麻文靜，嚴(yán)彩紅，趙曉旭，沈 君

北京商貿(mào)學(xué)校（北京市SPF技術(shù)研究與推廣中心），北京 100194

非洲豬瘟病是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病之一，也是我國Ⅰ類動(dòng)物傳染病[1]。隨著非洲豬瘟感染時(shí)間延長，出現(xiàn)感染后難以清除、發(fā)現(xiàn)新的弱毒株、潛伏期延長、癥狀不典型、短期內(nèi)難以發(fā)現(xiàn)等新特點(diǎn)，使得該病的防控形勢比較嚴(yán)峻。

1 病原特點(diǎn)

非洲豬瘟病毒歸屬于非洲豬瘟病毒科，僅1 個(gè)血清型，為單分子線狀的雙股DNA，有22 個(gè)基因型；基因組長度為170～190 kb[2]。其基因組長度在不同毒株之間，或者是同一毒株，不同代次之間，均呈現(xiàn)出多樣性。非洲豬瘟的基因可編碼200 多種蛋白質(zhì)，其中包含反轉(zhuǎn)重復(fù)區(qū)、共價(jià)閉合末端、發(fā)夾結(jié)構(gòu)等部分。非洲豬瘟病毒特征基因可編碼3 種酶（蛋白質(zhì)修飾酶、參與核苷酸、核酸代謝的酶）與2 種蛋白（分泌性蛋白、假定膜蛋白）[3]。

非洲豬瘟病毒粒子的繁衍速度很快，且其基因具有較高的突變頻率，進(jìn)而使得該病難以控制。同時(shí)，非洲豬瘟病毒對環(huán)境的適應(yīng)能力非常強(qiáng)，尤其是對低溫環(huán)境的抵抗力更強(qiáng)，如在5 ℃的血清中存活時(shí)間可達(dá)6年以上，但對于高溫環(huán)境抵抗力較弱，在56～60 ℃的環(huán)境中，持續(xù)30 min 以上即可滅活。非洲豬瘟的傳播媒介主要是鈍緣蜱。

2 傳播方式

非洲豬瘟病毒具有較為廣泛的傳播途徑，目前已知的循環(huán)傳播途徑有3 種：一是患病動(dòng)物之間的傳播循環(huán)。如非洲野豬、疣豬等感染非洲豬瘟以后與家豬接觸，導(dǎo)致病毒進(jìn)入家豬體內(nèi)，進(jìn)而感染。二是軟蜱等吸血昆蟲與家豬之間的傳播循環(huán)。軟蜱叮咬病豬，非洲豬瘟病毒通過血液進(jìn)入軟蜱體內(nèi)，可在軟蜱體內(nèi)存活8年以上，而且蜱之間也可相互傳播[4]；而攜帶非洲豬瘟的軟蜱再次通過叮咬健康家豬引起健康豬群感染。除了軟蜱之外，蚊虻等吸血昆蟲也可傳播。三是家豬之間傳播循環(huán)，家豬中帶毒豬與病豬時(shí)刻在向外排毒，同時(shí)病豬或者帶毒豬的肉類產(chǎn)品等均為該病的傳染源；通過直接或者間接與健康豬群接觸，引起豬群發(fā)病。

非洲豬瘟感染的有效距離為2 m。該病可通過消化道與呼吸道進(jìn)入豬只的體內(nèi)，前者是健康豬群接觸含有非洲豬瘟病毒的病豬的排泄物或飼料、飲水、設(shè)備等傳染源[5]，引起感染發(fā)??；后者主要是健康豬吸入含有非洲豬瘟病毒的飛沫而引發(fā)感染。

3 流行現(xiàn)狀

非洲豬瘟自2018年7月首次在遼寧省沈陽市某豬場被發(fā)現(xiàn)，隨后席卷我國大江南北，使我國生豬存欄量急速下降。但伴隨著國家隔離封鎖的政策以及豬場自身提高生物安全措施的實(shí)施，我國非洲豬瘟的暴發(fā)流行趨勢得到有效控制，降低了豬只的死亡率；2020年以后，該病逐漸發(fā)展為零星發(fā)生、無明顯臨床癥狀、低死亡率為主要特征的發(fā)病情況。中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部報(bào)告稱2020年湖北省、云南省及四川省等3 個(gè)地區(qū)發(fā)生非洲豬瘟疫情，均為省外輸入違規(guī)調(diào)運(yùn)生豬及其產(chǎn)品而引起[6]。2021年全國共報(bào)告發(fā)生非洲豬瘟疫情11 起，涉及8 個(gè)省份，撲殺生豬2 216 頭。目前，國內(nèi)非洲豬瘟仍然流行的關(guān)鍵因素有以下幾個(gè)方面：第一，非洲豬瘟具有很強(qiáng)的抗逆性；第二，非洲豬瘟的傳播方式比較復(fù)雜多樣；第三，利益驅(qū)使人類活動(dòng)成為其傳播的推動(dòng)作用；第四，養(yǎng)殖場傳統(tǒng)粗放式養(yǎng)殖模式以及對生物安全的認(rèn)識不足等。

4 診斷方法

4.1 臨床診斷

非洲豬瘟感染后，臨床上會表現(xiàn)出多種綜合癥，一般分為最急性、急性、慢性以及無癥狀。最急性一般表現(xiàn)為高溫（41～42 ℃），不吃、體表潮紅充血、發(fā)紺，1～4 d 內(nèi)死亡，發(fā)病率和死亡率達(dá)100%。而急性病例表現(xiàn)為皮膚潮紅、腸道出血、鼻腔出血，病死率為90%～100%。慢性病例主要表現(xiàn)為間歇熱、被毛粗亂、在耳、四肢腿內(nèi)側(cè)等部位皮膚壞死、潰瘍，關(guān)節(jié)腫大，生長受阻。剖檢后可見內(nèi)臟出血，主要是脾臟充血、壞死，腎臟有出血點(diǎn)，肝臟出血等癥狀[7]。但由于這些癥狀與豬皮炎與腎病綜合征、藍(lán)耳病、豬瘟的癥狀較為相似，難以鑒別；因此，需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷來確診。

4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

1）病原檢測。非洲豬瘟進(jìn)入豬機(jī)體后，在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)（主要是單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞）中進(jìn)行繁殖[8]，之后進(jìn)入血液和淋巴液，隨血液循環(huán)與淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散致全身[5]。但病毒分離OIE 要求必須在BSL-3 及以上生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行；而且病毒主要集中的組織有扁桃體、淋巴結(jié)、肺臟、肝臟、血液以及脾臟，感染初期選擇前3種組織，中后期在上述組織中均可分離到非洲豬瘟病毒[9]。而紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)的原理是非洲豬瘟病毒進(jìn)入機(jī)體后，會在豬的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面吸附，通過顯微鏡可觀察到特征性的“玫瑰花環(huán)”現(xiàn)象。本方法敏感性高、成本低廉，但周期長，并且目前已發(fā)現(xiàn)少量的“非血吸附”。雖然該方法敏感性高、成本低，但需要進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，周期長，而且現(xiàn)已分離出少量的非洲豬瘟病毒。因此，目前病毒分離與紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)常作為ELISA、PCR 或FAT 檢測結(jié)果為陽性病例的確診參考試驗(yàn)。

2）核酸檢測。實(shí)際臨床上應(yīng)用最為常用的檢測技術(shù)為有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測技術(shù)與環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等。PCR 操作主要有3 個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成，即變性、退火、延伸等，靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物是其特異性的關(guān)鍵。PCR 具有敏感性高、時(shí)間短及特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)；常用于血液、組織器官以及血清中的非洲豬瘟病毒基因組的檢測；特別是在感染初期，本檢測方法即可檢測出豬體內(nèi)的非洲豬瘟的病毒。該方法可檢測出已知的所有的非洲豬瘟的基因型（包括非血液吸附毒株和低毒力分離毒株），甚至是在滅活或者降解的樣品中也可檢測出該病毒基因。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測的原理是在PCR 反應(yīng)的體系中加入熒光標(biāo)記的基因，進(jìn)而產(chǎn)生熒光信號并進(jìn)行實(shí)時(shí)收集積累。最后繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。該方法具有靈敏度高、不易交叉污染、時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。

而環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是用于核苷酸擴(kuò)增的單管技術(shù)，針對靶基因設(shè)計(jì)多種特異性引物，在利用具有復(fù)制活性的鏈置換DNA 聚合酶，在60～65 ℃的等溫環(huán)境下，15～60 min 內(nèi)對靶序列進(jìn)行擴(kuò)增的核酸擴(kuò)增反應(yīng)[10]。該方法不需提取核酸，對精密儀器要求低，并且可減少因病毒單個(gè)基因突變造成的假陰性情況，還具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測結(jié)果可視化的優(yōu)點(diǎn)。

3）抗體/抗原檢測。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測范圍廣泛，因其特異性強(qiáng)、敏感性高、操作簡單，使得其成為臨床上實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測病毒抗體/抗原最為常見的檢測方法。本方法適用于大批量的檢測樣本，能夠及時(shí)快速地檢測出大群體內(nèi)非洲豬瘟病毒的抗體。另外，間接熒光抗體試驗(yàn)也可進(jìn)行抗體水平的檢測；是一種利用熒光標(biāo)記的抗體進(jìn)行血樣中抗體檢測的檢測技術(shù)。標(biāo)記的抗體與檢測樣本中病原抗體結(jié)合，在熒光顯微鏡下成像，進(jìn)而測定出樣本中的抗體。而側(cè)向流動(dòng)免疫色譜分析（試紙條法）可對抗原進(jìn)行檢測；本方法可直接檢測血液，進(jìn)而常用于現(xiàn)場檢測或者試驗(yàn)基礎(chǔ)條件不足的場所進(jìn)行檢測；本方法主要層析技術(shù)，即在纖維層上利用毛細(xì)管的虹吸效應(yīng)，使得樣品從添加孔移動(dòng)到層析材料上含有抗體的區(qū)域，如果含有相應(yīng)病毒，則與抗體結(jié)合，再結(jié)合顯色反應(yīng)，進(jìn)而短時(shí)間內(nèi)可直接獲得測試結(jié)果。

5 防控措施

5.1 加強(qiáng)引種檢測

無論是種豬還是斷奶仔豬，在引入本場之前應(yīng)做好非洲豬瘟的檢測，特別是種豬，需要間隔25 d，連續(xù)進(jìn)行2 次檢測，確定為陰性方可引進(jìn)。而斷奶仔豬需要對其母豬與自身進(jìn)行非洲豬瘟的檢測，確定為陰性后才能引入豬場。

5.2 進(jìn)場原料和人員檢測

在離豬場1～2 km 處建立臨時(shí)隔離倉庫與隔離點(diǎn)，進(jìn)場的所有原料均在此進(jìn)行中轉(zhuǎn)，提前7 d報(bào)備，使用過硫酸氫鉀等有效消毒劑進(jìn)行消毒處理48 h；之后進(jìn)行非洲豬瘟檢測，結(jié)果為陰性方可允許進(jìn)場。人員在此進(jìn)行洗澡消毒，更換衣服，隔離48 h，非洲豬瘟核酸檢測為陰性方可進(jìn)場。外來人員和車輛一律禁止進(jìn)入豬場。

5.3 銷售車輛消毒檢測

外運(yùn)生豬車輛在中轉(zhuǎn)點(diǎn)采用過硫酸氫鉀等消毒劑進(jìn)行全面消毒，同時(shí)檢測非洲豬瘟核酸，陰性方可靠近裝豬臺；而內(nèi)部車輛也進(jìn)行消毒處理，生豬運(yùn)到裝豬臺后，空車消毒后方可返回。同時(shí)，交易結(jié)束后對裝豬臺進(jìn)行徹底消毒，并進(jìn)行非洲豬瘟檢測，確保隔離措施到位。

5.4 發(fā)病處理

一旦發(fā)生非洲豬瘟，應(yīng)立即上報(bào)，及時(shí)無害化處理發(fā)病豬；豬場清場后，采用火堿、過硫酸氫鉀等有效消毒劑進(jìn)行全面徹底消毒，之后采用火焰噴槍等設(shè)備進(jìn)行火焰消毒；空欄6 個(gè)月以上方可裝豬。