杜銀蘋，董國華，李菲，耿猛

徐州市第一人民醫(yī)院全科醫(yī)學科，江蘇徐州 221000

冠心?。╟oronary heart disease, CHD）在臨床具有較高的發(fā)病率，且近年該病的患病率不斷上漲[1-2]。糖尿病是一種發(fā)生率較高的代謝性疾病，以高血糖為主要特征，持續(xù)發(fā)展會引起血管內(nèi)皮功能損傷，累及腎、心臟等多個器官[3-4]。2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus, T2DM）為糖尿病的常見類型，約占據(jù)90%以上，也是引發(fā)心血管疾病的高危因素，故CHD合并T2DM發(fā)生率較高[5-6]。CHD與T2DM兩種疾病相互影響，形成惡性循環(huán)，繼而加劇患者病情，對生命安全造成眾多威脅。因此，于早期及時診斷CHD合并T2DM，并指導臨床制定科學規(guī)范化的治療措施，對于保障患者身心健康意義重大。隨著臨床對分子生物標志物研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)CHD合并T2DM疾病的發(fā)生、發(fā)展與分子生物標志物聯(lián)系緊密。基于此，本研究以2020年5月—2021年5月徐州市第一人民醫(yī)院收治的84例CHD合并T2DM患者為研究對象，分析微小RNA-92a（Micro RNA-92a, miR-92a）、糖化血紅蛋白（gly?cated hemoglobin, HbA1c）與內(nèi)皮抑素（endostatin,ES）在此類患者中的表達水平，探討三項指標與患者預(yù)后之間的聯(lián)系?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將本院收治的84例CHD合并T2DM患者納入觀察組，本院同期收治的65例單純CHD患者納入單純CHD組，同期于本院行體檢的70名健康體檢者設(shè)為對照組。對照組中男39名，女31名；年齡43~76歲，平均（60.89±7.17）歲。單純CHD組中男33例，女32例；年齡39~78歲，平均（59.95±7.78）歲。觀察組中男44例，女40例；年齡43~77歲，平均（61.46±6.51）歲。3組一般資料對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。研究經(jīng)醫(yī)學倫理委員會批準。同時，隨訪1年，觀察起點為出院日，終點為心血管不良事件發(fā)生，主要為全因死亡、靶病變血運重建、復(fù)發(fā)心絞痛等，把出現(xiàn)上述事件的觀察組患者納入預(yù)后不良組，反之為預(yù)后良好組。

1.2 納入與排除標準

納入標準：CHD經(jīng)冠脈造影檢查證實病情；T2DM臨床診斷符合《中國2型糖尿病防治指南（2020年版）》[7]中有關(guān)標準；所有研究對象納入均遵照自愿原則，依從性較高，簽署知情同意書；對照組均身體健康，無重大疾病。排除標準：存在精神疾病、認知、視聽或語言溝通障礙，難以配合研究者；合并嚴重肝腎功能不全者；為過敏體質(zhì)者；合并血液系統(tǒng)疾病者；存在酒精、藥物依賴史者；合并免疫系統(tǒng)與凝血功能紊亂者。

1.3 方法

標本采集：所有研究對象于入組后第2天清晨，采集其5 mL靜脈血于無菌試管內(nèi)，以3 000 r/min的速率離心10 min，獲取上層清液后，于-80℃環(huán)境下留存待檢。檢測方法：①miR-92a采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescence gnan?titative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）檢測，首先運用Trizol法提取血清樣品內(nèi)總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA；之后對miR-92a予以擴增，反應(yīng)體系共20 μL，反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性90 s，95℃變性30 s，62℃退火延伸30 s，72℃延伸15 s，共進行40個循環(huán)，最后以2-ΔΔCt法計算血清miR-92a相對表達量。②HbA1c、ES：兩項指標均采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測。

1.4 觀察指標

①3組miR-92a、HbA1c與ES表達對比。②預(yù)后良好組與預(yù)后不良組miR-92a、HbA1c、ES對比：隨訪1年，對比兩組miR-92a、HbA1c、ES表達水平。③miR-92a、HbA1c、ES單獨與聯(lián)合預(yù)測CHD合并T2DM預(yù)后的效能：繪制受試者工作曲線（receiver operating characteristic, ROC），分析3項指標單獨或聯(lián)合在預(yù)測患者預(yù)后中的臨床價值。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料符合正態(tài)分布，以(±s)表示，組間差異比較采用t檢驗，多組間比較以F檢驗；繪制ROC，以曲線下面積（AUC）評價：AUC≤0.5表明無預(yù)測價值；0.50.9表明預(yù)測價值較高。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 3組人群miR-92a、HbA1c、ES表達對比

觀察組 miR-92a、HbA1c、ES高于單純 CHD 組與對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 3組人群miR-92a、HbA1c、ES表達對比(±s)

表1 3組人群miR-92a、HbA1c、ES表達對比(±s)

組別對照組（n=70）單純CHD組（n=65）觀察組（n=84）F值P值miR-92a 0.84±0.13 1.23±0.26 1.89±0.45 211.262<0.001 HbA1c（%）4.29±0.78 5.35±1.01 11.78±2.12 575.725<0.001 ES（ng/mL）25.48±2.25 30.36±3.37 44.59±4.35 626.294<0.001

2.2 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者miR-92a、HbA1c、ES對比

預(yù)后不良組的miR-92a、HbA1c、ES高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者miR-92a、HbA1c、ES對比(±s)

表2 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者miR-92a、HbA1c、ES對比(±s)

組別預(yù)后良好組（n=58）預(yù)后不良組（n=26）t值P值miR-92a 1.45±0.36 1.95±0.51 5.147<0.001 HbA1c（%）9.87±1.28 13.75±3.03 8.284<0.001 ES（ng/mL）40.26±4.62 45.63±5.17 4.746<0.001

2.3 miR-92a、HbA1c、ES單獨與聯(lián)合預(yù)測CHD合并T2DM預(yù)后的效能比較

ROC結(jié)果顯示miR-92a、HbA1c、ES聯(lián)合預(yù)測患者預(yù)后的AUC高于3項指標單獨檢測。見表3、圖1。

表3 miR-92a、HbA1c、ES單獨與聯(lián)合預(yù)測CHD合并T2DM預(yù)后的效能比較

圖1 miR-92a、HbA1c、ES單獨與聯(lián)合預(yù)測CHD合并T2DM預(yù)后的ROC曲線圖

3 討論

T2DM屬臨床常見的慢性代謝類病癥，是引發(fā)心血管疾病的重要危險因素之一，可通過脂肪毒性、炎癥介質(zhì)等通路對機體的心血管功能構(gòu)成損傷[8-9]。CHD為T2DM的常見并發(fā)癥之一，伴隨人們生活壓力的上漲及飲食習慣的轉(zhuǎn)變，使得我國CHD合并T2DM患者數(shù)量持續(xù)增加[10-11]。CHD合并T2DM患者病情更為復(fù)雜，兩種疾病相互影響，并增加病死率[12]。近些由于臨床醫(yī)學技術(shù)的持續(xù)發(fā)展，使得CHD合并T2DM的治療手段取得長足進步，而探尋與CHD合并T2DM患者有關(guān)的分子生物標志物，明晰患者的病情與預(yù)后，對于指導臨床采取針對性治療至關(guān)重要。

miRNA是一類進化保守的短序列小RNA，存在多種生物學功能[13]。miR-92a是一類可以參與血管生成、細胞增殖分化等生理過程的非編碼單鏈RNA分子，在促進血管生長與損傷組織功能恢復(fù)方面具有一定的調(diào)節(jié)作用，在冠心病等心血管病癥的發(fā)生發(fā)展中亦至關(guān)重要。HbA1c為葡萄糖與血紅蛋白游離氨基之間產(chǎn)生的非酶促-糖化反應(yīng)的產(chǎn)物，其水平變化不受血糖濃度影響，且在血液內(nèi)濃度較為穩(wěn)定，可反映過去8~12周機體平均血糖值[14-15]。CHD合并T2DM患者心臟細胞的變化主要是患者代謝能力的反映，而T2DM患者葡萄糖攝取、氧化能力降低，繼而影響心肌收縮功能，造成心臟能量的利用效能下降[16]。同時，葡萄糖吸收水平的降低會加劇心肌缺血表現(xiàn)，對心肌缺血恢復(fù)進程造成一定影響，進一步加劇脂質(zhì)代謝紊亂情況，可見HbA1c在CHD合并T2DM患者表達水平相對較高。ES為機體內(nèi)部生成的一種強效血管生成抑制劑，為血管壁彈力纖維的重要組成，會阻礙內(nèi)皮細胞的遷移，誘導內(nèi)皮細胞凋亡，在內(nèi)皮細胞的粘附中發(fā)揮重要作用。ES與CHD關(guān)系密切，且作用復(fù)雜，CHD合并T2DM患者的冠脈鈣化、狹窄程度較為嚴重，故血清ES表達水平亦較高[17]。本研究結(jié)果顯示，觀察組miR-92a（1.89±0.45）、HbA1c、ES高于單純 CHD 組（1.23±0.26）與對照組（0.84±0.13）（P<0.05），表明在 CHD 合并T2DM患者機體內(nèi)miR-92a、HbA1c、ES呈高表達。張威等[18]研究顯示，CHD合并T2DM組患者的miR-92a（1.88±0.51）高于 CHD 組（1.25±0.31）與對照組（0.98±0.25）（P<0.05），與本研究結(jié)果類似。本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良組的miR-92a、HbA1c、ES高于預(yù)后良好組（P<0.05），表明預(yù)后不良患者miR-92a、HbA1c、ES表達水平更高。本研究 ROC 結(jié)果顯示：miR-92a、HbA1c、ES聯(lián)合預(yù)測患者預(yù)后的 AUC 0.909（95%CI：0.848~0.971）高于 3項指標的單獨檢測[0.776（95%CI：0.659~0.892）、0.860（95%CI：0.740~0.980）、0.795（95%CI：0.697~0.893）]，表明 miR-92a、HbA1c、ES聯(lián)合可有效預(yù)測CHD合并T2DM患者預(yù)后，從而指導臨床制定規(guī)范的治療方案，以增強病情控制效果，促使患者獲得良好預(yù)后。

綜上所述，miR-92a、HbA1c、ES在 CHD 合并T2DM患者血清內(nèi)呈高表達，且表達越高，患者預(yù)后越差，3項指標聯(lián)合檢測可為明確患者病情與預(yù)后提供更為可靠的參考依據(jù)，臨床應(yīng)用價值較高。