王 英，吳思超，李云飛，呂 平，尤 娜，胡湘玲，程 龍，陳庚超

（1.昆明海關(guān)技術(shù)中心，昆明 650228；2.黃埔海關(guān)技術(shù)中心，東莞 523071；3.上海愛(ài)博才思分析儀器貿(mào)易有限公司，上海 200335）

三七［Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen］是中國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材，同時(shí)也是保健食品，具有活血化瘀［1，2］、抗炎［3］、抗腫瘤［4］、抗血栓［5］、降血脂［6，7］、增強(qiáng)免疫力［8］等功效。為了提高三七的產(chǎn)量，除去三七生長(zhǎng)環(huán)境周?chē)碾s草，藥農(nóng)通常會(huì)使用除草劑胺苯磺隆（Ethametsulfuron）防治雜草危害，導(dǎo)致三七藥材中的胺苯磺隆殘留對(duì)人類(lèi)健康安全造成威脅。胺苯磺隆，又名油磺隆、菜王星，CAS 號(hào)為97780-06-8，分子式為C15H18N6O6S，是由美國(guó)杜邦公司20世紀(jì)80 年代開(kāi)發(fā)的磺酰脲類(lèi)長(zhǎng)效除草劑，其作用機(jī)理是抑制支鏈氨基酸合成中乙酰乳酸合成酶的活性［9］。胺苯磺隆對(duì)多種雜草都具有用量低、防效高、殺草譜廣、使用成本低等優(yōu)點(diǎn)，深受廣大用戶(hù)歡迎［10］。胺苯磺隆檢測(cè)方法包括超高效液相色譜法-串 聯(lián) 質(zhì) 譜（HPLC-MS/MS）法［11］、高 效 液 相 色 譜法［12］、分子印跡技術(shù)［13］等。

已有報(bào)道鮮見(jiàn)三七中胺苯磺隆殘留量不確定度評(píng)定，本研究分別依據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》［14］和JJF 1135—2005《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》［15］，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)三七中胺苯磺隆殘留量的不確定性進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)估各組分的不確定度貢獻(xiàn)值，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度進(jìn)行計(jì)算，為保障檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，促進(jìn)三七出口貿(mào)易提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品與試劑

三七，云南鴻翔一心堂藥業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司；胺苯磺?。兌?8.5%），壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司；甲醇、乙腈（色譜純），德國(guó)Merck 公司；乙酸銨（色譜級(jí)），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；冰醋酸、氯化鈉（分析純），西隴科學(xué)股份有限公司；QuEChERS 方法提取包（無(wú)水硫酸鎂與無(wú)水乙酸鈉的混合粉末，4∶1）、QuEChERS 中藥農(nóng)殘凈化管（無(wú)水硫酸鎂900 mg、N-丙基乙二胺300 mg、十八烷基硅烷鍵合硅膠300 mg、石墨化碳黑90 mg），日本島津公司。

1.2 儀器與設(shè)備

4500 型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)ABSCIEX 公司）；XS205DU 型分析天平（瑞士Mettler 公司）；Milli-Q 型純水系統(tǒng)（電導(dǎo)率為18.2 M?，美國(guó)Millipore 公司）；渦旋振蕩器（中國(guó)Wiggens 公司）；3K15 型高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma 公司）。

1.3 方法

1.3.1 儀器條件

1）色譜方法。Hypersil GOLD C18 色譜柱（100 mm×2.1 nm，1.8 μm）；液相流動(dòng)相流速設(shè)為0.3 mL/min；柱溫箱溫度設(shè)為40 ℃；進(jìn)樣體積為10 μL；液相流動(dòng)相A 為2 mmol/L 乙酸銨水溶液，流動(dòng)相B 為乙腈；具體流動(dòng)相洗脫方法見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相洗脫方法

2）質(zhì)譜方法。ESI 正離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）；駐留時(shí)間：50 ms；離子源溫度：500 ℃；霧化器壓力：35 psi；電噴霧電壓：4 500 V；離子對(duì)（m/z）：294.1/170.1（定性離子）、294.1/137.1（定量離子）；錐孔電壓：120 V；碰撞電壓：24、13 V。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱(chēng)取10 mg（精確至0.01 mg）胺苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解并定容至100 mL，得到質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL 的胺苯磺隆儲(chǔ)備液；用乙腈稀釋成質(zhì)量濃度為1 μg/mL 的外標(biāo)中間液，避光保存于4 ℃冰箱中。

工作溶液：從質(zhì)量濃度1 μg/mL 的外標(biāo)中間液中分別準(zhǔn)確吸取5、10、25、50、100 μL，用乙腈稀釋配制成胺苯磺隆工作液，最終質(zhì)量濃度分別為5、10、25、50、100 ng/mL。

1.3.3 樣品前處理 稱(chēng)取粉碎后過(guò)3 號(hào)篩（50 目）的三七粉末3 g（精確至0.000 1 g），置于50 mL 離心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，渦旋振蕩1 min，放置30 min，準(zhǔn)確加入乙腈15 mL，渦旋混勻，置振蕩器上劇烈振蕩（500 r/min）10 min，加入QuEChERS 方法提取包，立即搖散，再置于振蕩器上劇烈振蕩（500 次/min）10 min，離心（4 000 r/min）5 min，取上清液2 mL 放入QuEChERS 中藥農(nóng)殘凈化管中，渦旋1 min，離心（4 000 r/min）5 min，取上清液過(guò)濾，注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，按外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算。

1.4 數(shù)學(xué)模型

式中，X為三七中的胺苯磺隆殘留量（mg/kg）；c為樣液中胺苯磺隆的質(zhì)量濃度（mg/L）；v為三七樣品的最終定容體積（mL）；f為樣品前處理稀釋倍數(shù)；m為三七樣品稱(chēng)樣量（g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度主要來(lái)源

通過(guò)對(duì)樣品中胺苯磺隆殘留量檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)引入不確定度的主要來(lái)源包括：①標(biāo)準(zhǔn)品溶液配置；②試樣稱(chēng)重；③樣品測(cè)定過(guò)程中，由重復(fù)性引入；④高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀引入；⑤標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬合產(chǎn)生；⑥添加回收引入的不確定度［16］。

2.2 各分量不確定度的評(píng)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制引起的相對(duì)不確定度Urel（C）

1）由標(biāo)準(zhǔn)品純度引起的不確定度［17］。本試驗(yàn)使用的胺苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購(gòu)于壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司，其證書(shū)顯示純度為98.5%，擴(kuò)展不確定度為1.2%（k=2），因此，胺苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱(chēng)量引起的不確定度。使用十萬(wàn)分之一天平精密稱(chēng)取胺苯磺隆對(duì)照品10 mg（精確至0.01 mg）。由該分析天平的校準(zhǔn)證書(shū)可知，該天平的允許誤差為±0.5 mg，服從均勻分布，取包含因子

3）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程中產(chǎn)生的不確定度Urel（C3）。依據(jù)JJG 646—2006《移液器》［18］、JJG 196—2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》［19］，不確定度計(jì)算采用最大允許誤差，按均勻分布，包含因子k= 3，對(duì)不確定度開(kāi)展評(píng)價(jià)［20］，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程引入的不確定度

在本次標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程中由移液器和容量瓶帶來(lái)的不確定度合成為［16］：Urel（C3）=0.004 85。

綜合以上3 個(gè)不確定度分量，標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制引入的相對(duì)合成不確定度為Urel（C）=

2.2.2 樣品稱(chēng)量引入的相對(duì)不確定度Urel（m）樣品的稱(chēng)樣量為3 g 試樣（精確至0.01 g）。稱(chēng)量引入的不確定度，按照天平校準(zhǔn)證書(shū)，天平的最大允許誤差計(jì)算得到對(duì)不確定度為

2.2.3 試樣測(cè)量重復(fù)性引入的相對(duì)不確定度Urel(Sˉ)對(duì)相同樣品6 份，按照相同前處理操作后在相同液相色譜質(zhì)譜條件下進(jìn)行檢測(cè)，樣品中胺苯磺隆含量重復(fù)性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 試樣測(cè)量重復(fù)性結(jié)果

計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.216 41%，平均含量為50.424 2 μg/kg。因此，重復(fù)性測(cè)定引起的相對(duì)合成不確定度為=0.000 017。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel（Q）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與響應(yīng)值進(jìn)行擬合［16］，計(jì)算得到胺苯磺隆回歸方程及相關(guān)系數(shù)，Y=5 147.033 99X+79.368 20，相關(guān)系數(shù)r=0.995 33，其中截距a=79.368 20，斜率b=5 147.033 99，供試品溶液濃度平均值為50.424 2 μg/kg，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的殘差標(biāo)準(zhǔn)偏差SR為：

式（2）中，SR為擬合標(biāo)準(zhǔn)偏差，a為曲線截距，b為曲線斜率，ci為第i次根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的濃度；n為標(biāo)準(zhǔn)溶液的總測(cè)量次數(shù)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)測(cè)3 次，n=15；yi為第i次測(cè)得的色譜峰面積［21］。根據(jù)計(jì)算得到胺苯磺隆的標(biāo)準(zhǔn)偏差SR=639 260.25。

曲線擬合標(biāo)準(zhǔn)不確定度（UQ）計(jì)算公式為［16］：其 中SR為標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)差；p為樣品平行測(cè)定次數(shù)，p=6；b為曲線斜率；n=15；c為樣品溶液中胺苯磺隆的濃度為胺苯磺隆的平均濃度，ci為第i次根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的胺苯磺隆濃度。因此，

2.2.5 添加回收引入的不確定度Urel（R）取6 份空白三七樣品，分別加入0.05 mg/kg 的胺苯磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)［16］，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.66%，平均回收率為88.2%，

表4 試樣加標(biāo)回收結(jié)果（n=6）

2.3 相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

分別將各不確定度分量進(jìn)行合成［16］，得到：Urel0.034 3。樣品中胺苯磺隆平均含量為50.424 2 μg/kg，則 其 標(biāo) 準(zhǔn) 不 確 定 度 為U（X）=0.034 3×50.424 2=1.729 6 μg/kg。

2.4 擴(kuò)展不確定度評(píng)定

擴(kuò)展不確定度由合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度乘以包含因子，在95%的置信水平下，取包含因子k=2，則胺苯磺隆測(cè)量結(jié)果的相對(duì)擴(kuò)展不確定度為U=U（X）×k=1.729 6×2=3.459 2 μg/kg。胺苯磺隆含量X=（50.424 2±3.459 2）μg/kg，k=2。

3 小結(jié)

本研究分析了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定三七中胺苯磺隆殘留量的不確定度，通過(guò)計(jì)算給出了胺苯磺隆相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度。由評(píng)定結(jié)果可知，測(cè)量結(jié)果的不確定度主要由標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所引入，添加回收所引入的不確定度次之，其余各成分所引入的不確定度影響較低。因此，應(yīng)對(duì)日常檢測(cè)工作中的設(shè)備儀器定期進(jìn)行檢定校準(zhǔn)，嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)規(guī)程，以提升檢驗(yàn)水平和員工的檢測(cè)能力，來(lái)減小測(cè)量不確定度，從而保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。