陳詩敏，吳雪茹，黃曉冰，袁偉彬

（1.廣州中醫(yī)藥大學第三臨床醫(yī)學院，廣東 廣州 510378；2.廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510378）

溫通凝膠貼膏由補骨脂、蛇床子、當歸、續(xù)斷、覆盆子、遠志、狗脊、丁香、安息香、辣椒、獨活、羌活、干姜共13味中藥組成，是我院名老中醫(yī)劉慶思教授的經(jīng)驗方，并在20世紀90年代初被批準注冊為廣州中醫(yī)藥大學附屬骨傷科醫(yī)院制劑。溫通膏原是凝膠劑[1]，質(zhì)地相對清稀，主要用法為在患處涂抹，在使用過程中會在皮膚上殘留藥渣，容易被衣物搽拭帶走，導致藥物吸收減少，影響療效。凝膠貼膏主要指將原料藥與一定比例的親水性基質(zhì)經(jīng)過充分混合均勻，然后將混和好的基質(zhì)涂覆于背襯的膏劑材料上而制備成的一種貼膏制劑[2]，有背襯層保護膏體，且膏體軟硬適中，不易污染衣物。筆者采用正交試驗設計對基質(zhì)組方進行優(yōu)化，將其研制成凝膠貼膏，以期在臨床使用中發(fā)揮更好療效。同時建立補骨脂素和異補骨脂素的含量測定方法，便于進行質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器 德國賽多利斯BL600電子天平（深圳市泰立儀器儀表有限公司）；華凌BCD-208GSH冰箱（廣州美的華凌冰箱有限公司）；JA1103型電子分析天平（上海凱鴻誠稱重設備有限公司）；CZY-G初黏性測試儀（濟南新準儀器設備有限公司）；B20萬能攪拌機（廣東力豐機械制造有限公司）；JST-150滾刀式水凝膠涂布機（泉州市廣隆機械設備有限公司）；持黏性測試儀（醫(yī)院自制）；剝離強度試驗機（濟南賽成電子科技有限公司）。

1.2 試藥 溫通凝膠貼膏中藥藥材[國藥集團馮了性（佛山）藥材飲片有限公司]；藥用級聚丙烯酸鈉（NP-700，日本昭和電工株式會社，批號：171370A）；乙二胺四乙酸二鈉（EDTANa2，佛山市宇志精細化工產(chǎn)品有限公司，批號：20101115）；甘油（濰坊晨星化工科技生產(chǎn)甘油公司，批號：20220221）；酒石酸（山東尊宏生物科技有限公司，批號：20110615）；甘羥鋁（湖北康明德醫(yī)藥化工有限公司，批號：10061061）；高嶺土（廣州玖泰生物科技有限公司，批號：20211207）；卡波姆（廣州齊信藥業(yè)科技有限公司，批號：C03220220202）；三乙醇胺（德旭新材料(廣州)股份有限公司，批號：20211202）；聚山梨酯-80（河北墨星生物科技有限公司，批號：F104C220101）；冰片（福建南平青松化工有限公司，批號：220103）；薄荷腦（黃山天目薄荷藥業(yè)，批號：211015）；樟腦（湖北美林藥業(yè)，批號：12103002）；松節(jié)油（湖南爾康制藥股份有限公司，批號：0006220210901）；月桂氮卓酮（湖北科捷制藥有限公司，批號：211102）；補骨脂素對照品（南京道斯夫生物科技有限公司，批號：110739-201617）；異補骨脂素對照品（武漢睿辰標物科技有限公司，批號：110739-201614）；藥油、浸膏（根據(jù)制劑處方比例制備，見“2.2”）。

2 方法和結(jié)果

2.1 正交試驗[3]優(yōu)化制劑基質(zhì)組方 通過預實驗確定處方中甘油、EDTA-Na2和卡波姆的用量。采用L9（34）正交試驗法對不同比例的NP-700、高嶺土、甘羥鋁和中藥進行了試驗。以不同比例的凝膠貼膏的涂布指標、成型指標，成型凝膠貼膏的初黏力、持黏力、剝離強度作為評價指標，評價不同比例凝膠貼膏的質(zhì)量。根據(jù)各指標的影響水平的差異，將涂布指標和成型指標定為25分、初黏力定為10分、持黏力定為20分、剝離強度定為20分，總分合計100分。經(jīng)綜合評價后，選取得分最高的含藥量和最佳的制劑成型配方并進行驗證。（見表1）

表1 制劑配方正交設計表

2.2 溫通凝膠貼膏的制備 在前期已通過大量研究[3]，確定溫通膏方最佳提取工藝為12倍量50%乙醇回流提取3次，每次120 min，提取液濃縮成相對密度為1.2（60 ℃）浸膏，照配方設計的量，稱取卡波姆原料18 g，加入一定體積的純化水使卡波姆膨脹并過夜，而后在卡波姆液體中加入三乙醇胺40 g攪拌，制成凝膠狀備用。另外，將NP-700、高嶺土、甘羥鋁、EDTA-Na2與1 125 g甘油充分混合，攪拌均勻后備用；往前述液體中加入規(guī)定量的中藥浸膏、藥油，并逐步加入聚山梨酯-80 40 g，酒石酸2 g，充分攪拌均勻，最后一步，加入前述制備的卡波姆和三乙醇胺混合凝膠，經(jīng)充分攪拌形成黏度適中的藥料；涂抹，切割成（9 cm×12 cm）/貼；放置48 h固化成型，即得溫通凝膠貼膏。

2.3 溫通凝膠貼膏的評價指標[4]以成型凝膠貼膏的綜合得分（包括涂布指標、成型指標、初黏力、持黏力、剝離強度）作為評價指標，評價不同比例下凝膠貼膏的質(zhì)量。根據(jù)各指標的不同影響程度，確定涂布指標和成型指標分別為25分，初黏力為10分，持黏力為20分，剝離強度為20分，總分合計100分。

2.3.1 涂布指標評價[5]對凝膠貼膏的涂展性、拋錨性、布卷縮（滿分10分）、外觀完整性（滿分5分）、色澤均勻度（滿分5分）、涂布速度（滿分5分）進行評價。

2.3.2 晾干48 h成型指標[6]對凝膠貼膏外觀完整性（滿分5分）、色澤均勻度（滿分5分）、紙能否掀開（滿分5分）、拇指按壓殘留性（滿分5分）、黏彈性（滿分5分）進行評價。

2.3.3 初黏力指標評價 參見《中華人民共和國藥典》（2020年版）通則0952第一法[4]。測量值由鋼球的滾動距離計算，單位為厘米。測量的最小值（初黏力最大）為10分，其余與之相比計算初黏力得分。

2.3.4 持黏力指標評價 參見《中華人民共和國藥典》（2020年版）通則0952第二法[4]。它是通過膏體從測試板上脫落的時間及砝碼質(zhì)量計算，單位：時間（min），質(zhì)量（g）。以測得質(zhì)量和時間的最大值（持黏力最大）為20分，其余與之相比計算持黏力得分。

2.3.5 剝離強度的測定 參見《中華人民共和國藥典》（2020年版）通則0952第三法[4]。它是通過膏體從測試板上脫落的時間及砝碼質(zhì)量計算，單位：時間（min），質(zhì)量（g）。以測得質(zhì)量和時間的最大值（剝離強度最大）為20分，其余與之相比計算剝離強度得分。

2.4 實驗結(jié)果 從9個正交設計的實驗成品中獲得了不同的綜合感官評分、初始黏度評分和剝離強度評分。以每種成品的總得分為指標評估相應的處方比例，并使用正交輔助軟件輔助分析。（見表2）

表2 溫通凝膠貼膏的評價指標

根據(jù)表2中的極差范圍，通過視覺分析，各因素對總分的影響為A>D>B>C；為了驗證視覺分析的可靠性，對實驗數(shù)據(jù)進行了方差分析。（見表3）

表3 溫通凝膠貼膏評價指標的方差分析

綜上所述，NP-700（A）、高嶺土（B），甘羥鋁（C），中藥量（D）4個因素最優(yōu)選工藝是A3B1C1D1，即NP-700∶高嶺土∶甘羥鋁∶中藥量=300∶300∶10∶1 000（質(zhì)量比）。

2.5 驗證實驗 通過正交試驗優(yōu)化比例組成，按最優(yōu)配比制備溫通凝膠貼膏劑，稱取18 g卡波姆原料，加入一定體積的純化水，使卡波姆完全溶脹，再加入40 g三乙醇胺攪拌成凝膠狀，備用。將NP-700 300 g、高嶺土300 g、甘羥鋁10 g和EDTA-Na22 g與1 125 g甘油充分混合，攪拌均勻后備用；往前述液料中加入中藥浸膏611 g，藥油556 g，并逐步加入聚山梨酯-80 40 g，酒石酸2 g，充分攪拌均勻，最后加入前述制備的卡波姆和三乙醇胺混合凝膠，攪拌使其逐步交聯(lián)；涂布，切割，放置48 h固化成型；制備3批樣品。分別測定了溫通凝膠貼劑的涂布指標、成型指標、初黏力、持黏力、剝離強度，并計算了總得分。結(jié)果表明，根據(jù)優(yōu)化的工藝條件制備的貼劑具有優(yōu)異的性能和較高的綜合得分。（見表4）

2.6 HPLC法測定溫通凝膠貼膏中的補骨脂素和異補骨脂素

2.6.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-SP C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.02 mol/L∶磷酸二氫鈉溶液（28∶72）；檢測波長：246 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL。

2.6.2 專屬性考察 混合對照品溶液的制備：取補骨脂素、異補骨脂素對照品適量，精密稱定，甲醇定容，制備成每1 mL溶液含補骨脂素、異補骨脂素各200 μg的混合對照品貯備液，置4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

供試品溶液的制備：取溫通凝膠貼膏供試品，除去防黏層，刮取膏體10.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加甲醇40 mL，超聲（150 W，40 kHz）提取2次，每次1 h，合并2次提取液，殘渣加甲醇洗滌3次，每次10 mL，洗滌液并入提取液，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，0.45 μL微孔濾膜過濾，即得。按處方制備工藝制備不含補骨脂藥材的陰性貼膏，同法制得陰性對照品溶液。

分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，進樣測定，記錄色譜圖，陰性對照品在對照品色譜峰相應保留時間未出現(xiàn)雜質(zhì)峰，其他成分對被測成分無明顯干擾，色譜專屬性好。（見圖1）

圖1 HPLC 色譜圖

2.6.3 線性關(guān)系考察 在前期的研究[2]中，已測得補骨脂素線性回歸方程為Y=87 764.3X+33 931.9（r=0.999 9），異補骨脂素線性回歸方程為Y=80 044.6X+21 533.2（r=0.999 9）。結(jié)果表明補骨脂素、異補骨脂素在1.6～56.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6.4 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，記錄每次峰面積。結(jié)果補骨脂素、異補骨脂素色譜峰面積RSD分別為0.937%、0.912%，表明儀器精密度良好。

2.6.5 重復性試驗 按照“2.6.2”項下方法平行制備供試品溶液6份，分別精密吸取10 μL進樣測定，記錄色譜峰面積。結(jié)果補骨脂素、異補骨脂素封面積RSD分別為2.115%、2.032%，表明該方法重復性良好。

2.6.6 穩(wěn)定性試驗 取混合對照品溶液室溫下放置，分別于0、2、4、8、12、24 h精密吸取10 μL進樣測定，記錄色譜峰面積。結(jié)果補骨脂素、異補骨脂素色譜峰面積RSD分別為1.214%、1.342%，表明補骨脂素與異補骨脂素在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.7 加樣回收率試驗 精密量取溫通膏方提取液9份，每份2.5 mL，分3組分別加入已知濃度的混合對照品溶液0.8、1.0、1.2 mL，按供試品制備方法同法制備，進樣測定，得到補骨脂素、異補骨脂素的平均回收率分別為100.85%、101.33%，RSD分別為2.01%、1.98%。

2.6.8 樣品測定 取3個批次溫通凝膠貼膏，按“2.6.2”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，記錄峰面積，3批供試品補骨脂素、異補骨脂素含量的平均值分別為11.134 μg/g，11.104 μg/g。3批貼膏各項結(jié)果的RSD均小于2%，因此，該方法測定溫通凝膠貼膏中補骨脂素和異補骨脂素含量穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性佳。

3 討 論

中藥凝膠貼膏作為我院的特色制劑，已研制出一系列適用臨床、深受患者歡迎的品種[7-10]。本研究在多年生產(chǎn)經(jīng)驗上進行，優(yōu)化成型的產(chǎn)品易涂布，外形平整美觀，揭貼時既不會有很大的牽拉感使皮膚感到不適，又不會因為黏性不足導致膏體易于脫落。溫通膏原為凝膠劑，用于涂抹患處，治療時間受限制，把劑型開發(fā)成凝膠貼膏劑，貼敷時間充足，能最大限度發(fā)揮療效。

本實驗以部分被中和的聚丙烯酸鈉（NP-700）為骨架材料，和甘羥鋁發(fā)生反應交聯(lián)后形成水溶性骨架結(jié)構(gòu)。甘羥鋁用量過多會導致膏體內(nèi)聚力過大[11]，膏體攪動困難，從而導致涂布后布卷縮，甚至無法完成涂布，用量不足則兩者之間交聯(lián)不夠，膏體無法形成三維網(wǎng)絡架構(gòu)，或成型時間加長。本研究甘羥鋁用量在一個合適范圍，所制備的凝膠貼膏黏性好，成型時間適中，易于涂布。高嶺土作為填充劑，不與物料組分起不良作用，優(yōu)選用量能使主藥均勻分散，并在一定程度上保持膏體剛性[12]。本實驗中藥量以比重為1.2的浸膏形式加入，浸膏含有一定水分，流動性強，無法填充貼膏骨架結(jié)構(gòu)，高嶺土能使浸膏充分分散，賦予藥物剛性，與骨架材料膠合，改善膏劑性能，膏體色澤均勻，光滑細膩。

制劑有良好的成型性和美觀的外表可令患者使用舒適。制劑的有效成分含量是其顯效的基礎(chǔ)，所以有效成分的測定也至關(guān)重要，本研究建立的含量測定方法，穩(wěn)定可行，可用于定量鑒別。

中藥凝膠貼膏因具有載藥量大、貼敷舒適[13-14]、能反復揭帖、不污染衣物等獨特優(yōu)勢備受關(guān)注，本研究使用的所有基質(zhì)輔料均在常溫下可溶解混合，制備工序適合工業(yè)化生產(chǎn)，所建立的含量測定方法專屬性好，可為以后更好應用于臨床打下一定基礎(chǔ)。