劉曉強(qiáng)，付金鳳，魯 涓

（常州市食品藥品纖維質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，江蘇 213102）

注射用奧美拉唑臨床多作為當(dāng)口服療法不適用時(shí)十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎及Zollinger-Ellison 綜合征的替代療法，臨床效果顯著，應(yīng)用十分廣泛［1-3］。注射用奧美拉唑（推注型）配有專用溶媒，溶媒中含有聚乙二醇400（PEG400）以及pH 調(diào)節(jié)劑等。PEG400 與生物膜具有良好的組織相容性和親和性，可顯著提高藥物在體內(nèi)的血藥濃度，是一種常用的保濕劑增溶劑，多用于口服液、滴眼液、注射液液體制劑等［4］。但靜脈注射PEG400 可導(dǎo)致溶血反應(yīng)，因此明確該溶媒中PEG400 含量對(duì)藥物安全性研究具有重要意義。

1 儀器與試藥

1.1 試藥 PEG400 對(duì)照品（批號(hào)20191009，南京威爾化工有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水：去離子純凈水（自制）；注射用奧美拉唑（推注型）來源于4 個(gè)廠家：批號(hào)A102541、A102542、A102543 來源生產(chǎn)企業(yè)A（原研廠家），批號(hào)B114837、B114838、B114839 來源于生產(chǎn)企業(yè)B，批號(hào)V137625、V137626、V137627 來源于生產(chǎn)企業(yè)C，批號(hào)X342684、X342685、X342686 來源于生產(chǎn)企業(yè)D。

1.2 儀器 電子天平：METTLER TOLEDO XS105DU；高效液相色譜儀：島津LC-20A+示差檢測器；Milli-Q 純水機(jī)（美國Merck）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為PL aquagel OH 20（300 mm×7.5 mm，5 μm）色譜柱1 及PL aquagel OH 20（300 mm×7.5 mm，8 μm）色譜柱2，流動(dòng)相為水，柱溫為45 ℃，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣量為10 μl，檢測器溫度為40 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照溶液的制備

2.2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取PEG400 對(duì)照品約40 mg，置10 ml 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為4 mg/ml 的對(duì)照品溶液。

2.2.1.2 線性溶液的制備 精密稱取PEG400 對(duì)照品約10 g，置100 ml 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為100 mg/ml 的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。依次取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液適量2、3.2、2、4.8 和3 ml，分別置100、100、50、100 和50 ml 量瓶中，加水逐級(jí)稀釋配制成含PEG400 濃度分別為2、3.2、4、4.8 和6 mg/ml 的系列溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品2 ml，置200 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得。

2.2.3 系統(tǒng)適用性溶液的制備 同對(duì)照品溶液的制備方法制備。

2.3 專屬性試驗(yàn) 取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對(duì)照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，采集色譜圖。結(jié)果表明，空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液均未在待測成分PEG400 處出峰，未干擾檢測。見圖1。

圖1 空白溶劑（A）溶媒（B）對(duì)照品（C）供試品（D）色譜圖

2.4 線性試驗(yàn) 按“2.2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以對(duì)照品峰面積（Y）對(duì)濃度（X）作權(quán)重回歸計(jì)算，結(jié)果如下：Y=58 875X+3 069（r=0.999 99）。結(jié)果表明：PEG400在2.0～6.0 mg/ml 的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，符合要求。

2.5 檢測限與定量限 定量限溶液的制備方法：精密量取標(biāo)準(zhǔn)曲線1 溶液5 ml，置50 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得（0.2 mg/ml）。取上述溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果表明PEG400 的信噪比為17.7，定量限為0.2 mg/m（l進(jìn)樣量為10 μl），滿足檢測要求。檢測限溶液的制備方法：精密量取標(biāo)準(zhǔn)曲線1 溶液4 ml，置100 ml 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得（0.08 mg/ml）。取上述溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果表明PEG400 的信噪比為6.9，檢測限為0.08 mg/m（l進(jìn)樣量為10 μl），滿足檢測要求。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品（批號(hào)為B114839）溶液6 份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測得含量依次為402.46、400.12、402.60、400.49、401.64 和399.66 mg/ml，均值為401.16 mg/ml，RSD 為0.7%，重復(fù)性良好。

2.7 中間精密度試驗(yàn) 由3 位實(shí)驗(yàn)人員分別于3 d按“2.2.1.1”及“2.2.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液各1 份以及供試品（批號(hào)為B114839）溶液各6 份，分別采用儀器1、2、3 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測得含量依次為402.46、400.12、402.60、400.49、401.64、399.66、418.82、414.52、409.51、414.51、417.74、409.26、406.44、406.22、408.95、405.88、406.94 和406.25 mg/ml，均值為407.33 mg/ml，計(jì)算得RSD 為1.5%，該檢測方法中間精密度良好。

2.8 準(zhǔn)確度（回收率）試驗(yàn) 依次精密稱取PEG400對(duì)照品320、400 和480 mg，分別置100 ml 量瓶中，精密加入不含PEG400 的溶媒1 ml，搖勻，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，平行制備3 份。依次取上述溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果PEG400 低、中、高不同濃度溶液準(zhǔn)確度均在100%左右，均值為100.33%，RSD 為0.4%。平行性良好，該方法準(zhǔn)確度良好。見表1。

表1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.9 耐用性試驗(yàn)

2.9.1 柱溫耐用性 依次改變柱溫（40 和50 ℃），取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對(duì)照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.9.2 流速耐用性 依次改變流速為0.8 和1.2 ml/min，取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對(duì)照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.9.3 儀器耐用性 依次采用waters2695+2414 示差檢測器舊款、waters2695+2414 示差檢測器新款，均使用色譜柱1，取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對(duì)照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.9.4 色譜柱耐用性 依次采用色譜柱1、色譜柱2、色譜柱1 和色譜柱2 串聯(lián)，采用儀器3 取空白溶劑水、不含PEG400 的溶媒溶液（制法同樣品溶液）、對(duì)照品溶液以及樣品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，采集色譜圖。PEG400 與相鄰色譜峰之間的分離度符合要求。

2.10 樣品測定 取4 個(gè)廠家12 個(gè)批次注射用奧美拉唑鈉樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果各廠家注射用奧美拉唑鈉專用溶媒中PEG400 含量均在390 mg/ml 左右。見表2。

表2 4 家生產(chǎn)企業(yè)樣品測定結(jié)果（n=2） mg/ml

3 討論

仿制藥一致性評(píng)價(jià)要求仿制藥與原研制劑質(zhì)量一致，即處方無差異［5-8］。處方無差異即處方成分和含量均無差異。就注射用奧美拉唑鈉（推注型）這個(gè)品種，其專用溶媒中的PEG400 就是一致性評(píng)價(jià)關(guān)注的重點(diǎn)和難點(diǎn)之一。

PEG400 屬于大分子化合物，日常使用的C18、C8柱等均無法用于分析該化合物，目前尚無適用性較強(qiáng)的液相色譜檢驗(yàn)方法。本試驗(yàn)采用的是凝膠滲透色譜（GPC）/體積排阻色譜（SEC）柱，結(jié)合高效液相色譜法及示差檢測器，建立了可以用于定量分析注射用奧美拉唑鈉（推注型）專用溶媒中PEG400 含量的方法。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用中國食品藥品檢定研究院的PEG400對(duì)照品（供分子量與分子分布測定用）在現(xiàn)有試驗(yàn)條件下進(jìn)樣，可以出3 個(gè)色譜峰（分別對(duì)應(yīng)3 個(gè)分子量的PEG400），推測該方法可以用于PEG400 的分子量與分子分布測定。

關(guān)于色譜柱的沖洗和存放，本試驗(yàn)用的色譜柱最高僅能耐受50%甲醇水溶液，故在使用完色譜柱沖洗時(shí)，請(qǐng)避免使用常規(guī)柱沖洗方法，避免對(duì)色譜柱造成不可逆損害。官方建議的色譜柱保存條件是0.02%疊氮化鈉溶液，若無法滿足，也可保存在10%甲醇溶液中，若保存在10%甲醇溶液中，再次使用時(shí)需用足量的水沖洗該色譜柱以充分恢復(fù)柱效。

綜上所述，本試驗(yàn)建立了注射用奧美拉唑溶媒中PEG400 的HPLC-RID 測定方法，并考查了其專屬性、線性、重復(fù)性、中間精密度、回收率、耐用性等，考查項(xiàng)目均符合檢測要求，可用于注射用奧美拉唑溶媒中PEG400 的含量測定。