李如清，王 平 綜述，傅雨綺，黃新恩 審校

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院/江蘇省腫瘤醫(yī)院/江蘇省腫瘤防治研究所，南京 210009)

最新數(shù)據(jù)表明，肺癌全球發(fā)病率為11.4%，致死率為18.0%，已成為惡性腫瘤致死的首要原因[1]。目前，早期發(fā)現(xiàn)和診斷肺癌主要依靠傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物、低劑量計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)掃描和組織活檢。然而，傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物、影像學(xué)在診斷準(zhǔn)確性和敏感性方面欠佳[2]。而組織活檢雖然是肺癌診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是仍具有缺點(diǎn)，如活檢取樣的可及性、活檢組織不足、存在活檢并發(fā)癥、腫瘤異質(zhì)性導(dǎo)致的生物標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果不可靠等[3]。因此，需要尋找一種可靠的方法來(lái)輔助篩查和診斷早期肺癌。近年來(lái)，液體活檢逐漸興起。本文綜述了液體活檢主要檢測(cè)對(duì)象，及其在肺癌篩查和早期診斷、預(yù)測(cè)治療敏感性和耐藥性、評(píng)價(jià)治療效果、預(yù)測(cè)預(yù)后和在腫瘤殘余病灶中的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值，以及臨床常規(guī)實(shí)施前仍需克服的障礙。

1 液體活檢

液體活檢是指通過(guò)分子生物學(xué)的方法，對(duì)外周血或其他體液中的多種癌癥來(lái)源成分進(jìn)行檢測(cè)分析，從而獲取腫瘤相關(guān)信息。液體活檢的檢測(cè)對(duì)象主要是循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)、循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)、循環(huán)游離DNA(cfDNA)、長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)、外泌體等。液體活檢的主要缺點(diǎn)是樣本中生物標(biāo)志物數(shù)量少[4]。因此，需要高敏感度的檢測(cè)技術(shù)。當(dāng)前，液體活檢的檢測(cè)技術(shù)主要為聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、數(shù)字PCR(dPCR)和子代測(cè)序(NGS)。PCR針對(duì)一個(gè)預(yù)定義基因中的1～3個(gè)位點(diǎn)，無(wú)法跨多個(gè)基因進(jìn)行復(fù)合，也無(wú)法檢測(cè)更復(fù)雜的基因組改變，如融合基因。dPCR是一種可以在單分子水平上識(shí)別和量化不同突變的新方法，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了不同的平臺(tái)類(lèi)型，包括固體、珠狀、乳化、擴(kuò)增和磁性PCR等。而NGS是一種高通量測(cè)序方法，可以同時(shí)檢測(cè)基因組的可變區(qū)域和體細(xì)胞突變，包括單核苷酸變異、拷貝數(shù)變異、基因融合等[4-5]。隨著檢測(cè)技術(shù)的逐漸成熟，液體活檢正在被用于肺癌的各個(gè)階段，包括篩查及早期診斷腫瘤、預(yù)測(cè)治療敏感度和耐藥性、評(píng)價(jià)治療效果、預(yù)測(cè)預(yù)后、監(jiān)測(cè)殘余病灶等[6]。

2 液體活檢主要檢測(cè)對(duì)象

2.1 CTCs

CTCs是指原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶脫落進(jìn)入外周血的腫瘤細(xì)胞，這些腫瘤細(xì)胞可能經(jīng)歷了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，有更強(qiáng)的侵襲性，易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。CTCs富集和分析方法基于其物理和生物學(xué)特性，如大小、密度、極性、電荷、上皮細(xì)胞黏附分子和細(xì)胞角蛋白的表達(dá)、白細(xì)胞特異標(biāo)志物CD45的表達(dá)等[7]。目前富集和分析CTCs的方法包括CellSearch、基于形態(tài)學(xué)富集的膜過(guò)濾技術(shù)(ISET)和上皮細(xì)胞免疫斑點(diǎn)技術(shù)(EPISPOT)等[8]。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局已審批通過(guò)首個(gè)專(zhuān)門(mén)針對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)CTCs檢測(cè)的試劑盒：葉酸陽(yáng)性富集試劑盒。有學(xué)者認(rèn)為，CTCs的表型特征可用于基因表達(dá)譜的分析，例如研究腫瘤異質(zhì)性或識(shí)別特定的靶基因改變，以及評(píng)估治療相關(guān)標(biāo)志物(免疫治療的程序性細(xì)胞死亡配體1)[9]。CTCs檢測(cè)在肺癌患者的診治及預(yù)后等方面發(fā)揮著重要作用，進(jìn)一步研究其特征和性質(zhì)具有重要價(jià)值。

2.2 ctDNA

ctDNA是指人體血液循環(huán)系統(tǒng)中具有腫瘤相關(guān)特征(包括單核苷酸突變、拷貝數(shù)異常和甲基化等)、來(lái)自腫瘤基因組的DNA片段。目前，dPCR技術(shù)及突變阻滯擴(kuò)增系統(tǒng)PCR(ARMS-PCR)技術(shù)可用于檢測(cè)已知突變的ctDNA，而標(biāo)記擴(kuò)增深度測(cè)序(TAm-Seq)技術(shù)和癌癥個(gè)體化深度測(cè)序分析(CAPPSeq)技術(shù)可用于檢測(cè)突變位點(diǎn)未知的ctDNA[10]。盡管可以通過(guò)多種不同的液體活檢對(duì)象獲得癌癥相關(guān)基因信息，但ctDNA是目前唯一被正式批準(zhǔn)用于NSCLC患者臨床的樣本來(lái)源，用于EGFR突變檢測(cè)[4，11]。ctDNA有望在眾多臨床應(yīng)用中發(fā)揮作用，包括早期癌癥篩查、對(duì)癌癥進(jìn)行基因分型、檢測(cè)微小殘留病灶、監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)和分析耐藥性等[12]。ctDNA作為一種高效益、高敏感度的工具，具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。

2.3 外泌體

外泌體是一種直徑為50～150 nm的膜結(jié)合顆粒，可以從血漿、尿液、支氣管肺泡灌洗液、腹腔積液等多種體液中檢測(cè)到。外泌體表面表達(dá)多種蛋白質(zhì)，并包含核酸和脂質(zhì)在內(nèi)的多種生物活性物質(zhì)。這些物質(zhì)參與了外泌體的抗原提呈、膜轉(zhuǎn)運(yùn)和融合等過(guò)程。外泌體具有良好的穩(wěn)定性、生物相容性、生物屏障通透性、長(zhǎng)血循環(huán)能力、低毒性、低免疫原性等優(yōu)點(diǎn)，可以促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，影響血管生成，在肺癌發(fā)生過(guò)程中調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)肺癌治療中的耐藥性，被認(rèn)為是肺癌液體活檢的重要組成部分。此外，通過(guò)工程化外泌體輸送治療藥物是肺癌精確和個(gè)性化治療的一種新方法[13-14]。

2.4 lncRNA

lncRNA是長(zhǎng)度>200個(gè)核苷酸且不具有蛋白質(zhì)編碼功能的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。根據(jù)lncRNA編碼序列與蛋白質(zhì)編碼基因的相對(duì)位置，可分為以下5類(lèi)：正義lncRNA、反義lncRNA、雙向lncRNA、內(nèi)含子lncRNA、基因間lncRNA。lncRNA具有以下特點(diǎn)：(1)具有信使RNA相似結(jié)構(gòu)，經(jīng)過(guò)剪切也具有啟動(dòng)子和多聚腺苷酸尾的結(jié)構(gòu)；(2)具有較強(qiáng)的組織和細(xì)胞特異性，較低的序列保守性；(3)組織分化過(guò)程中具有明顯的時(shí)空表達(dá)特性；(4)在腫瘤與其他疾病中有特征性表達(dá)方式[15]。lncRNA可以在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后和翻譯水平起作用，可能參與多種生物學(xué)過(guò)程，例如DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞存活、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化等[16]。由于lncRNA的這些特性，其被認(rèn)為與癌癥的關(guān)系緊密。

3 液體活檢在肺癌診療中的臨床應(yīng)用

3.1 早期篩查和診斷

JIANG等[16]分析了61例肺癌組患者和57例健康對(duì)照組全血中l(wèi)ncRNA XLOC-009167的相對(duì)表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)肺癌組lncRNA XLOC-009167表達(dá)高于健康對(duì)照組(P<0.000 1)；與健康對(duì)照組比較，肺癌組lncRNA XLOC-009167的曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.739 8(敏感度為78.7%，特異度為61.8%)，傳統(tǒng)生物標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白19片段抗原(CYFR21-1)、癌胚抗原72-4(CA72-4)和特異性神經(jīng)元烯醇酶(NSE)的AUC分別為0.518 7(敏感度為32.0%，特異度為86.6%)、0.505 6(敏感度為76.0%，特異度為40.0%)、0.570 7(敏感度為66.0%，特異度為56.6%)。結(jié)合3種傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物采用logistic回歸模型建立的聯(lián)合診斷模型，AUC為0.551 9(敏感度為44.4%，特異度為55.3%)，說(shuō)明lncRNA XLOC-009167的診斷性能明顯優(yōu)于聯(lián)合診斷模型和單個(gè)傳統(tǒng)生物標(biāo)志物。研究人員還發(fā)現(xiàn)，lncRNA XLOC-009167的相對(duì)表達(dá)量在不同培養(yǎng)時(shí)間軸、不同溫度下比較均無(wú)差異，具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性。因此，lncRNA XLOC-009167可能成為一種新的肺癌診斷標(biāo)志物。MARQUETTE等[17]利用ISET檢測(cè)614例慢性阻塞性肺氣腫患者血液標(biāo)本中的CTCs，發(fā)現(xiàn)CTCs檢測(cè)對(duì)肺癌的敏感度為26.3%，其中19例參與者在T0時(shí)被診斷為肺癌，表明CTCs檢測(cè)可以先于影像學(xué)發(fā)現(xiàn)早期肺癌的存在。PENG等[18]對(duì)192例可手術(shù)的肺部占位性疾病患者行組織活檢與血漿ctDNA檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)血漿ctDNA檢測(cè)肺癌的敏感度為69%，特異度為96%。而當(dāng)ctDNA與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，敏感度和特異度分別提高到80%和99%，其中64%的癌癥患者處于Ⅰ期，敏感度為63%。這些研究證實(shí)了檢測(cè)ctDNA有助于篩查和診斷早期肺癌。外泌體的各種生物成分(如miRNA、蛋白質(zhì)等)在肺癌中存在異常表達(dá)，具有作為肺癌診斷標(biāo)志物的潛力。研究人員發(fā)現(xiàn)，從NSCLC患者血漿中分離的外泌體平均蛋白水平明顯高于健康對(duì)照組[(11.1±3.8)mg/mLvs.(8.2±2.0)mg/mL，P<0.001]，NSCLC患者外泌體-T、外泌體-G的中位水平明顯高于健康對(duì)照組[(27.2±21.1)pg/mLvs.(14.9±5.4)pg/mL、(1.5±0.7)ng/mLvs.(0.9±0.3)ng/mL；P<0.01]，說(shuō)明外泌體可以用于肺癌的早期診斷[19]。作者推測(cè),液體活檢與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物、影像學(xué)等檢查聯(lián)合將提高肺癌早期診斷的敏感度和特異度。

3.2 預(yù)測(cè)治療敏感度和耐藥性

有研究人員從小細(xì)胞肺癌(SCLC)患者化療前采集的7.5mL血液分離出CTCs，并對(duì)單個(gè)細(xì)胞的DNA進(jìn)行NGS，生成全基因組拷貝數(shù)圖譜，對(duì)全基因組拷貝數(shù)改變(CNA)數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析開(kāi)發(fā)出分類(lèi)器，該分類(lèi)器包含2 281個(gè)聚集在16個(gè)CNA圖譜內(nèi)的位點(diǎn)，能正確預(yù)測(cè)約83%患者的化療敏感度臨床結(jié)果?？梢?jiàn)，CTCs可用于治療前化療敏感度的預(yù)測(cè)[20]。當(dāng)前，免疫檢查點(diǎn)抑制劑已成為多種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)療法。在一項(xiàng)前瞻性研究中，包括NSCLC在內(nèi)的癌癥患者在抗PD-1免疫治療8周后，檢測(cè)到ctDNA與明顯縮短的中位生存期(PFS)和總生存期(OS)相關(guān)(P<0.004)，這為免疫治療開(kāi)始前評(píng)估ctDNA提供了理論依據(jù)[21]。MOHRMANN等[22]發(fā)現(xiàn)，41例肺癌患者腫瘤組織中存在BRAF、KRAS、EGFR突變，通過(guò)NGS，同樣可在95%的血漿外泌體NA樣本中檢測(cè)到，且外泌體NA的NGS檢測(cè)存在任何腫瘤已有的突變。這說(shuō)明可以利用外泌體NA檢測(cè)肺癌中的常見(jiàn)突變，為靶向治療提供指導(dǎo)。癌癥治療時(shí)面臨的主要挑戰(zhàn)是耐藥性。研究人員發(fā)現(xiàn)，在NSCLC患者中，攜帶T790M突變的EGFR-TKI耐藥細(xì)胞H1975可以通過(guò)釋放外泌體miRNA-522-3p，激活PI3K/AKT途徑，將耐藥特性傳遞給EGFR-TKI敏感細(xì)胞PC9，促進(jìn)其對(duì)吉非替尼等的耐藥[23]。HUANG等[24]發(fā)現(xiàn)FP方案治療NSCLC患者的組織和細(xì)胞中l(wèi)ncRNA AFAP1-AS1過(guò)表達(dá),通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制靶點(diǎn)miR-139-5P，上調(diào)miR-139-5P靶點(diǎn)RRM2，激活EGFR/AKT通路，以增強(qiáng)NSCLC細(xì)胞增殖和化療耐藥。因此，了解lncRNA、外泌體等在肺癌藥物治療過(guò)程中在產(chǎn)生耐藥方面發(fā)揮的作用，有助于輔助肺癌的治療。

3.3 評(píng)價(jià)療效

ABBOSH等[25]發(fā)現(xiàn)，在14例確診的NSCLC復(fù)發(fā)患者中，有13例(93%)在臨床復(fù)發(fā)前或臨床復(fù)發(fā)時(shí)通過(guò)ctDNA檢測(cè)到≥2個(gè)單核苷酸變異，在影像學(xué)診斷腫瘤復(fù)發(fā)前7 d檢測(cè)出NSCLC復(fù)發(fā)。最近，研究人員使用Clariom D人類(lèi)芯片技術(shù)，在NSCLC患者的樣本中，發(fā)現(xiàn)3種lncRNAs(SCARNA7、MALAT1和NONHSAT017369)與EGFR突變明顯相關(guān)(陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均大于80%)。32例EGFR-TKI治療后影像學(xué)評(píng)估達(dá)到部分緩解(PR)和疾病穩(wěn)定(SD)的患者中，27例顯示血漿MALAT1水平下降(P<0.05)，23例顯示SCARNA7水平降低(P<0.05),疾病進(jìn)展(PD)患者中沒(méi)有觀察到類(lèi)似的趨勢(shì)。研究表明，檢測(cè)EGFR-TKI治療前、后血漿中SCARNA7和MALAT1的水平變化，對(duì)EGFR-TKI的療效有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值[26]。有研究人員收集了5例PR和4例PD患者，發(fā)現(xiàn)在晚期NSCLC中共120個(gè)外泌體miRNA與健康個(gè)體存在差異(P<0.05)，肺癌組miRNA320家族中3個(gè)miRNA(miRNA-320b、miRNA-320c、miRNA-320d)上調(diào)。此外，通過(guò)比較PR組治療前、后miRNA譜變化，找到311個(gè)差異表達(dá)miRNA(111個(gè)上調(diào)和200個(gè)下調(diào))，尤其是下調(diào)的miR-25b-5p(P<0.05)。因此，miR-320家族和miR-25b-5p可作為免疫治療療效的預(yù)測(cè)標(biāo)志物[27]，提示液體活檢可以用于肺癌療效的評(píng)價(jià)。

3.4 預(yù)測(cè)預(yù)后

一項(xiàng)回顧性生存分析納入了347例Ⅰ～ⅢA期NSCLC患者，發(fā)現(xiàn)術(shù)前CTCs水平是NSCLC患者的獨(dú)立預(yù)后因素(HR=5.489，P<0.001)。以術(shù)前CTCs水平為基礎(chǔ)，基于多變量COX回歸模型的nomogram數(shù)據(jù)一致性指數(shù)為0.82，顯示CTCs在NSCLC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)方面具有較高價(jià)值[28]。鄭志剛等[29]發(fā)現(xiàn)，lncRNA MEG3在92例SCLC組織中的表達(dá)(2.071±0.97)明顯低于40例癌旁組織(4.082±0.860)和50例正常肺組織(4.209±0.820)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);lncRNA MEG3低表達(dá)者較高表達(dá)者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(中位PFS 8個(gè)月vs.21個(gè)月，中位OS 32個(gè)月vs.21個(gè)月，P<0.001)。由此，lncRNA MEG3可作為潛在的CLC預(yù)后評(píng)估標(biāo)志物。MOHRMANN等[22]還發(fā)現(xiàn)，低外泌體NA突變等位基因頻率(MAF)患者有更長(zhǎng)的中位PFS(11.8個(gè)月vs.5.9個(gè)月，P=0.006)和治療失敗時(shí)間(7.4個(gè)月vs.2.3個(gè)月，P=0.009)，與PR和SD達(dá)6個(gè)月相關(guān)(P=0.006)，這些數(shù)據(jù)說(shuō)明低外泌體NA是延長(zhǎng)生存的獨(dú)立預(yù)后因素。與癌旁組織比較，NSCLC癌組織中miR217表達(dá)降低，E2F3 mRNA表達(dá)升高(P<0.005)；miR217高表達(dá)、E2F3 mRNA低表達(dá)的患者術(shù)后5年OS均高于miR217低表達(dá)、E2F3 mRNA高表達(dá)患者(P<0.005)。E2F3 mRNA高表達(dá)(HR=1.440,95%CI=1.129～2.503)是NSCLC患者預(yù)后不良獨(dú)立危險(xiǎn)因素，miR217高表達(dá)(HR=0.715,95%CI=0.425～0.902)是獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.005)[30]。由此認(rèn)為，臨床可以通過(guò)液體活檢來(lái)預(yù)測(cè)患者的預(yù)后。

3.5 在微小殘留病灶(MRD)中的作用

癌癥患者接受治療后，即使影像學(xué)上顯示病灶徹底清除，仍可能有極少量未被檢測(cè)到的殘存的腫瘤病灶。MRD的激活促進(jìn)了腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。目前，針對(duì)MRD的檢測(cè)主要依靠液體活檢。WALDECK等[31]利用NGS檢測(cè)術(shù)后12周采集的16份血漿樣本，發(fā)現(xiàn)4例ctDNA陽(yáng)性患者均(100%)經(jīng)歷了后期疾病復(fù)發(fā)，12例陰性患者中有9例(67%)在隨訪(fǎng)期間無(wú)疾病復(fù)發(fā)。MRD檢測(cè)能夠?qū)SCLC復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行有效分層，并對(duì)患者術(shù)后12～15個(gè)月的復(fù)發(fā)狀態(tài)進(jìn)行準(zhǔn)確預(yù)測(cè)[32]。MRD陰性與有利的PFS(HR=0.094,95%CI為0.01～0.061,P=0.013)和OS明顯相關(guān)(HR=0.03，95%CI為0.002～0.311,P=0.004)[32]。2016年SACHER等[33]發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致NSCLC產(chǎn)生的兩種關(guān)鍵基因：EGFR和KRAS。通過(guò)MRD對(duì)EGFR或KRAS突變進(jìn)行監(jiān)測(cè)，能夠指導(dǎo)EGFR靶向治療的停用藥時(shí)機(jī)，以避免新突變的產(chǎn)生，進(jìn)而影響靶向治療的效果。研究人員檢測(cè)40例肺癌患者M(jìn)RD，發(fā)現(xiàn)53%的患者具有與酪氨酸激酶抑制劑或免疫檢查點(diǎn)抑制劑良好反應(yīng)相關(guān)的ctDNA突變譜[34]。同時(shí)，輔助治療期間的ctDNA監(jiān)測(cè)可能有助于臨床了解藥物反應(yīng)和耐藥性機(jī)制，為疾病快速進(jìn)展之前的基于基因組治療提供機(jī)會(huì)[34-35]。越來(lái)越多的證據(jù)表明，ctDNA可以作為MRD檢測(cè)的生物標(biāo)志物，進(jìn)行準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和輔助治療。有研究人員利用生物傳感器將目標(biāo)分析物檢測(cè)轉(zhuǎn)化為可量化的數(shù)字信號(hào)，可以檢測(cè)到肺癌MRD中較低水平的ctDNA和CTCs。MRD診斷的廣泛應(yīng)用可以降低成本，擴(kuò)大檢測(cè)的可用性[36]。

3.6 胸腔積液液體活檢

目前液體活檢最常用的是血清樣本，但是胸腔積液也可以作為液體活檢的樣本，它同血清樣本一樣具有獲取方便、可動(dòng)態(tài)觀察等優(yōu)點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，胸腔積液上清液中的總cfDNA濃度中位值顯著高于血漿(278.1 ng/mLvs.20.4 ng/mL，P<0.05)，且其中檢出驅(qū)動(dòng)基因突變的敏感性更高(93%vs.62%)[37]。此外，胸腔積液液體活檢能協(xié)助鑒別胸腔積液的性質(zhì)，指導(dǎo)肺癌患者的治療和評(píng)估預(yù)后[38]。這說(shuō)明胸腔積液樣本用于液體活檢也是未來(lái)值得探索的一個(gè)方向。

4 小結(jié)與展望

綜上所述，液體活檢與傳統(tǒng)組織活檢相比，具有便捷、微創(chuàng)、可重復(fù)、可動(dòng)態(tài)觀察等優(yōu)勢(shì)。雖然影像學(xué)、傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物、組織活檢仍是肺癌診療中的常用方法，但是液體活檢有望作為其輔助手段，在肺癌的篩查和早期診斷、指導(dǎo)治療、評(píng)估療效和預(yù)測(cè)預(yù)后等多領(lǐng)域產(chǎn)生臨床應(yīng)用價(jià)值。在臨床工作中，醫(yī)生可以通過(guò)將液體活檢與影像學(xué)檢查、傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物、組織活檢等相結(jié)合，根據(jù)實(shí)時(shí)基因信息，為患者提供更精準(zhǔn)化和個(gè)性化的醫(yī)療。

不可否認(rèn)的是，液體活檢在臨床廣泛應(yīng)用前仍面臨不少問(wèn)題。(1)檢測(cè)技術(shù)尚不成熟。雖然通過(guò)富集、擴(kuò)增等手段可提高液體活檢的敏感度，但是存在信息不完整、基因錯(cuò)配等現(xiàn)象。因此，在應(yīng)用液體活檢時(shí)應(yīng)針對(duì)敏感度、特異度、穩(wěn)定性等進(jìn)行技術(shù)改進(jìn)，同時(shí)對(duì)檢測(cè)流程進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，對(duì)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)量控制。(2)缺乏臨床驗(yàn)證。目前，液體活檢缺乏大數(shù)據(jù)的人群調(diào)查和一致性評(píng)價(jià)研究，迫切需要更多的多中心、大型、前瞻性長(zhǎng)期研究。(3)缺乏行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和市場(chǎng)監(jiān)管。液體活檢是一種新技術(shù)，急需制定規(guī)范的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及執(zhí)行嚴(yán)格的市場(chǎng)監(jiān)管。(4)檢測(cè)成本較高：液體活檢成本較高，且尚未納入醫(yī)保范圍，需要政府、醫(yī)療單位、檢測(cè)公司等多方協(xié)調(diào)和投入[39]。相信隨著上述問(wèn)題的解決，液體活檢在臨床工作中將會(huì)有更廣闊的應(yīng)用前景。