王艷艷 盧鳳美 刁為英

佳木斯大學，黑龍江省佳木斯市 154000

脂肪細胞增強子結(jié)合蛋白1(Adipocyte enhancer-binding protein 1，AEBP1)由N端盤狀結(jié)構(gòu)域、羧肽酶結(jié)構(gòu)域和C末端DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。AEBP1是一種具有羧基肽酶活性的新型轉(zhuǎn)錄抑制因子，與位于脂肪P2(aP2)基因近端啟動子區(qū)域的調(diào)控序列(稱為脂肪細胞增強子1，AE-1)結(jié)合，該序列編碼脂肪細胞脂肪酸結(jié)合蛋白，發(fā)現(xiàn)AEBP1表達在脂肪細胞分化過程中下調(diào)，與前脂肪細胞相比，成熟脂肪細胞的AEBP1表達顯著降低[1]。AEBP1在巨噬細胞中高表達，并被證明可刺激幾種炎癥介質(zhì)的表達，包括白細胞介素-6、腫瘤壞死因子α、單核細胞化學吸引蛋白1和誘導性NO合酶[2]。

1 AEBP1在腫瘤中的研究

1.1 AEBP1在膠質(zhì)瘤中的研究 膠質(zhì)瘤是成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤，其中膠質(zhì)母細胞瘤(Glioliastoma，GBM)是惡性程度最高的分型，因為其高度異質(zhì)性、免疫抑制性和獲得性耐藥的特點，復發(fā)率高、預后相當差，5 年生存率仍不足10%[3]。手術、放化療并不能顯著改善臨床預后，研究新的靶向治療藥物尤為重要。

Wang等[4]使用TCGA RNA和CGGA RNA測序數(shù)據(jù)集對1 392個樣本進行分析，結(jié)果表明GBM患者AEBP1的表達水平高于WHOⅠ～Ⅲ級膠質(zhì)瘤患者；在異檸檬酸脫氫酶(Isocitrate dehydrogenase，IDH)野生型膠質(zhì)瘤中和MGMT(O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶)啟動子未甲基化膠質(zhì)瘤患者中AEBP1表達較高(在以往的研究中，已經(jīng)證明IDH野生型的預后是惡性的)。Liu等人[5]也通過生物信息學對多個數(shù)據(jù)庫分析得出相同結(jié)果，他們還分析得出AEBP1非1p/19q聯(lián)合缺失型中表達高于1p/19q聯(lián)合缺失型。為了進一步研究AEBP1和神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細胞(Glioma stem cells, GSC)標記之間的關系，Wang等人[4]采用Pearson相關分析對數(shù)據(jù)集進行分析，得出CD133、CD44、FUT4、IL6、STAT3等幾種GSC標記的表達與AEBP1表達呈正相關(其中IL6/STAT3通路已被證明是癌癥中多藥耐藥性的促成因素)。可見AEBP1可能在GSCs中發(fā)揮重要作用，并引發(fā)致瘤性和化學耐藥性。為了研究AEBP1在膠質(zhì)瘤中的潛在功能，他們還在數(shù)據(jù)集中進行了基因本體分析，結(jié)果顯示，AEBP1的陽性相關基因在免疫應答、細胞黏附、凋亡過程、炎癥反應、細胞增殖正調(diào)節(jié)、血管生成、藥物反應和缺氧反應方面具有高度相關性，還發(fā)現(xiàn)免疫檢查點標志物的表達與 AEBP1表達呈正相關。最后Kaplan-Meier生存曲線分析表明，AEBP1可能是膠質(zhì)瘤患者，特別是GBM患者的有效預后生物標志物。Liu及其同事[5]用基因集富集分析得出結(jié)果：在高表達的AEBP1表型中，蛋白質(zhì)輸出、朊病毒病、細胞因子受體相互作用、造血細胞譜系、細胞黏附分子、細胞凋亡以及補體和凝血級聯(lián)反應存在差異富集，Liu還得出AEBP1的表達與免疫浸潤水平相關這一結(jié)論。上述結(jié)論僅由生物信息學分析得出，并未做相關的實驗證實。

Cheng等研究者[6]采用公共數(shù)據(jù)庫分析后，又通過qRT-PCR、Westerten印跡法、免疫組化實驗證明AEBP1在GBM組織中表達水平顯著高于WHOⅠ～Ⅲ級膠質(zhì)瘤和非癌性腦組織。隨后Cheng通過脂質(zhì)體3000介導siRNA轉(zhuǎn)染下調(diào)AEBP1在膠質(zhì)瘤細胞系U87MG和U251MG的表達，檢測細胞增殖、侵襲情況和早期細胞凋亡情況，結(jié)果顯示下調(diào)的AEBP1抑制細胞增殖和侵襲，促進早期細胞凋亡。此外，他們還采用免疫印跡法測定NF-κB信號通路的下游蛋白，證明了在膠質(zhì)瘤細胞中AEBP1表達下調(diào)可以降低NF-κB1的表達，但NF-κB信號通路下游的Bax、caspase-3表達增加，而MMP2和Bcl-2(兩者的表達會增強腫瘤的轉(zhuǎn)移能力)表達減少。綜上所述，AEBP1下調(diào)時可能通過抑制NF-κB信號通路來抑制細胞的增殖和侵襲。

有研究發(fā)現(xiàn)ACT001(也稱為二甲基氨基半球葉化物，DMAMCL)通過調(diào)節(jié)AEBP1信號傳導來靶向GSCs[7]。ACT001是由Accendatech有限公司(中國天津)開發(fā)的半角內(nèi)酯，一種倍半萜烯內(nèi)酯。Hou等人[7]通過細胞活力分析，發(fā)現(xiàn)與正常人星形膠質(zhì)細胞相比，ACT001顯著抑制了患者來源的GSC 1123和R39細胞中膠質(zhì)瘤球的形成，流式細胞術分析細胞周期結(jié)果顯示，ACT001不會損壞正常人星形膠質(zhì)細胞。后又通過生物信息學、qRT-PCR、蛋白印記等方法確定了ACT001可以通過靶向AEBP1來抑制膠質(zhì)瘤的進展。

為了研究ACT001抑制膠質(zhì)瘤進展的機制，Hou首先用ACT001處理GSC 1123和R39細胞，檢測到AEBP1表達降低、AKT磷酸化(p-AKT)減弱。之后用兩種不同的shRNA敲低GSC 1123和R39細胞中的AEBP1時，與對照組相比p-AKT和細胞增殖也顯著降低。進一步實驗表明:與ACT001單獨治療相比，AEBP1敲低與ACT001治療聯(lián)合使用并未進一步減弱p-AKT和細胞增殖。由此可見，AEBP1的異位表達增加了GSC 1123和R39細胞中的細胞增殖并減弱了ACT001抑制細胞增殖。綜上所述，ACT001靶向AEPP1從而減少p-AKT和GSC增殖。Hou還用PI3K抑制劑LY294002處理GSC 1123細胞(無論是否使用ACT001)，與載體對照相比，LY294002處理抑制了p-AKT和細胞增殖，并且使AEBP1表達降低。與ACT001或LY294002的單次治療相比，ACT001處理與LY294002聯(lián)合應用時，p-AKT和細胞增殖進一步降低。由此可見ACT001通過AEBP1激活的PI3K/AKT信號傳導抑制GSC增殖。Hou等研究者還發(fā)現(xiàn)在GSC 1123和R39細胞中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)誘導AEBP1表達，促使p-AKT活化，并促進細胞增殖和膠質(zhì)瘤球的形成，而ACT001治療則會抑制上述情況。很多研究已證明高TGF-β活性導致膠質(zhì)瘤患者的預后不良。

1.2 AEBP1在結(jié)直腸癌中的研究 結(jié)直腸癌(Colorectal cancer，CRC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居第三，晚期患者預后不良，研究探索新的診斷、治療及預后的生物學標志物尤為重要。Li等[8]運用免疫組化的方法對62個患者的CRC組織進行AEBP1表達的檢測，首次證明，與正常的結(jié)腸黏膜組織相比，AEBP1在CRC組織中高表達。之后統(tǒng)計學分析檢驗結(jié)果證實，高水平的AEBP1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期呈正相關。Kaplan-Meier方法和對數(shù)秩測試結(jié)果顯示，AEBP1高表達時，CRC患者的總生存期和無病生存期較短。Xing等人[9]通過分子生物學實驗(如qRT-PCR、Western blot和IHC等)進一步驗證了這一結(jié)論，又通過構(gòu)建敲低和過表達細胞模型以及動物實驗證明AEBP1的過表達會促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力。之后，Li及其同事[8]使用miR-214(一種AEBP1消耗siRNA)轉(zhuǎn)染的人CRC HT-29細胞系進行研究，發(fā)現(xiàn)抑制AEBP1表達聯(lián)合奧沙利鉑治療將導致細胞增殖顯著降低，且細胞凋亡顯著增加，可見AEBP1的表達對腫瘤細胞化療的敏感性有影響；后來還證明AEBP1上游靶基因是miR-214。綜上所述，miR-214可能作為參與AEBP1調(diào)控的上游基因，通過對AEBP1負調(diào)控來增強HT-29細胞對奧沙利鉑化療的敏感性。上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)參與各種腫瘤過程，導致腫瘤細胞之間黏附力降低甚至喪失，使腫瘤細胞具有較強的侵襲和遷移能力。EMT過程通常分別伴隨著E鈣黏蛋白和波形蛋白表達的下調(diào)和上調(diào)。Xing等[9]進一步研究發(fā)現(xiàn)AEBP1可以上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶2、波形蛋白和TWIST 的mRNA和蛋白表達水平，但僅在蛋白水平下調(diào)E鈣黏蛋白表達，從而促進CRC細胞的增殖、遷移和侵襲。Li Dandan等人[10]發(fā)現(xiàn)AEBP1和EMT相關基因在惡性細胞和基質(zhì)細胞中表達，在成纖維細胞中表達最高，此外，AEBP1表達與成纖維細胞生物標志物的表達呈正相關。AEBP1介導的EMT可能與促進成纖維細胞活化有關，但其確切機制尚未明了，仍需要進一步研究。在最近的一項研究中表明，AEBP1在結(jié)腸癌中高表達并通過激活Wnt/β-catenin信號通路誘導EMT進程從而促進結(jié)腸癌細胞增殖遷移[11]。Xing等人[9]還發(fā)現(xiàn)，AEBP1表達的下調(diào)降低了CRC細胞中p-p65蛋白水平，而異位過表達AEBP1則增加了p-p65蛋白水平。通過Western blot分析檢測AEBP1可以調(diào)節(jié)p65進入細胞核，通過使用NF-κB抑制劑BAY117082處理AEBP1過表達細胞，觀察到抑制NF-κB活性顯著減弱了AEBP1誘導的MMP2、波形蛋白和TWIST表達的上調(diào)和E鈣黏蛋白表達下調(diào)，從而促進CRC的發(fā)生與發(fā)展。此外，BAY117082顯著降低了體外過表達AEBP1細胞的集落形成和侵襲能力。綜上所述，AEBP1通過NF-κB信號通路上調(diào)MMP2、波形蛋白和TWIST的表達，下調(diào)E鈣黏蛋白的表達，從而促進CRC的進展。

Yorozu等[12]證明在結(jié)直腸癌中血管內(nèi)皮細胞中AEBP1的上調(diào)促進腫瘤血管生成。他們首先從14個CRC組織樣本和相應的正常結(jié)直腸組織中成功分離出內(nèi)皮細胞和上皮細胞，然后通過RNA 測序分析和TaqMan測定驗證得出結(jié)果：腫瘤內(nèi)皮細胞中AEBP1的表達較正常內(nèi)皮細胞的表達顯著上調(diào)。同時免疫組化驗證得出，AEBP1在原發(fā)性結(jié)直腸癌組織的血管內(nèi)皮和基質(zhì)中大量表達這一相同結(jié)論。此外，癌癥基因組圖譜(TCGA)數(shù)據(jù)集中的原發(fā)性CRC組織RNA-seq數(shù)據(jù)分析表明，AEBP1的高表達與不良的總生存期相關。有趣的是，在Yorozu等人之后的實驗中發(fā)現(xiàn)，人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)中的 AEBP1 表達被證明可以通過來自 CRC 細胞的腫瘤條件培養(yǎng)基以及與CRC細胞的直接共培養(yǎng)而增加。因此他們使用HUVECs進行了一系列AEBP1敲低實驗，結(jié)果表明AEBP1敲低會抑制HUVEC的增殖和體外管形成。其中異種移植模型實驗結(jié)果顯示，HUVECs中的AEBP1敲低會減少異種移植腫瘤中的微血管形成，但并不影響腫瘤體積。最后，Yorozu等研究者又對HUVECs的基因表達微陣列進行分析及qRT-PCR的驗證，結(jié)果顯示AEBP1的過表達與許多血管生成或內(nèi)皮功能相關的基因表達存在正相關，這些基因包括AQP1(水通道蛋白1)，SELE(選擇蛋白E)和GJA4(間隙連接蛋白，α-4)等，AEBP1可能通過靶向多個血管生成相關基因來促進腫瘤血管生成。

1.3 AEBP1在乳腺癌中的研究 在諸多的惡性腫瘤之中，乳腺癌是女性最常見的癌癥，也是全世界女性癌癥患者死亡的主要病癥。乳腺基質(zhì)中AEBP1的異常上調(diào)可能誘導乳腺上皮細胞異常增殖從而潛在地促進腫瘤發(fā)生。Holloway等[13]發(fā)現(xiàn)基質(zhì)AEBP1過表達可能通過增加乳腺中的NF-κB活性介導炎癥信號傳導，最終促進乳腺上皮細胞增生；基質(zhì)巨噬細胞中AEBP1通過調(diào)節(jié)TNFα信號傳導來調(diào)節(jié)乳腺上皮細胞生長，以誘導乳腺上皮中的NF-κB活性；AEBP1不僅通過調(diào)節(jié)TNFα信號傳導，而且通過調(diào)節(jié)Shh信號傳導來促進乳腺增生?？偟膩碚f巨噬細胞中AEBP1通過TNFα、Akt、NF-κB和Shh信號傳導的協(xié)同作用引起乳腺上皮細胞異常增殖。

1.4 AEBP1在其他腫瘤中的研究 研究發(fā)現(xiàn)激活PI3K/Akt-CREB-AEBP1-NF-κB途徑有助于BRAF突變性黑色素瘤細胞中對PLX4032的獲得性耐藥性，AEBP1可能成為治療BRAF抑制劑耐藥性黑色素瘤的新治療靶點[14]。應用加權基因共表達網(wǎng)絡分析發(fā)現(xiàn)AEBP1是與膀胱癌患者TNM分期密切相關的樞紐基因[15]。

2 在非腫瘤疾病中的作用

2.1 AEBP1在腹主動脈瘤中的研究 腹主動脈瘤(AAA)是一種血管疾病，主要特征為腹主動脈永久性局部全層擴張，發(fā)病率和死亡率逐步增高，手術治療并不適用于所有患者，因此尋找非手術治療的方式(如靶向治療)以使更多的患者受益尤為重要。Ren[16]等研究者通過蛋白質(zhì)組同位素標記相對和絕對定量(isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ)實驗結(jié)果顯示AEBP1在AAA患者中高表達，且通過qRT-PCR，免疫印跡，免疫組織化學和ELISA驗證了AAA患者AEBP1的平均表達水平高于對照組。還通過免疫印跡和qRT-PCR證明了人AAA樣品中NF-κB通路的異常激活。之后，用豬胰彈性蛋白酶灌注法造AAA大鼠模型，用shAEBP1轉(zhuǎn)染沉默AEBP1，大鼠AAA的發(fā)展受到抑制；并通過測量大鼠模型血管壁中金屬蛋白酶MMP-2/9和炎癥細胞因子TNFα、MCP-1、IL-6和IL-1β的水平與對照組比較，發(fā)現(xiàn)沉默AEBP1顯著抑制MMPs和炎癥因子。最后，通過體外研究得出結(jié)論，AEBP1通過促進NF-κB通路的激活，上調(diào)促炎因子和MMPs，從而促進AAA的進展。

2.2 AEBP1在非酒精性脂肪性肝炎中的研究 Glenn等人[17]研究發(fā)現(xiàn)與小葉炎癥、脂肪變性和正常肝臟組織相比，肝纖維化時AEBP1表達升高；在非酒精性脂肪性肝炎患者中，隨著纖維化惡化表達升高；AEBP1在活化的肝星狀細胞中上調(diào)5.8倍(肝星狀細胞是肝臟的關鍵纖維化細胞)。由于非酒精性脂肪性肝病與2型糖尿病密切相關，作者又做了相關研究發(fā)現(xiàn)，高葡萄糖、果糖或棕櫚酸酯促進AEBP1表達；在果糖和棕櫚酸酯雙重作用下AEBP1表達顯著增高，且具有很大的非累加效應。還通過研究證明miR-372-3p和miR-373-3p可能起下調(diào)AEBP1的作用。

2.3 AEBP1在其他非腫瘤疾病中的研究 Tao等[18]的研究結(jié)果證實，血漿細胞外囊泡的AEBP1水平在糖尿病腎病患者中表達量顯著增加，并且是多個關鍵臨床參數(shù)功能的良好指標。由此得知，血漿細胞外囊泡來源的AEBP1水平可作為糖尿病腎病診斷的新型有效生物標志物。Bogachev等人[19]的體內(nèi)實驗數(shù)據(jù)強烈表明，巨噬細胞內(nèi)AEBP1在動脈粥樣硬化發(fā)展中起著關鍵的調(diào)節(jié)作用，它可以作為預防或治療動脈粥樣硬化的潛在治療靶點。有研究表明阿爾茲海默癥中AEBP1的上調(diào)與Braak分期和神經(jīng)纖維纏結(jié)密度密切相關[20]。

綜上所述，AEBP1的高表達與多種腫瘤及非腫瘤疾病密切相關，通過NF-κB通路激活、促進血管生成等途徑促進腫瘤的發(fā)生及不良預后，通過上調(diào)促炎因子、金屬蛋白酶等促進炎癥性疾病或慢性疾病的進展。AEBP1有望成為腫瘤性疾病的治療靶點，對于無法手術治療緩解及目前療效不顯著的非腫瘤性疾病，同樣意義非凡。但目前仍需更深入的研究與探討，需要更多的實驗與數(shù)據(jù)為AEBP1的臨床應用提供理論基礎。