朱普生,劉慧英,曹 澤,劉凱歌,李雪珍

(石河子大學農學院園藝系/特色果蔬栽培生理與種質資源利用新疆生產建設兵團重點實驗室,新疆石河子 832000)

0 引 言

【研究意義】番茄(Solanumlycopersicum)是廣為栽培蔬菜之一[1],含有多種維生素[2],近年來番茄產業(yè)逐漸成為了我國蔬菜產業(yè)的支柱之一,但同時種植中也面臨著土壤次生鹽漬化問題[3]。土壤鹽漬化是主要限制植物生產水平的非生物脅迫因素,會破壞植物的滲透壓平衡、離子平衡[4],并損傷細胞結構[5],影響植物對水分和養(yǎng)料的正常吸收與運輸,限制植物生長發(fā)育。土壤鹽漬化使番茄光合生產潛力難以充分發(fā)揮,影響產量與商品性和經濟效益[6]。研究鹽脅迫對番茄生長發(fā)育的影響及其耐鹽機制,對培育耐鹽抗鹽新品種,提高番茄生產產業(yè)產能具有重要意義。【前人研究進展】一氧化氮(nitric oxide,NO)是一種廣泛存在于植物體細胞中及細胞間的小型高活性氣體信號分子,參與植物的生長發(fā)育進程[7],如種子萌發(fā)[8]、植株生長衰老及果實成熟[9]。同時也在植物基因表達[10]、呼吸代謝[11]以及抗逆反應[12]等起作用。S-亞硝基谷胱甘肽(S-Nitrosoglutathione,GSNO)廣泛存在于各種生物體中,是天然存在的NO緩沖和儲存體,可以由生物體主動產生,能在植物體內運輸并釋放NO,這種穩(wěn)定的形式使得NO能儲存、運輸并參與調節(jié)植物生理和病理進程[13-16]?！颈狙芯壳腥朦c】近年來,在NO緩解植物鹽脅迫的研究取得較大進展、其作用機制也逐漸清晰的基礎上,目前有關外源NO對植物逆境生理的研究多以硝普鈉(SNP)為NO供體開展,很少以GSNO作為NO供體對植物抗逆性進行研究與應用。需研究NaCl脅迫下外源GSNO(NO供體)對番茄幼苗生長的調節(jié)作用?！緮M解決的關鍵問題】以GSNO為NO供體,研究GSNO參與番茄幼苗響應NaCl脅迫的一系列機制,為外源GSNO緩解番茄鹽害、提高番茄產量提供可行的方法,也為NO增強耐鹽性提供可靠的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材 料

選擇番茄品種中蔬4號為材料,在石河子大學農學院試驗站溫室進行。采用水培的方法,在水桶中培育番茄幼苗。使用72孔穴盤,將番茄種子播種于草炭:蛭石=1∶1(V/V)的基質中。待植株長到2葉1心,挑出長勢整齊一致的番茄幼苗移入遮光處理的容量為12 L的水桶中,以泡沫板與海綿支撐固定幼苗,桶中調配10 L Hoagland營養(yǎng)液(pH=6.2)。幼苗恢復生長7～10 d,期間每4 d換一次營養(yǎng)液,調pH值至6.2并全天通氣,番茄幼苗長至4葉1心時進行不同處理。

1.2 方 法

1.2.1 試驗設計

共設置5個處理,分別為 CK:營養(yǎng)液水培,葉面噴施蒸餾水處理; N:營養(yǎng)液中加100 mmol/L NaCl,葉面噴施蒸餾水處理; NG:營養(yǎng)液中加100 mmol/L NaCl,葉面噴施0.1 mmol/L GSNO處理; NP:營養(yǎng)液中加100 mmol/L NaCl,葉面噴施0.05 mmol/L cPTIO處理; NGP:營養(yǎng)液中加100 mmol/L NaCl,葉面噴施0.05 mmol/L cPTIO再噴施0.1 mmol/L GSNO處理。NaCl于調配營養(yǎng)液時直接加入營養(yǎng)液中,處理時間為每日上午09:30。每個桶種植5株番茄幼苗,每個處理培育3桶作為重復。每3 d更換1次營養(yǎng)液調pH值至6.2并全天通氣,處理第9 d采樣。

1.2.2 指標測定

1.2.2.1 生長指標

壯苗指數(shù)、根冠比:游標卡尺測量莖粗,直尺測量株高,分離植株地上部與地下部,清洗后用吸水紙吸干并分別稱重,使用烘箱105℃殺青 15 min,75℃烘至恒重,分別稱其干重。使用劉會芳等[14]的方法計算壯苗指數(shù)、根冠比。壯苗指數(shù)=(莖粗/株高+根干重/莖葉干重)×全株干重,根冠比=地下部干重/地上部干重。

1.2.2.2 氣孔數(shù)目與根系形態(tài)

氣孔數(shù)目:使用直撕法快速剝離番茄葉片下表皮并展開在滴有蒸餾水的載玻片上,蓋上載玻片使用ZEISS熒光顯微鏡觀察氣孔數(shù)目。使用ZEN Blue Lite軟件劃定等大小隨機視野進行觀測。根系形態(tài):將根系使用蒸餾水洗凈放入Epson掃描儀中,配合WinRhizo專業(yè)根系分析軟件系統(tǒng)測定根長、根面積和根體積。

1.2.2.3 葉綠素含量

采用張志良等[17]的方法測定對番茄幼苗的葉綠素含量。

1.2.2.4 葉綠素熒光參數(shù)

番茄幼苗暗適應2 h后, 利用脈沖調制式葉綠素熒光成像系統(tǒng)Imaging-PAM-2500測定番茄幼苗第三片真葉的PSII最大光化學效率(Fv/Fm)、實際光化學效率(YII)、光化學淬滅系數(shù)(qP)、光合電子傳遞速率(ETR)。

1.2.2.5 卡爾文循環(huán)相關酶活性

使用朝恒生物公司ELISA檢測試劑盒,酶標分析儀Rayto RT-6100測定分析。

1.3 數(shù)據處理

采用 Excel 2003和派森諾生物公司在線軟件整理數(shù)據和作圖,采用 SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析,采用 LSD 法進行差異顯著性比較(P<0.05) 。

2 結果與分析

2.1 外源GSNO對NaCl脅迫下番茄幼苗生物量的影響

研究表明,與CK相比,N處理下番茄幼苗的株高、莖粗、地上鮮重、地下鮮重、地上干重和地下干重顯著降低。相比于對照,N處理下番茄幼苗的根冠比增長了65.50%、壯苗指數(shù)下降了40.74%;與N處理相比,NG處理下番茄幼苗的株高、地上鮮重、地下鮮重、地上干重和地下干重均顯著上升,地上干重增長54.64%,根冠比沒有顯著變化,壯苗指數(shù)提高54%。 NP處理下番茄幼苗的各項指標均與N處理相比無顯著差異。與NP處理相比,NGP處理下番茄幼苗的株高、和地下干重均顯著提高。NaCl抑制了番茄幼苗的生長和生物量的累積,施用GSNO能有效緩解番茄幼苗受抑制的情況,提高生物量累積,促進植物生長。表1

2.2 外源GSNO對NaCl脅迫下番茄幼苗氣孔數(shù)目與根系形態(tài)的影響

研究表明,與CK相比,N處理和NGP處理的氣孔數(shù)目差異不顯著,NG處理下的番茄幼苗氣孔數(shù)目顯著升高16.20%,NP處理下的番茄幼苗氣孔數(shù)目顯著下降11%。與CK處理相比,N處理下的番茄幼苗根系總長度下降10.81%,NP處理下的番茄幼苗根系總長度下降10.29%和NGP處理下的番茄幼苗根系總長度下降10.48%,NG處理下的番茄幼苗根系總長度增長12.36%。與CK處理相比,N處理下的番茄幼苗根系總表面積顯著下降14.68%,NP處理下的番茄幼苗根系總表面下降17.04%,NG處理下的番茄幼苗根系總表面下降18.96%。與CK處理相比,N處理下的番茄幼苗根系總體積下降20.81%、NP處理下的番茄幼苗根系總體積下降40.43%,NGP處理下的番茄幼苗根系總體積下降42.71%,NG處理下的番茄幼苗根系總體積下降42.81%。GSNO能有效緩解番茄幼苗受NaCl脅迫后氣孔減少的情況,在促進根系伸長效果顯著。圖1

表1 不同外源GSNO下NaCl脅迫下番茄幼苗生物量變化Table 1 Effects of exogenous GSNO on tomato seedling biomass under NaCl stress

注:A:對氣孔數(shù)目的影響;B:對根系總長度的影響;C:對根系總面積的影響;D:對根系總體積的影響;小寫字母表示處理間在5%水平的差異顯著性,下同

2.3 外源GSNO對NaCl脅迫下番茄幼苗葉綠素含量的影響

研究表明,與CK處理相比,N處理下番茄幼苗葉綠素a含量下降39.48%、NG處理下番茄幼苗葉綠素a含量下降26.92%、NP處理下番茄幼苗葉綠素a含量下降42.38%、NGP處理下番茄幼苗葉綠素a含量下降36.65%。與N處理相比,NG處理下番茄幼苗葉綠素a含量提高了20.75%。與CK處理相比,N處理下番茄幼苗葉綠素b含量降低36.63%,NG處理下番茄幼苗葉綠素b含量下降23.09%,NP處理下番茄幼苗葉綠素b含量下降44.01%,NGP處理下番茄幼苗葉綠素b含量下降33.76%。與N處理相比,NG處理下番茄幼苗葉綠素b含量提高了21.35%,NP處理下番茄幼苗葉綠素b含量下降了11.66%。與CK處理相比,N處理下番茄幼苗總葉綠素含量下降41.93%。與N處理相比,NG處理下番茄幼苗的總葉綠素含量提高了17.1%。GSNO能有效緩解番茄幼苗受到的NaCl脅迫帶來的葉綠素含量降低。圖2

注:A:對葉綠素a含量的影響;B:對葉綠素b含量的影響;C:對總葉綠素含量的影響

2.4 外源GSNO對NaCl脅迫下番茄幼苗葉綠素熒光參數(shù)的影響

研究表明,與CK相比,NaCl脅迫下各處理的最大光化學效率(Fv/Fm)均顯著降低,NG處理下番茄幼苗Fv/Fm值降低8.69%,NP處理下番茄幼苗Fv/Fm值降低13.75%。與N處理相比,NG處理下番茄幼苗Fv/Fm值顯著升高4.65%。與NP處理相比,NPG處理下番茄幼苗Fv/Fm值顯著提高。與CK相比,NaCl脅迫下各處理的實際光化學效率(YII)均顯著降低,但各處理間的YII值無顯著性差異。與CK處理相比, N、NP和NPG處理下番茄幼苗的光化學淬滅系數(shù)(qP)均顯著下降,分別下降了20.48%、34.99%和22.30%,NG處理下番茄幼苗qP值無顯著性變化。與N處理相比,NG處理下番茄幼苗qP值提高6.26%,NP處理下番茄幼苗qP值降低18.29%,沒有顯著差異。與CK相比,各處理光合電子傳遞速率(ETR)均降低,其中NP和NPG處理下番茄幼苗ETR值顯著降低,分別為43.25%和29.23%。NaCl脅迫會破壞番茄幼苗葉片的PSII反應中心,GSNO可以緩解這一情況,提高植物最大光化學效率(Fv/Fm),對光能利用效率、電子傳遞效率也有提高。圖3

2.5 外源GSNO對NaCl脅迫下番茄幼苗卡爾文循環(huán)相關酶活性的影響

研究表明,與CK相比,N處理下番茄幼苗Rubisco初始活性和總活性、RCA、PGK、GAPDH、 SBPase、FBPase和FBA活性均顯著下降;與N處理相比,NG處理下番茄幼苗的Rubisco初始活性和總活性、RCA、PGK、GAPDH、SBPase和FBPase活性均顯著提高,其中FBPase活性提高至CK水平,而FBA活性無顯著性變化。與N處理相比,NP處理下番茄幼苗的Rubisco初始活性、RCA、PGK、GAPDH、FBPase和FBA活性均顯著降低,Rubisco總活性顯著提高,SBPase無顯著性變化;與NP處理相比,NGP處理下番茄幼苗除Rubisco總活性無顯著性變化外,其它酶的活性均顯著提高。鹽脅迫下Rubisco初始活性和總活性、RCA、PGK、GAPDH、SBP、FBP、FBA等卡爾文循環(huán)相關酶活性均降低,降低了碳同化速率,影響了光合產物的累積,施用外源GSNO可以提高各酶的活性,緩解鹽脅迫對碳同化速率的抑制作用。施用cPTIO降低番茄幼苗內源NO水平可以降低酶活性,加重脅迫程度,施用外源GSNO可以緩解這一情況。表2

注:A:對最大光化學效率(Fv/Fm)的影響;B:對實際光化學效率(YII)的影響;C:對化學淬滅系數(shù)(qP)的影響;D:對光合電子傳遞速率(ETR)的影響

表2 不同外源GSNO下NaCl脅迫下番茄幼苗卡爾文循環(huán)相關酶活性變化Table 2 Effects of exogenous GSNO on activities of Calvin cycle related enzymes >in tomato seedlings under NaCl stress

3 討 論

3.1植物在逆境脅迫下各項生理活動都會受到影響,而且很復雜,但是最直觀的就是植株生長受到影響[17,18],包括形態(tài)指標的增降、生物量累積,根冠比,壯苗指數(shù)的變化等[19,20]。鹽脅迫作為農業(yè)生產中常見的非生物脅迫,能夠明顯抑制植物的生長[21]。

3.2試驗結果表明 NaCl 脅迫可以顯著抑制番茄幼苗的正常生長和生物量的積累。NaCl 脅迫下生長的番茄幼苗高度降低且莖部更加纖細,地上部和地下部的干、鮮重明顯減少,與前人的研究一致[22-23]。根冠比與壯苗指數(shù)也反映了鹽脅迫下番茄幼苗生長情況變差的情況。而使用GSNO噴施番茄葉片可顯著改善番茄的生長情況和生物量的累積,壯苗指數(shù)也表明幼苗長勢更好,GSNO作為外源NO供體可以緩解NaCl 脅迫給植物生長帶來的壓力。試驗中NaCl 脅迫下葉片氣孔數(shù)目的減少也降低了植物氣體交換的程度,與溫澤林試驗后期的番茄幼苗表現(xiàn)一致[22]。根系的生長也明顯受到了NaCl脅迫的抑制,根長、根表面積和根體積均不同程度下降。而使用GSNO后,NG處理下番茄幼苗根長明顯提高,GSNO在緩解根系NaCl脅迫中作用明顯,與張靜[23]研究一致。楊小環(huán)[24]和牛麗娟[25]等也發(fā)現(xiàn)了NO在緩解黃瓜根脅迫的過程中作用巨大。試驗中,外源GSNO施用下根系面積和體積并沒有得到相應的提高,可能是因為根系組織的細胞分裂旺盛但是不能正常生長,尚需要進一步驗證。

3.3NaCl 脅迫下番茄幼苗Fv/Fm、YII和qP值顯著降低,ETR數(shù)值上也所下降,PSII反應中心受到明顯傷害,施用GSNO可提高Fv/Fm,GSNO對PSII反應中心起到了保護作用,對反應中心的工作有積極幫助。施用cPTIO后,脅迫程度加重,番茄幼苗各項熒光參數(shù)較NaCl脅迫的幼苗均下降,施用GSNO可以緩解這一情況。NaCl脅迫下番茄幼苗Rubiso活性降低,直接影響卡爾文循環(huán)的速度[26],另外幾種關鍵酶活性也顯著降低,在各個環(huán)節(jié)都限制了卡爾文循環(huán)的進行,影響碳同化與光合產物累積。施用GSNO顯著提高了各酶的活性,能夠促進了光合產物的累積,供給生長發(fā)育。施用cPTIO后,脅迫程度加重,番茄幼苗卡爾文循環(huán)上各酶活性較NaCl脅迫的幼苗均下降,施用GSNO可以緩解這一情況。

4 結 論

4.1外源GSNO可緩解NaCl脅迫下番茄幼苗長生不良的情況,促進生物量累積,提高番茄幼苗質量。

4.2外源GSNO可緩解NaCl脅迫下番茄幼苗葉片氣孔減少、根系生長受限的情況,促使葉片恢復正常氣孔數(shù)目,促進幼苗根部伸長。

4.3外源GSNO可緩解NaCl脅迫下番茄幼苗葉片葉綠素減少的情況,減輕NaCl脅迫對番茄幼苗PSII反應中心的破壞程度,保障光合作用。

4.4外源GSNO可緩解NaCl脅迫下番茄幼苗Rubisco、RCA、PGK、GAPDH、SBPase和FBPase等卡爾文循環(huán)相關酶的活性下降的情況,緩解鹽脅迫對碳同化速率的抑制。外源GSNO對內源NO水平降低造成的酶活性下降的情況,有顯著緩解效果。