物具有鎮(zhèn)咳、抗炎、抗氧化[5]等作用，但研究對(duì)象主要為其提取物，對(duì)于單體化合物的藥理活性研究相對(duì)不足。目前，藥蜀葵資源量較大，但尚未得到充分的開發(fā)和利用。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，藥蜀葵莖葉甲醇浸提物醋酸乙酯萃取部位對(duì)α-葡萄糖苷酶和5-脂氧合酶具有較好的體外抑制活性[6]?；诖?，本研究擬通過多種色譜分離技術(shù)對(duì)藥蜀葵醋酸乙酯萃取部位的化學(xué)成分進(jìn)行更加系統(tǒng)深入的研究，并對(duì)獲得的化合物進(jìn)行體外酶抑制活性評(píng)價(jià)，以期為藥蜀葵資源合理開發(fā)和充分的利用奠定科學(xué)基礎(chǔ)。通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)共鑒定了24個(gè)化合物，分別為腺苷（adenosine，1）、4-羥基-2,6二甲氧基苯基-β--吡喃葡萄糖苷（leonuriside A，2）、芐基--β--吡喃葡萄糖苷（benzyl--β--glucopyranoside，3）、赤蘚醇（meso-erythritol，4）、5-羥甲基-2-呋喃甲醛（5-hydroxymethyl-2-furancarboxaldehyde，5）、1-[5-(hydroxymethyl) furan-2-yl] ethenone（6）、黑麥草內(nèi)酯（loliolide，7）、isololiolide（8）、4-羥基苯甲醛（4-hydroxybenzaldehyde，9）、對(duì)羥基苯甲酸甲酯（methyl 4-hydroxybenzoate，10）、催吐蘿芙木醇（vomifoliol，11）、(6,7,9)-roseoside（12）、二氫芥子醇（dihydrosyringenin，13）、3-(3,4,5- trimethoxyphenyl)propan-1-ol（14）、dihydro- dehydrodiconifenyl alcohol（15），齊墩果酸3--β--吡喃葡萄糖苷（oleanolic acid 3--β-- glucopyranoside，16）、紫云英苷（astragalin，17）、反式銀椴苷（-tiliroside，18）、望春花黃酮醇苷（biondnoid I，19）、apigenin 7--(6′′---coumaroyl- β--glucopyranoside)（20）、香葉木素7--β--吡喃葡萄糖苷（diosmetin 7--β--glucopyranoside，21），田薊苷（tilianin，22）、芒柄花素7-葡萄糖苷（formononetin 7-glucoside，23）、acacetin 7--(6-- coumaroyl)-β--glucopyranoside（24）。酶抑制結(jié)果表明，部分化合物具有較好的體外抑制α-葡萄糖苷酶（19、24）和5-脂氧合酶（18、24）活性。

1 儀器與材料

Varian Mercury plus-600型核磁共振儀（德國Bruker公司）；半制備型高效液相色譜儀（日本島津公司）；半制備色譜柱（YMC，250 mm×20 mm，10 μm，日本YMC公司）；EYELAN-1210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛郎儀器有限公司）；Milli-Q integral制水機(jī)（美國密理博公司）；Multiskan GO酶標(biāo)儀（美國Thermo Scientific公司）；D-101型大孔吸附樹脂（天津允開樹脂科技有限公司）；MCI GEL填料（日本三菱化學(xué)公司）；HSGF254硅膠板（煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所）；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia生物技術(shù)有限公司）；柱色譜硅膠（200～300目，青島海洋化工有限公司）；色譜級(jí)甲醇、乙腈（云南新藍(lán)景化學(xué)工業(yè)有限公司）；5-脂氧合酶（批號(hào)N25GS169274，5萬U/mg，來源于大豆，上海源葉生物科技有限公司）；亞油酸（批號(hào)BCBZ1990，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.5%）；槲皮素（批號(hào)C01J10Y91727，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，上海源葉生物科技有限公司）；α-葡萄糖苷酶（批號(hào)M11GS141284，33 U/mg，來源于酵母，上海源葉生物科技有限公司）；對(duì)硝基苯基-α葡萄糖吡喃苷（批號(hào)wkq20071504，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，四川維克奇生物科技有限公司）；阿卡波糖（批號(hào)RFS-A01411804026，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，成都瑞芬思生物科技有限公司）；其他試劑均為分析純（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

實(shí)驗(yàn)用藥蜀葵收集于陜西省咸陽市永壽縣監(jiān)軍鎮(zhèn)陜西輝勝現(xiàn)代農(nóng)業(yè)園區(qū)，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)許洪波副教授鑒定為錦葵科蜀葵屬植物藥蜀葵L.的干燥莖葉，標(biāo)本（20190007）保存于陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西中藥資源產(chǎn)業(yè)化省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心。

2 提取與分離

干燥的藥蜀葵莖葉45 kg，經(jīng)甲醇室溫浸漬提取3次，減壓回收甲醇，將得到的干浸膏分散于水中，依次用石油醚和醋酸乙酯萃取得到相關(guān)部位，其中甲醇浸提物醋酸乙酯萃取部位浸膏0.5 kg過大孔吸附樹脂柱，依次用水及30%、50%、70%和100%甲醇梯度洗脫，所得洗脫溶劑分別濃縮合并得5個(gè)組分（Fr. A～E）。組分Fr. B（8.3 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇體系洗脫，合并相同流分后，再經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（24∶76）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物1（4.3 mg，R＝20.0 min）和2（5.2 mg，R＝22.3 min）。組分Fr. C（6.4 g）經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇體系（13∶1、8∶1、4∶1、0∶1）洗脫，得到4個(gè)組分Fr. C-1～C-4，，F(xiàn)r. C-1（1.2 g）經(jīng)MCI色譜柱水-甲醇體系洗脫，洗脫溶劑濃縮合并得到4個(gè)組分（Fr. C-1-1～C-1-4），F(xiàn)r. C-1-1（236.0 mg）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇體系洗脫，合并相同流分后，再經(jīng)半制備高效液相色譜，以乙腈-水（23∶77）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物11（21.2 mg，R＝20.0 min）。Fr. C-1-2（85.0 mg）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇體系洗脫，得到化合物6（2.6 mg）和9（3.7 mg）。Fr. C-1-3（0.6 g）經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇體系（20∶1～0∶1）洗脫，得到3個(gè)組分（Fr. C-1-3-1～Fr. C-1-3-3），F(xiàn)r. C-1-3-1（340.0 mg）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇體系洗脫，得到化合物5（8.9 mg）和13（7.9 mg），隨后Fr. C-1-3-1剩余合并組分（225.0 mg），經(jīng)半制備高效液相色譜，以乙腈-水（28∶72）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物7（21.5 mg，R＝17.5 min）。Fr. C-1-4（43.2 mg），經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以26%乙腈等度洗脫（3 mL/min），得到化合物8（20.4 mg，R＝17.5 min）。Fr. E（138.7 g）經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇體系（18∶1、12∶1、6∶1、1∶1和0∶1）洗脫，所得洗脫溶劑分別濃縮合并得5個(gè)組分（Fr. E1～E5），F(xiàn)r. E3（29.5 g）經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇體系（13∶1、8∶1、4∶1、0∶1）洗脫，得到Fr. E3-1～E3-4，4個(gè)組分，F(xiàn)r. E3-2（7.0 g）經(jīng)MCI色譜柱水-甲醇體系洗脫，洗脫溶劑濃縮合并得到4個(gè)組分（Fr. E3-2-1～Fr. E3-2-4），F(xiàn)r. E3-2-2（1.1 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇體系洗脫，再經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（26∶74）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物20（6.2 mg，R＝16.5 min）、21（7.0 mg，R＝17.0 min）；Fr. E3-2-3（2.7 g）經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇體系（10∶1～1∶1）洗脫，回收溶劑得到5個(gè)組分（Fr. E3-2-3-1～E3-2-3-5），F(xiàn)r. E3-2-3-1（78.9 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（26∶74）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物16（3.2 mg，R＝16.0 min）。Fr. E3-2-3-2（600.0 mg）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜（甲醇體系洗脫），得到化合物17（5.0 mg）和18（6.7 mg）。Fr. E3-2-3-3（160 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（23∶77）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物22（1.5 mg，R＝16.5 min）、23（1.4 mg，R＝16.0 min）、24（3.0 mg，R＝17.8 min），F(xiàn)r. E3-2-3-5（206.5 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（30∶70）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物19（75.3 mg，R＝15.5 min）。Fr. E3-3（10.2 g）經(jīng)MCI色譜柱水-甲醇體系洗脫，洗脫溶劑濃縮合并得到5個(gè)組分（Fr. E3-3-1～Fr. E3-2-5），F(xiàn)r. E3-3-1（450.0 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（28∶72）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物10（1.3 mg，R＝17.0 min）。Fr. E3-3-2（1.2 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇體系洗脫，經(jīng)TLC檢測合并相同流分，濃縮得到4個(gè)組分（Fr. E3-3-2-1～Fr. E3-3-2-4），F(xiàn)r. E3-3-2-1（320.0 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（30∶70）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物12（2.0 mg，R＝18.0 min），F(xiàn)r. E3-3-2-3（160.0 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（29∶71）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物15（1.6 mg，R＝18.5 min）；Fr. E3-3-3（95.0 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（29∶71）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物14（2.0 mg，R＝18.3 min）；Fr. E3-3-5（76.0 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以乙腈-水（26∶74）等度洗脫（3 mL/min），得到化合物3（2.0 mg，R＝16.5 min）和4（1.9 mg，R＝19.0 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，C10H13N5O4。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 8.35 (1H, s. H-8), 8.13 (1H, s, H-2), 7.35 (2H, s, -NH2), 5.88 (1H, d,= 6.2 Hz, H-1), 4.61 (1H, t,= 4.9 Hz, H-2), 4.14 (1H, m, H-3), 3.96 (1H, q,= 3.4 Hz, H-4), 3.67 (1H, dd,= 12.2, 3.7 Hz, H-5a), 3.55 (1H, dd,= 12.2, 3.7 Hz, H-5b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 152.4 (C-2), 149.1 (C-4), 119.4 (C-5), 156.2 (C-6), 139.9 (C-8), 87.9 (C-1), 73.4 (C-2), 70.7 (C-3), 85.9 (C-4), 61.7 (C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]，故鑒定化合物1為腺苷。

化合物2：白色粉末，C14H20O9，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.13 (2H, s, H-2, 6), 4.66 (1H, d,= 7.5 Hz, H-1), 3.79 (6H, s, -OCH3), 3.78 (1H, dd,= 11.7, 2.5 Hz, H-6a), 3.67 (1H, dd,= 11.7, 5.2 Hz, H-6b), 3.33～3.45 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 129.6 (C-1), 94.5 (C-2, 6), 154.8 (C-3, 5), 129.6 (C-4), 106.2 (C-1), 75.7 (C-2), 77.8 (C-3), 71.3 (C-4), 78.3 (C-5), 62.6 (C-6), 56.8 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]，故鑒定化合物2為4-羥基-2,6-二甲氧基苯基-β吡喃葡萄糖苷。

化合物3：白色粉末，C13H18O6，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.42 (2H, m, H-4, 8), 7.32 (2H, m, H-5, 7), 7.27 (1H, m, H-6), 4.93 (1H, d,= 11.8 Hz, Ha-2), 4.67 (1H, d,= 11.8 Hz, H-2b), 4.35 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 3.89 (1H, dd,= 11.9, 2.2 Hz, H-6a), 3.68 (1H, dd,= 11.9, 5.8 Hz, H-6b), 3.20～3.45 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 71.7 (C-2), 139.1 (C-3), 129.2 (C-4, 8), 129.3 (C-5, 7), 128.7 (C-6), 103.3 (C-1), 75.2 (C-2), 78.1 (C-3), 71.7 (C-4), 78.1 (C-5), 62.8 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，故鑒定化合物3為芐基--β吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色粉末，C4H10O4，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 3.65 (2H, m, H-2, 3), 3.58 (2H, dd,= 11.2, 4.9 Hz, H-2a, 3a), 3.51 (2H, dd,= 11.2, 6.0 Hz, H-2b, 3b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 73.9 (C-2, 3), 64.4 (C-1, 4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物4為赤蘚醇。

化合物5：黃色油狀物，C6H6O3，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 9.54 (1H, s, CHO), 7.39 (1H, d,= 3.5 Hz, H-3), 6.59 (1H, d,= 3.5 Hz, H-4), 4.63 (2H, s, CH2OH)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 153.9 (C-2), 124.4 (C-3), 110.9 (C-4), 163.2 (C-5), 179.4 (CHO), 57.6 (CH2OH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物5為5-羥甲基-2-呋喃甲醛。

化合物6：黃色油狀物，C7H8O3，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.31 (1H, d,= 3.5 Hz, H-3), 6.52 (1H, d,= 3.5 Hz, H-4), 4.59 (2H, s, CH2OH), 2.45 (3H, s, CH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 188.69 (CO), 161.6 (C-2), 153.3 (C-5), 120.6 (C-3), 110.7 (C-4), 57.6 (CH2OH), 25.8 (CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，故鑒定化合物6為1-[5-(hydroxymethyl) furan-2-yl] ethenone。

化合物7：無色油狀物，C11H16O3，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.76 (1H, s, H-7), 4.23 (1H, m, H-3), 2.00～2.40 (2H, d,= 14.0 Hz, H-4α, 4β), 1.76 (3H, s, H-11), 1.53～1.75 (2H, dd,= 14.4, 3.0 Hz, H-2α, 2β), 1.48 (3H, s, H-10), 1.27 (3H, s, H-9)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 37.2 (C-1), 48.0 (C-2), 67.2 (C-3), 46.4 (C-4), 88.9 (C-5), 185.7 (C-6), 113.3 (C-7), 174.4 (C-8), 27.4 (C-9), 27.0 (C-10), 31.0 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，故鑒定化合物7為黑麥草內(nèi)酯。

化合物8：無色油狀物，C11H16O3，1H-NMR (600 MHz, CD3COCD3): 5.71 (1H, s, H-7), 4.13 (1H, m, H-3), 2.88 (1H, m, H-4β), 2.44 (1H, d,= 11.7 Hz, H-2β), 2.05 (1H, m, H-4α), 2.00 (1H, d,= 12.8 Hz, H-2α), 1.55, (3H, s, H-11), 1.30 (3H, s, H-9), 1.28 (3H, s, H-10)；13C-NMR (150 MHz, CD3COCD3): 35.7 (C-1), 50.8 (C-2), 64.7 (C-3), 49.1 (C-4), 87.0 (C-5), 182.1 (C-6), 113.6 (C-7), 171.5 (C-8), 26.0 (C-9), 25.4 (C-10), 30.3 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14]，故鑒定化合物8為isololiolide。

化合物9：白色粉末，C7H6O2，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 9.76 (1H, s, CHO), 7.78 (2H, d,= 8.3 Hz, H-3, 5), 6.91 (2H, d,= 8.3 Hz, H-2, 6)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 165.3 (C-1), 116.9 (C-2, 6), 133.4 (C-3, 5), 130.3 (C-4), 192.8 (-CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物9為4-羥基苯甲醛。

化合物10：白色粉末，C8H8O3，1H-NMR (600 MHz, DMSO): 7.80 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3, 5), 6.83 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2, 6), 4.05 (3H, s, H-8)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 159.3 (C-1), 115.4 (C-2, 6), 131.4 (C-3, 5), 120.0 (C-4), 165.3 (C-7), 51.6 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，故鑒定化合物10為對(duì)羥基苯甲酸甲酯。

化合物11：無色油狀物，C13H20O3，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.88 (1H, s, H-2), 5.80 (2H, m, H-7, 8), 4.33 (1H, m, H-9), 2.49 (1H, d,= 17.1 Hz, H-6a), 2.17 (1H, d,= 17.1 Hz, H-6b), 1.92 (3H, s, 3-Me), 1.25 (3H, d,= 6.4 Hz, H-10), 1.05 (3H, s, H-5-Mea), 1.02 (3H, s, H-5-Meb)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 201.2 (C-1), 127.1 (C-2), 167.4 (C-3), 79.9 (C-4), 42.4 (C-5), 49.9 (C-6), 130.0 (C-7), 127.1 (C-8), 68.6 (C-9), 24.5 (C-10), 19.6 (3-Me), 24.8 (5-Mea), 23.8 (5-Meb)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]，故鑒定化合物11催吐蘿芙木醇。

化合物12：無色油狀物，C19H13O8，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.87 (1H, s, H-2), 5.86 (1H, m, H-7), 5.85 (1H, m, H-8), 4.33 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 4.29 (1H, m, H-9), 3.86 (1H, d,= 2.2 Hz, Ha-6), 3.84 (1H, d,= 2.2 Hz, H-6b), 3.22～3.47 (4H, m, H-2～5), 2.52 (1H, d,= 16.9 Hz, H-4a), 2.14 (1H, d,= 16.9 Hz, H-4b), 1.98 (3H, s, H-3-Me), 1.29 (3H, d,= 6.3 Hz, H-10), 1.03 (6H, s, H-5-Me)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 167.2 (C-1), 127.12 (C-2), 201.2 (C-3), 50.7 (C-4), 42.4 (C-5), 80.0 (C-6), 131.5 (C-7), 135.3 (C-8), 78.1 (C-9), 21.2 (C-10), 24.7 (C-11), 23.4 (C-12), 21.1 (C-13), 102.7 (C-1), 75.3 (C-2), 77.3 (C-3), 71.7 (C-4), 78.1 (C-5), 62.8 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[18]，故鑒定化合物12為(6,7,9)-roseoside。

化合物13：無色油狀物，C11H16O4，1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 6.42 (2H, s, H-2, 6), 3.87 (6H, s, 3, 5-OCH3), 3.68 (2H, t,= 6.1 Hz, H-9), 2.64 (2H, t,= 7.7 Hz, H-7), 1.88 (2H, m, H-8)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 133.1 (C-1), 105.1 (C-2, 6), 147.1 (C-3, 5), 132.9 (C-4), 32.5 (C-7), 34.6 (C-8), 62.4 (C-9), 56.4 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[19]，故鑒定化合物13為二氫芥子醇。

化合物14：無色油狀物，C12H18O4，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.44 (2H, s, H-2, 6), 3.72 (6H, s, 3, 5-OCH3), 3.71 (3H, s, 4-OCH3), 3.49 (2H, t,= 6.2 Hz, H-9), 2.77 (2H, m, H-7), 1.82 (2H, m, H-8)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 137.1 (C-1), 105.5 (C-2, 6), 153.4 (C-3, 5), 136.5 (C-4), 32.3 (C-7), 33.5 (C-8), 62.4 (C-9), 60.8 (4-OCH3), 56.1 (3, 5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20]，故鑒定化合物14為3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)propan-1-ol。

化合物15：白色粉末，C20H24O6，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.94 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 6.82 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6), 6.76 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 6.72 (2H, s, H-2, 6), 5.49 (1H, d,= 6.3 Hz, H-7), 3.85 (3H, s, 3-OCH3), 3.82 (1H, d,= 5.9 Hz, H-9a), 3.81 (3H, s, 3-OCH3), 3.64 (1H, m, H-8), 3.56 (2H, t,= 6.5 Hz, H-9), 3.47 (1H, d,= 5.9 Hz, H-9b), 2.62 (2H, t,= 7.7 Hz, H-7), 1.82 (2H, m, H-8)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 136.9 (C-1), 110.5 (C-2), 149.1 (C-3), 147.5 (C-4), 114.1 (C-5), 119.7 (C-6), 88.0 (C-7), 55.5 (C-8), 65.0 (C-9), 134.8 (C-1), 116.1 (C-2), 145.2 (C-3), 147.5 (C-4), 129.9 (C-5), 117.9 (C-6), 33.1 (C-7), 32.9 (C-8), 62.2 (C-9), 56.7 (-OCH3-3), 56.3 (-OCH3-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[21]，故鑒定化合物15為dihydrodehydrodiconifenyl alcohol。

化合物16：白色粉末，C36H58O8，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.27 (1H, t,= 3.3 Hz, H-12), 5.09 (1H, d,= 7.2 Hz, H-1), 4.13 (1H, dd,= 11.6, 6.3 Hz, H-6a), 3.89 (1H, dd,= 11.6, 6.3 Hz, H-6b), 3.32～3.45 (4H, m, H-2～5), 3.23 (1H, dd,= 12.0, 4.5 Hz, H-3), 3.16 (1H, dd,= 14.3, 3.8 Hz, H-18), 1.27 (3H, s, 23-CH3), 1.19 (3H, s, 27-CH3), 1.04 (3H, s, 24-CH3), 0.94 (3H, s, 26-CH3), 0.90 (3H, s, 29-CH3), 0.83 (3H, s, 25-CH3), 0.77 (3H, s, 30-CH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 40.6 (C-1), 25.9 (C-2), 88.8 (C-3), 41.5 (C-4), 51.8 (C-5), 19.1 (C-6), 33.4 (C-7), 42.1 (C-8), 48.8 (C-9), 39.0 (C-10), 24.6 (C-11), 123.3 (C-12), 145.6 (C-13), 44.1 (C-14), 29.4 (C-15), 23.7 (C-16), 48.2 (C-17), 43.0 (C-18), 47.9 (C-19), 30.8 (C-20), 36.9 (C-21), 33.2 (C-22), 28.9 (C-23), 17.5 (C-24), 14.4 (C-25), 17.9 (C-26), 26.5 (C-27), 180.0 (C-28), 33.1 (C-29), 24.1 (C-30), 105.8 (C-1), 71.7 (C-2), 78.2 (C-3), 69.7 (C-4), 78.0 (C-5), 66.7 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[22]，故鑒定化合物16為齊墩果酸3-β吡喃葡萄糖苷。

化合物17：黃色油狀物，C21H20O11，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 8.03 (2H, d,= 8.9 Hz, H-2, 6), 6.87 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3, 5), 6.26 (1H, s, H-8), 6.09 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6), 5.14 (1H, d,= 7.5 Hz, H-1), 3.67 (1H, dd,= 11.9, 2.4 Hz, H-6a), 3.53 (1H, dd,= 11.9, 5.4 Hz, H-6b), 3.32～3.45 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 158.9 (C-2), 135.3 (C-3), 178.9 (C-4), 162.8 (C-5), 101.6 (C-6), 171.3 (C-7), 96.00 (C-8), 158.4 (C-9), 104.6 (C-10), 122.8 (C-1), 132.2 (C-2, 6), 116.1 (C-3, 5), 161.7 (C-4), 104.2 (C-1), 75.7 (C-2), 78.1 (C-3), 71.3 (C-4), 78.4 (C-5), 62.6 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[23]，故鑒定化合物17為紫云英苷。

化合物18：黃色粉末，C30H26O13，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 8.07 (2H, d,= 8.7 Hz, H-2, 6), 7.64 (H, d,= 15.9 Hz, H-7), 7.45 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2, 6), 6.91 (2H, d,= 8.7 Hz, 3, 5), 6.79 (2H, d,= 6.4 Hz, H-3, 5), 6.40 (1H, d,= 1.9 Hz, H-8), 6.34 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8), 6.20 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6), 5.38 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 3.71 (1H, dd,= 11.7, 6.6 Hz, H-6a), 3.56 (1H, dd,= 11.7, 6.6 Hz, H-6b), 3.31～3.72 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 158.5 (C-2), 135.3 (C-3), 179.4 (C-4), 163.1 (C-5), 99.9 (C-6), 159.1 (C-7), 94.8 (C-8), 166.1 (C-9), 103.9 (C-10), 122.8 (C-1), 131.3 (C-2, 6), 116.8 (C-3, 5), 161.4 (C-4), 105.7 (C-1), 75.8 (C-2), 75.9 (C-3), 72.2 (C-4), 76.6 (C-5), 62.4 (C-6), 127.1 (C-1), 132.3 (C-2, 6), 116.2 (C-3, 5), 161.6 (C-4), 147.3 (C-7), 114.7 (C-8), 168.5 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[24]，故鑒定化合物18為反式銀鍛苷。

化合物19：黃色粉末，C30H26O13，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.99 (2H, m, H-2, 6), 7.40 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 7.32 (2H, m, H-2, 6), 6.81 (4H, m, H-3, 5, 3, 5), 6.31 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 6.13 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 6.08 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8), 5.24 (1H, d,= 7.5 Hz, H-1), 4.29 (1H, dd,= 11.8, 2.3 Hz, H-6a), 4.19 (1H, dd,= 11.8, 6.7 Hz, H-6b), 3.31～3.53 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 158.5 (C-2), 135.2 (C-3), 179.4 (C-4), 163.0 (C-5), 100.1 (C-6), 166.4 (C-7), 94.9 (C-8), 161.5 (C-9), 104.0 (C-10), 122.7 (C-1), 131.2 (C-2, 6), 116.8 (C-3, 5), 159.3 (C-4), 105.5 (C-1), 75.7 (C-2), 75.8 (C-3), 71.7 (C-4), 78.0 (C-5), 64.3 (C-6), 127.1 (C-1), 132.2 (C-2, 6), 116.0 (C-3, 5), 161.2 (C-4), 145.6 (C-7), 114.7 (C-8), 168.8 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[25]，故鑒定化合物19為望春花黃酮醇苷。

化合物20：黃色粉末，C30H26O12，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.98 (2H, d,= 8.9 Hz, H-2, 6), 7.41 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 7.32 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 6.79 (4H, d,= 8.1 Hz, H-3, 5, 3, 5), 6.78 (1H, s, H-3), 6.23 (1H, d,= 1.8 Hz, H-8), 6.09 (1H, d,= 16.1 Hz, H-8), 6.07 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 5.16 (1H, d,= 7.2 Hz, H-1), 4.29 (1H, dd,= 11.7, 6.6 Hz, H-6a), 4.16 (1H, dd,= 11.8, 6.6 Hz, H-6b), 3.32～3.48 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 161.5 (C-2), 104.4 (C-3), 178.9 (C-4), 161.4 (C-5), 101.4 (C-6), 162.8 (C-7), 95.8 (C-8), 158.0 (C-9), 104.5 (C-10), 122.8 (C-1), 131.2 (C-2, 6), 116.9 (C-3, 5), 160.2 (C-4), 107.0 (C-1), 75.1 (C-2), 78.1 (C-3), 71.1 (C-4), 75.8 (C-5), 64.3 (C-6), 127.0 (C-1), 132.1 (C-2, 6), 116.0 (C-3, 5), 158.8 (C-4), 146.6 (C-7), 114.7 (C-8), 168.8 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[26]，故鑒定化合物20為apigenin 7--(6--- coumaroyl-βglucopyranoside)。

化合物21：黃色粉末，C22H22O11，1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.70 (1H, s, 5-OH), 7.69 (1H, dd,= 8.5, 2.3 Hz, H-6), 7.58 (1H, d,= 2.3 Hz, H-2), 7.05 (1H, d,= 8.6 Hz, H-5), 6.51 (1H, s, H-3), 6.46 (1H, d,= 1.7 Hz, H-8), 5.85 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6), 4.41 (2H, d,= 7.7 Hz, H-1), 3.84 (1H, s, -OCH3), 3.69 (2H, d,= 2.2 Hz, H-6), 3.22～3.34 (4H, m, 2～5)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 162.4 (C-2), 102.9 (C-3), 180.7 (C-4), 158.9 (C-5), 99.8 (C-6), 166.7 (C-7), 94.6 (C-8), 158.0 (C-9), 108.6 (C-10), 124.2 (C-1), 113.5 (C-2), 147.1 (C-3), 149.8 (C-4), 112.5 (C-5), 119.5 (C-6), 101.5 (C-1), 74.7 (C-2), 77.1 (C-3), 69.3 (C-4), 77.3 (C-5), 60.8 (C-6), 56.1 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[27]，故鑒定化合物21為香葉木素7--β--吡喃葡萄糖苷。

化合物22：黃色粉末，C22H22O11，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 8.04 (2H, dd,= 8.5, 3.5 Hz, H-2, 6), 6.97 (2H, dd,= 8.5, 2.1 Hz, H-3, 5), 6.86 (1H, d,= 2.5 Hz, H-8), 6.72 (1H, s H-3), 6.39 (1H, d,= 3.6 Hz, H-6), 5.26 (1H, dd,= 7.5, 2.6 Hz, H-1), 4.59 (3H, s, -OCH3), 4.03 (1H, dd,= 11.8, 6.7 Hz, H-6a), 3.97 (1H, dd,= 11.8, 6.7 Hz, H-6b), 3.31～3.45 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 163.1(C-2), 103.9 (C-3), 179.4 (C-4), 158.5 (C-5), 100.2 (C-6), 166.5 (C-7), 94.9 (C-8), 159.2 (C-9), 105.5 (C-10), 122.7 (C-1), 116.1 (C-2, 6), 129.0 (C-3, 5), 161.6 (C-4), 103.8 (C-1), 75.7 (C-2), 75.8 (C-3), 71.5 (C-4), 77.9 (C-5), 64.5 (C-6), 56.5 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[28]，故鑒定化合物22為田薊苷。

化合物23：黃色粉末，C22H22O9，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.63 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 7.61 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2, 6), 6.86 (1H, s, H-3), 6.79 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3, 5), 6.73 (1H, m, H-6), 6.69 (1H, d,= 8.2 Hz, H-8), 5.13 (1H, d,= 6.8 Hz, H-1), 3.66 (3H, s, -OCH3), 3.60 (1H, dd,= 11.9, 2.5 Hz, H-6a), 3.48 (1H, dd,= 11.9, 5.4 Hz, H-6b), 3.35～3.43 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 163.5 (C-2), 104.6 (C-3), 179.3 (C-4), 126.3 (C-5), 117.1 (C-6), 161.5 (C-7), 100.1 (C-8), 156.1 (C-9), 113.1 (C-10), 122.7 (C-1), 132.5 (C-2, 5), 115.9 (C-3, 6), 160.6 (C-4), 56.2 (C-OCH3), 111.9 (C-1), 71.2 (C-2), 78.2 (C-3), 69.7 (C-4), 78.0 (C-5), 62.5 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[29]，故鑒定化合物23為芒柄花素7-葡萄糖苷。

化合物24：黃色粉末，C31H28O12，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.50 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2, 6), 7.35 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 7.21 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2, 6), 6.78 (1H, s, H-3), 6.74 (2H, d,= 8.6 Hz, H-3, 5), 6.67 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3, 5), 6.64 (1H, d,= 1.8 Hz, H-8), 6.20 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6), 6.05 (1H, d,= 16.1 Hz, H-8), 5.22 (1H, d,= 7.6 Hz, H-1), 4.33 (1H, dd,= 11.8, 2.3 Hz, H-6a), 4.22 (1H, dd,= 11.8, 6.7 Hz, H-6b), 3.60 (3H, s, 4-OCH3), 3.35～3.47 (4H, m, H-2～5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 161.4 (C-2), 103.8 (C-3), 179.6 (C-4), 161.2 (C-5), 99.8 (C-6), 163.7 (C-7), 94.2 (C-8), 159.4 (C-9), 106.1 (C-10), 122.6 (C-1), 131.2 (C-2, 6), 115.9 (C-3, 5), 160.9 (C-4), 56.2 (4-OCH3), 111.8 (C-1), 75.7 (C-2), 78.0 (C-3), 71.7 (C-4), 75.9 (C-5), 64.2 (C-6), 127.1 (C-1), 132.4 (C-2, 6), 116.8 (C-3, 5), 155.9 (C-4), 148.66 (C-7), 120.6 (C-8), 168.7 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[30]，故鑒定化合物24為acacetin 7--(6--coumaroyl)-βglucopyranoside。

4 活性篩選

4.1 α-葡萄糖苷酶體外抑制活性測試

化合物對(duì)α-葡萄糖苷酶的體外抑制活性測試參考本課題組前期建立的測試方法[31]進(jìn)行測定。采用100 mmol/L pH 6.9的磷酸鹽緩沖液（PBS）精確配制0.1 U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液和5 mmol/L的對(duì)硝基苯基-α吡喃葡萄糖苷（-nitrophenyl-α--glucopyranoside，pNPG）溶液備用。吸取50 μL樣品溶液于96孔板中，加入100 μL酶液，混合均勻后于室溫下孵育10 min，加入50 μL pNPG溶液啟動(dòng)反應(yīng)，分別在反應(yīng)0、5 min于酶標(biāo)儀405 nm測吸光度（），以阿卡波糖為陽性對(duì)照，設(shè)定樣品組和空白組（PBS代替樣品），記錄2次的差值，平行操作3次，按公式計(jì)算抑制率。

抑制率＝(ΔC－ΔS)/ΔC

ΔC是空白組在0～5 min內(nèi)的差值，ΔS是樣品組在0～5 min內(nèi)的差值

4.2 5-脂氧合酶體外抑制活性測試

化合物對(duì)5-脂氧合酶的體外抑制活性測試參考本課題組前期建立的測試方法[6]進(jìn)行測定。簡述如下，配制底物溶液：配制濃度為200 mmol/L pH 9.0的PBS緩沖液，精確吸取50 μL 聚山梨酯20分散在PBS緩沖溶液中，邊搖動(dòng)邊加亞油酸50 μL，混合均勻后加入1 mol/L的氫氧化鈉，邊加邊搖動(dòng)，直到整個(gè)體系澄清，pH調(diào)至9.0，加PBS定容至100 mL；用PBS配制0.2 U/mL的5-脂氧合酶溶液。精確吸取50 μL樣品溶液于96孔板中，加入100 μL的底物溶液，輕輕搖動(dòng)混勻，室溫孵育5 min，快速加入100 μL酶溶液，分別在反應(yīng)0、5 min于酶標(biāo)儀234 nm測值，以槲皮素為陽性對(duì)照，設(shè)定樣品組和空白組（PBS代替樣品），記錄2次的差值，平行操作3次，按“4.1”項(xiàng)下公式計(jì)算抑制率。

4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

化合物在200、100 μmol/L時(shí)對(duì)α-葡萄糖苷酶和5-脂氧合酶的體外抑制活性測試結(jié)果見表1。在23個(gè)測試的化合物中（化合物4的量較少，未做活性測定），相較于其他類型的化合物，黃酮類化合物表現(xiàn)出較好的抑制活性，如化合物18、19、23和24在200 μmol/L下對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率分別為50.66%、95.15%、48.90%和75.70%；化合物18、21和24在200μmol/L下對(duì)5-脂氧合酶的抑制率分別為84.87%、50.49%和83.96%。對(duì)活性較好的化合物18、19和24做進(jìn)一步活性研究，并通過GraphPad Prism 8.0計(jì)算其半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。

化合物18對(duì)α-葡萄糖苷酶的IC50值為（12.2±1.3）μmol/L，對(duì)5-脂氧合酶的IC50值為（34.76±4.3）μmol/L；化合物19對(duì)α-葡萄糖苷酶的IC50值為（2.8±0.6）μmol/L；化合物24對(duì)α-葡萄糖苷酶的IC50值為（31.1±3.9）μmol/L，對(duì)5-脂氧合酶的IC50值為（25.37±2.4）μmol/L。α-葡萄糖苷酶的陽性對(duì)照阿卡波糖的IC50值為（0.16±0.0）μmol/L，5-脂氧合酶的陽性對(duì)照槲皮素的IC50值為（19.8±0.3）μmol/L。

5 討論

藥蜀葵作為傳統(tǒng)的藥食兩用植物，具有廣泛的藥理作用和潛在的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。藥蜀葵主要含有黃酮類、多糖類和酚酸類化合物，但從中分離鑒定出的化合物并不多，且國內(nèi)對(duì)其研究相對(duì)較少；為了充分開發(fā)和利用藥蜀葵資源，在本課題組之前的研究中，通過活性追蹤方式確定了甲醇浸提物醋酸乙酯萃取部位為其抑制α-葡萄糖苷酶和5-脂氧合酶的活性部位。本研究通過系統(tǒng)分離純化，從藥蜀葵莖葉中鑒定了24個(gè)化合物，其中有23個(gè)化合物（除化合物17）為首次從藥蜀葵中被發(fā)現(xiàn)；研究結(jié)果豐富了藥蜀葵中化合物類型。

表1 23個(gè)化合物對(duì)α-糖苷酶和5-脂氧合酶的體外抑制活性結(jié)果

圖1 化合物18 (A、B)、19 (C) 和24 (D) 對(duì)α-葡萄糖苷酶和5-脂氧合酶的體外抑制活性測試

α-葡萄糖苷酶是降低餐后血糖的有效分子靶標(biāo)，有研究報(bào)道多酚類化合物對(duì)α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制活性[32]，而多羥基取代的類黃酮是有效的α-葡萄糖苷酶抑制劑，在A環(huán)的5和7或8位、B環(huán)的3和4位和C環(huán)3位的羥基化，以及C環(huán)2、3位的雙鍵對(duì)黃酮類化合物的抑制活性至關(guān)重要[33]。本課題組之前發(fā)現(xiàn)從藥蜀葵莖葉中富集純化得到的總黃酮具有潛在的體外抑制α-葡萄糖苷酶活性[31]。在本研究開展活性測試的化合物中，相較于陽性對(duì)照阿卡波糖，黃酮類化合物均表現(xiàn)出一定的抑制活性，其中化合物18、19和24表現(xiàn)出較好的活性。此前，已有研究報(bào)道化合物18是1個(gè)潛在的α-葡萄糖苷酶抑制劑[34]，化合物19由于其C環(huán)3位被羥基化，其活性最好。

5-脂氧合酶是從不飽和脂肪酸合成前列腺素和類花生酸的關(guān)鍵酶和介質(zhì)，其參與各種炎癥和過敏性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[35-36]。因此，5-脂氧合酶對(duì)于調(diào)節(jié)和消除炎癥過程至關(guān)重要。本研究在對(duì)5-脂氧合酶的體外活性測試中，發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物均表現(xiàn)出一定程度的抑制活性，其中化合物18和24表現(xiàn)活性較好，表明其具有潛在的抗炎作用。

本研究初步明確了藥蜀葵降血糖及抗炎的可能物質(zhì)基礎(chǔ)，為藥蜀葵莖葉的開發(fā)提供了科學(xué)參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Pakrokh Ghavi P. Modeling and optimization of ultrasound-assisted extraction of polysaccharide from the roots of[J]., 2015, 39(6): 2107-2118.

[2] Fahamiya N, Shiffa M, Aslam M,. Unani perspective of khatmi () [J]., 2016, 5(6): 357-360.

[3] Xue T T, Xu H B, Tang Z S,. Progress in chemical compositions and pharmacological activities of[J]., 2021, 5(2): 210002.

[4] Gudej J. Flavonoid compounds ofleaves. 1. Glucoside esters, monoglucosides [J]., 1985, 42(2): 192-198.

[5] Ali Shah S M, Akhtar N, Akram M,. Pharmacological activity ofL [J]., 2011, 5(24): 5662-5666.

[6] Xue T T, Yang Y G, Tang Z S,. Evaluation of antioxidant, enzyme inhibition, nitric oxide production inhibitory activities and chemical profiles of the active extracts from the medicinal and edible plant:[J]., 2022, 156: 111166.

[7] Yu Z Y, Han C Y, Yu B,. Taxonomic characterization, and secondary metabolite analysis ofsp. nov.: A novel actinomycete with antifungal activity [J]., 2020, 8(1): 77.

[8] Wang X G, Li Q, Jiang S R,. Chemical composition and insecticidal property of(Koidz.) Walker (Family: Myrsinaceae) On(Diptera: Muscidae) [J]., 2017, 170: 70-78.

[9] Jin Q H, Lee C, Lee J W,. Chemical constituents from the fruits of[J]., 2012, 18(3): 200-203.

[10] Shimura Y, Oh K, Kon M,. Enzymatic synthesis of novel branched sugar alcohols mediated by the transglycosylation reaction of pullulan-hydrolyzing amylase II (TVA II) cloned fromR-47 [J]., 2011, 346(13): 1842-1847.

[11] Shen Y M, Mu Q Z. New furans fromchlorolepis [J]., 1990, 56(5): 472-474.

[12] Nikolov P Y, Yaylayan V A. Thermal decomposition of 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde (HMF) and its further transformations in the presence of glycine [J]., 2011, 59(18): 10104-10113.

[13] Willuhn G, Westhaus R G. Loliolide (calendin) from[J]., 1987, 53(3): 304.

[14] 徐秀麗, 印麗媛, 宋福行, 等. 海洋褐藻叉開網(wǎng)翼藻中的單萜成分研究 [J]. 海洋科學(xué), 2012, 36(10): 81-84.

[15] Shubina L K, Makar′eva T N, Denisenko V A,. 4-hydroxybenzaldehyde from the baikal sponge[J]., 2005, 41(1): 93-94.

[16] 林玉萍, 張旭, 虎春艷, 等. 核桃殼的化學(xué)成分 [J]. 食品工業(yè), 2020, 41(8): 300-303.

[17] Siddiqui B S, Kardar M N, Ali S T,. Two new and a known compound from[J]., 2003, 86(6): 2164-2169.

[18] Li L Z, Gao P Y, Song S J,. Monoterpenes and flavones from the leaves ofwith anticoagulant activities [J]., 2015, 12: 237-245.

[19] 朱虹, 唐生安, 秦楠, 等. 旋覆花中化學(xué)成分及其活性研究 [J]. 中國中藥雜志, 2014, 39(1): 83-88.

[20] Kim K H, Moon E, Kim H K,. Phenolic constituents from the rhizomes ofand their biological evaluation on antitumor and anti-inflammatory activities [J]., 2012, 22(19): 6155-6159.

[21] Gu Q, Zhang X M, Zhou J,. One new dihydrobenzofuran lignan from[J]., 2008, 10(5/6): 499-502.

[22] Miyakoshi M, Shirasuna K, Hirai Y,. Triterpenoid saponins ofleaves [J]., 1999, 62(3): 445-448.

[23] Wei Y, Xie Q Q, Fisher D,. Separation of patuletin-3-O-glucoside, astragalin, quercetin, kaempferol and isorhamnetin from(L.) kuntze by elution-pump-out high-performance counter-current chromatography [J]., 2011, 1218(36): 6206-6211.

[24] 黃麗杰, 劉偉, 崔永霞. 胡頹子葉化學(xué)成分的研究 [J]. 中成藥, 2015, 37(4): 796-800.

[25] 羅會(huì)畏. 辛夷化學(xué)成分及藥理活性研究 [D]. 武漢: 中南民族大學(xué), 2013.

[26] Plioukas M, Termentzi A, Gabrieli C,. Novel acylflavones fromssp. syriaca [J]., 2010, 123(4): 1136-1141.

[27] Gantimur D, Syrchina A I, Semenov A A. New glycosides from plants of the genus[J]., 1986, 22(1): 32-35.

[28] Nganou B K, Mbaveng A T, Fobofou S A T,. Furoquinolines and dihydrooxazole alkaloids with cytotoxic activity from the stem bark of[J]., 2019, 133: 193-199.

[29] Vijayalakshmi A, Geetha M. Anti-psoriatic activity of flavonoids fromleaves using the rat ultraviolet B ray photodermatitis model [J]., 2014, 24(3): 322-329.

[30] Vassallo A, Cioffi G, De Simone F,. New flavonoid glycosides fromand their antioxidant activity [J]., 2006, 1(12): 1089-1095.

[31] 薛濤濤, 唐志書, 孫強(qiáng), 等. 藥蜀葵中總黃酮提取工藝優(yōu)化及其生物活性研究 [J]. 中南藥學(xué), 2022, 20(2): 334-339.

[32] Robak J, Gryglewski R J. Bioactivity of flavonoids [J]., 1996, 48(6): 555-564.

[33] Proen?a C, Freitas M, Ribeiro D,. α-Glucosidase inhibition by flavonoids: Anandstructure-activity relationship study [J]., 2017, 32(1): 1216-1228.

[34] Yuca H, ?zbek H, Demirezer L ?,.-Tiliroside: A potent α-glucosidase inhibitor from the leaves ofL [J]., 2021, 188: 112795.

[35] 蔡蕭君, 李宇, 胡楊, 等. 基于血液代謝組學(xué)技術(shù)的甲氨蝶呤抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制研究[J]. 世界中醫(yī)藥, 2021, 16(2): 242-248.

[36] Steinhilber D, Hofmann B. Recent advances in the search for novel 5‐lipoxygenase inhibitors [J]., 2014, 114(1): 70-77.

Chemical constituents from arial part ofand their inhibition activitiestoward α-glucosidase and 5-lipoxygenase

XUE Tao-tao1, TANG Zhi-shu1, 3, DUAN Jin-ao2, RUAN Kai-hua1, YANG Yuan-gui1, SONG Zhong-xing1, XU Hong-bo1

1. Shaanxi Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization, State Key Laboratory of Research and Development of Characteristic Resources of Qin Medicine, Shaanxi Institute of Traditional Chinese Medicine Industry, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712083, China 2. Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization of Jiangsu Province, Jiangsu Key Laboratory for Traditional Chinese Medical Formula Research, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China 3. Graduate School of China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China

To study the chemical constituents from aerial part ofand their inhibition activitiestoward α-glucosidase and 5-lipoxygenas.Chemical constituents were separated and purified by column chromatography on D101 macroporous adsorption resin, silica gel, MCI gel, Sephadex LH-20, and semi-preparative RP-HPLC. The structures were characterized via spectroscopic data analysis. The inhibitory activities of the compounds against α-glucosidase and 5-lipoxygenasewere measured to evaluate its hypoglycemic and anti-inflammatory effects.Twenty-four compounds were isolated and identified as adenosine (1), leonuriside A (2), benzyl--βglucopyranoside (3), meso-erythritol (4), 5-hydroxymethyl- 2-furancarboxaldehyde (5), 1-[5-(hydroxymethyl) furan-2-yl] ethenone (6), loliolide (7), isololiolide (8), 4-hydroxybenzaldehyde (9), methyl 4-hydroxybenzoate (10), vomifoliol (11), (6,7,9)-roseoside (12), dihydrosyringenin (13), 3-(3,4,5-trimethoxyphenyl) propan-1-ol (14), dihydrodehydrodiconifenyl alcohol (15), oleanolic acid 3--βglucopyranoside (16), astragalin (17),-tiliroside (18), biondnoid I (19), apigenin 7--(6---coumaroyl-βglucopyranoside) (20), diosmetin 7--βglucopyranoside (21), tilianin (22), formononetin 7-glucoside (23), acacetin 7--(6--coumaroyl)-βglucopyranoside (24). The results of the bioactivity test showed that three of the 24 compounds (18, 19, 24) showed significant enzyme inhibitory activity against α-glucosidase [IC50values: (12.2 ± 1.3) μmol/L, (2.8 ± 0.6) μmol/L and (31.1 ± 3.9) μmol/L] and two compounds (18, 24) had significant enzyme inhibitory activity against 5-lipoxygenase with IC50values of (34.76 ± 4.3) μmol/L and (25.37 ± 2.4) μmol/L.Compounds 1—16, 18—24 were isolated fromfor the first time. Furthermore, it was found that compounds have great inhibitory activities toward α-glucosidase (18, 19, 24) and 5-lipoxygenase (18, 24), which show potential hypoglycemic activity and anti-inflammatory activity.

Linn.; flavonoid; α-glucosidase; 5-lipoxygenase;-tiliroside; biondnoid I; tilianin

R284.1

A

0253 - 2670(2023)10 - 3060 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.10.003

2023-01-08

陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目（2016KTTSSF01-06-01）；陜西省青年科技新星項(xiàng)目（2020KJXX-069）；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)基金項(xiàng)目(CARS-21）

薛濤濤（1994—），男，碩士，研究方向?yàn)橹兴幩巹?。Tel: 18729079884 E-mail: xtt1221@email.sntcm.edu.cn

許洪波（1987—），副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥藥效物質(zhì)研究。Tel: (029)38182203 E-mail: xhb2005@sntcm.edu.cn

[責(zé)任編輯 王文倩]