曹魯娜 魏紅煥 趙蕊蕊 宋紅衛(wèi)

摘 要：通過對食品、藥品、化妝品三個品類微生物檢驗(yàn)在檢驗(yàn)依據(jù)、樣品采集及檢驗(yàn)用量、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、方法適用性、具體操作差異（以菌落總數(shù)為例）等方面進(jìn)行對比分析，淺析三個品類在微生物檢驗(yàn)中的異同，發(fā)現(xiàn)三品類微生物檢驗(yàn)可以優(yōu)勢互補(bǔ)，互相借鑒。建議相關(guān)從業(yè)人員在工作中總結(jié)經(jīng)驗(yàn)、融會貫通，持續(xù)增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性和科學(xué)性，更好地保障人民群眾的飲食、用藥、用妝安全。

關(guān)鍵詞：食品，藥品，化妝品，微生物檢驗(yàn)

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.20.032

0 引 言

近年來，隨著國務(wù)院就市場監(jiān)管系統(tǒng)機(jī)構(gòu)改革提出的指導(dǎo)意見，各級市場監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)陸續(xù)完成了改革，其下屬的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)隨之整合，涉及產(chǎn)品領(lǐng)域涵蓋了食品、藥品和化妝品（以下簡稱三品類）等品類的檢驗(yàn)。目前，各相關(guān)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的檢驗(yàn)部門組織結(jié)構(gòu)一般分為理化、微生物、毒理病理、動物實(shí)驗(yàn)等科室，其中微生物室承擔(dān)著三品類的微生物檢驗(yàn)。微生物檢驗(yàn)控制是保障三品類質(zhì)量安全的重要措施，與人民群眾飲食、用藥、用妝安全息息相關(guān)。三品類在微生物檢驗(yàn)中既有相同點(diǎn)，又有不同點(diǎn)，檢驗(yàn)工作中有值得相互借鑒之處，對微生物從業(yè)人員提出了更高要求，把握三品類的各自特點(diǎn)，才能保證出具可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)、準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果。本文通過分析比較三品類微生物檢驗(yàn)的異同點(diǎn)，為相關(guān)從業(yè)機(jī)構(gòu)和同行提高檢驗(yàn)檢測水平提供參考依據(jù)。

1 三品類微生物檢驗(yàn)的重要性

食品微生物檢測是國家食品風(fēng)險監(jiān)控項目的組成部分[1]，《國家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則（2022版）》中共涉及33個食品大類，其中設(shè)置微生物檢驗(yàn)項目的有30個食品大類[2]。這足以證明食品微生物檢驗(yàn)的重要性。

藥品是用于調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能的物質(zhì)。微生物污染直接影響藥品有效性，還有可能危及用藥患者的生命安全[3]。

化妝品是施用于皮膚、毛發(fā)、指甲、口唇等人體表面的日用化學(xué)工業(yè)產(chǎn)品[4]。劉佩等[5]研究發(fā)現(xiàn)化妝品不合格項目中菌落數(shù)超限的不合格樣品最多，而化妝品污染微生物后可能會導(dǎo)致人體發(fā)生皮膚過敏、感染、眼部疾患等損傷，危害使用者的健康[5-6]。

2 三品類微生物檢驗(yàn)的異同

2.1 三品類微生物檢驗(yàn)的共同處

三品類微生物檢驗(yàn)均是以微生物分析為基礎(chǔ)，是微生物分析應(yīng)用的不同分支。其共同點(diǎn)在于：一是檢驗(yàn)對象一致，都是微生物，有著相同的檢驗(yàn)原理；二是檢驗(yàn)?zāi)康囊恢?，都是為了檢驗(yàn)樣品污染微生物的程度，保證人民群眾的使用安全有效；三是開展檢驗(yàn)依據(jù)的法典、標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)范等都是國家頒布的。

2.2 三品類微生物檢驗(yàn)的不同處

三品類微生物檢驗(yàn)在標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)、檢驗(yàn)對象（微生物種類）、培養(yǎng)基、環(huán)境及設(shè)備、方法適用性等方面均有差異。就檢驗(yàn)依據(jù)而言，三品類微生物檢驗(yàn)依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)名稱、現(xiàn)行有效版本及標(biāo)準(zhǔn)更新情況均不同，微生物限度標(biāo)準(zhǔn)也有所不同。檢驗(yàn)依據(jù)：食品為《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)》、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等；藥品為《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）；化妝品為《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》?，F(xiàn)行有效版本：食品為GB 4789《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn)系列標(biāo)準(zhǔn)》；藥品為《中國藥典》2020年版四部；化妝品為《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2021年修訂版。食品標(biāo)準(zhǔn)不定期更新，需要及時查新；藥品標(biāo)準(zhǔn)自1985年版以來，更新周期為5年，2020年版為第十一版；化妝品標(biāo)準(zhǔn)不定期更新，2002年發(fā)布第一版 ，分別于2007、2015、2021年更新。

3 檢驗(yàn)實(shí)踐中的借鑒

3.1 樣品采集

樣品采集是微生物檢驗(yàn)的前置環(huán)節(jié)，也是關(guān)鍵影響要素，樣品是否具有代表性，直接關(guān)系到能否真實(shí)反映出樣品污染微生物的情況，影響檢驗(yàn)結(jié)果。在抽樣方法和抽樣數(shù)量方面：食品隨機(jī)抽樣，根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康牡戎贫ǘ壔蛉壊蓸臃桨?，抽取不少?份樣品；藥品隨機(jī)抽樣，不得抽取外包裝有明顯破損的樣品，抽取不少于2個最小包裝；化妝品要求樣品具有代表性，不少于2個包裝單位。在檢驗(yàn)量方面：食品一般是25 g（mL）；藥品制劑一般是10 g（mL），大蜜丸、貼膏劑等特殊劑型另有規(guī)定，貴重藥品等檢驗(yàn)量可酌減；化妝品一般是10g（mL）。

對比而言，本文認(rèn)為食品抽樣方法更加復(fù)雜細(xì)致，更具隨機(jī)性和代表性，且檢驗(yàn)量較大，能更好地反映出樣品的微生物真實(shí)污染水平。這與三品類的自身特點(diǎn)有關(guān)，相對于藥品和化妝品，食品抽樣包裝規(guī)格更大、使用量更大、使用人群范圍更廣、受輿論關(guān)注程度更高。

3.2 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基是微生物生長的物質(zhì)基礎(chǔ)，在微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)物料中屬于關(guān)鍵要素，其質(zhì)量狀況直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。三品類質(zhì)控要求依據(jù)的區(qū)別：食品為GB 4789.28 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》；藥品為《中國藥典》四部通則（以下簡稱通則）9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則；化妝品未作要求。質(zhì)控試驗(yàn)區(qū)別：食品為pH值、顏色、澄清度、生長率（PR值、G值、濁度值）、選擇性及特異性測試等；藥品為pH值、適用性檢查（回收率、促生長能力、抑制能力和指標(biāo)特性）、靈敏度檢查、穩(wěn)定性試驗(yàn)；化妝品未作要求。

食品和藥品培養(yǎng)基質(zhì)控具體要求有所不同。比如通則9203藥品控制菌檢查培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)中僅對菌落生長狀況、大小和形態(tài)特征一致性作出要求；GB 4789.28食品培養(yǎng)基質(zhì)控則提出PR值、G值、濁度值等量化要求，實(shí)操性更強(qiáng)。再如，GB 4789.28要求培養(yǎng)基制備后標(biāo)記有效期，而通則9203中給出了保存參考期限（1周且須經(jīng)過驗(yàn)證）。由此可見，食品和藥品培養(yǎng)基質(zhì)控各有優(yōu)劣，可相互借鑒，以保證培養(yǎng)基質(zhì)量，提高微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性?；瘖y品微生物檢驗(yàn)對培養(yǎng)基沒有提出質(zhì)控要求，其菌落總數(shù)用卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂，配方中的卵磷脂和吐溫80中和防腐劑的效果較差，可能造成檢驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確[7]。建議參考食品、藥品用培養(yǎng)基的質(zhì)控要求，適當(dāng)進(jìn)行控制。

3.3 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求

微生物檢驗(yàn)對試驗(yàn)環(huán)境要求較高，如果潔凈級別不達(dá)標(biāo)，可能造成樣品的二次污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。按行業(yè)共識，樣品的檢測環(huán)境不能低于生產(chǎn)環(huán)境，否則檢驗(yàn)結(jié)果的可信度下降。三品類在環(huán)境要求方面：食品和化妝品均要求潔凈區(qū)域內(nèi)單方向工作流程；藥品要求不低于D級背景下的生物安全柜或B級潔凈區(qū)。在微生物監(jiān)測方面：食品對溫度、相對濕度、噪聲等物理參數(shù)有要求，藥品除溫度、相對濕度、噪聲等物理參數(shù)外，對懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物（含手套及操作服）等有明確要求；化妝品則未作要求，與藥品和化妝品相比較，食品標(biāo)準(zhǔn)對微生物的要求一般限值稍高，而且食品檢驗(yàn)過程中，一般菌落生長比較多，對藥品和化妝品檢驗(yàn)容易造成交叉污染，導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果。本文建議食品和化妝品實(shí)驗(yàn)室可以參考通則9205的藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則開展?jié)崈舯O(jiān)測活動。微生物實(shí)驗(yàn)室三品類潔凈區(qū)獨(dú)立設(shè)置可降低交叉污染的風(fēng)險，如果實(shí)驗(yàn)室受條件限制沒有各自獨(dú)立區(qū)域，應(yīng)制定相應(yīng)的控制措施，避免出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.4 方法適用性

藥品微生物計數(shù)方法和控制菌檢查應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于本產(chǎn)品的微生物計數(shù)或控制菌檢查[8]?！吨袊幍洹?010年版以前，對方法適用性試驗(yàn)未作要求，試驗(yàn)中經(jīng)常遇到低稀釋級樣品沒有菌落生長，但高稀釋級樣品卻有菌落生長的現(xiàn)象。其原因在于可能是藥品中含有抑菌活性成分，方法適用性試驗(yàn)可以去除樣品的抑菌活性。

在生產(chǎn)和加工食品的過程中使用化學(xué)防腐劑，能夠有效抑制微生物產(chǎn)生，延長保存期限。某些食品中有國家標(biāo)準(zhǔn)允許添加的防腐劑[9]，化妝品中加入防腐劑是為了控制化妝品衛(wèi)生質(zhì)量，但是防腐劑的存在會影響微生物的檢測結(jié)果[7]。食品和化妝品微生物檢驗(yàn)未提出方法適用性的要求，但本文認(rèn)為，為了增強(qiáng)試驗(yàn)的科學(xué)性和嚴(yán)謹(jǐn)性，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、真實(shí)性和可靠性，建議參考藥品微生物限度檢查的理念，開展方法適用性試驗(yàn)考察及評估。目前，已有多個研究借鑒藥品微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)對化妝品微生物檢驗(yàn)開展方法適用性研究，用于判斷檢驗(yàn)方法是否適用于相應(yīng)產(chǎn)品[10-12]。

3.5 實(shí)驗(yàn)操作中的差異（以菌落總數(shù)為例）

三品類微生物檢驗(yàn)在培養(yǎng)基配制、滅菌、儀器設(shè)備等方面要求相似，以菌落總數(shù)為例，比較三品類在稀釋液、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時間等方面的差異。稀釋液：食品用pH7.2 磷酸鹽緩沖液或0.85%生理鹽水；藥品用pH7. 0 無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，或 pH7.2 磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基；化妝品用0.85%生理鹽水。培養(yǎng)基：食品用PCA培養(yǎng)基；藥品用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；化妝品用卵磷脂吐溫 80 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度和時間：食品（36±1）℃培養(yǎng)（48±2） h，水產(chǎn)品（30±1）℃培養(yǎng)（72±3） h；藥品30～35℃培養(yǎng)3～5天；化妝品（36±1）℃培養(yǎng)（48±2） h。

4 微生物的鑒定

微生物鑒定是借助現(xiàn)有的分類系統(tǒng)，通過對未知微生物的特征測定，對其進(jìn)行細(xì)菌、酵母菌和霉菌大類的區(qū)分或?qū)佟⒎N及菌株水平確定的過程[8]。藥品在微生物鑒定中可自行選擇適宜的驗(yàn)證方法，呈現(xiàn)出開放性和靈活性[3]。食品中的致病菌、化妝品中的控制菌檢查在出現(xiàn)可疑菌落后，必須嚴(yán)格按照相應(yīng)的法定方法進(jìn)行，不得自行變更。

5 結(jié) 語

通過對三品類微生物檢驗(yàn)在檢驗(yàn)依據(jù)、樣品采集及檢驗(yàn)用量、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、方法適用性、具體操作差異（以菌落總數(shù)為例）等方面進(jìn)行對比分析，發(fā)現(xiàn)三品類微生物檢驗(yàn)相似之處較多，兼具各自的特點(diǎn)，可以優(yōu)勢互補(bǔ)。食品微生物檢驗(yàn)中檢驗(yàn)程序更加詳細(xì)和明確，利于實(shí)際操作應(yīng)用；化妝品微生物檢驗(yàn)由于開展時間較短，規(guī)范化程度尚待提高；而藥品微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)體系實(shí)現(xiàn)了與國際標(biāo)準(zhǔn)的接軌，可以對食品和化妝品的微生物鑒定提供借鑒。建議相關(guān)從業(yè)人員在工作中總結(jié)經(jīng)驗(yàn)、融會貫通，關(guān)注實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，持續(xù)增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性和科學(xué)性，提高微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制水平，更好地保障人民群眾的飲食、用藥、用妝安全。