權起元，陳飛，王本歡，楊曉玲，楊秀娟，王智勇，李碩，2，3*（. 甘肅中醫(yī)藥大學，蘭州730000；2. 甘肅省高校中（藏）藥化學與質量研究省級重點實驗室，蘭州 730000；3. 甘肅省中藥質量與標準研究重點實驗室培育基地，蘭州 730000；. 甘肅省中藥現代制藥工程研究院有限公司，蘭州 730000）

便秘是臨床上常見的胃腸道功能紊亂性疾病，我國成人慢傳輸型便秘（slow transit constipation，STC）占整個便秘患者的15%～42%[1-5]。仝小林院士基于“態(tài)靶同調”辨理念[6-9]，認為STC的主要病因病機是氣血津液虧虛、腸燥失運，結合臨床實踐總結出由黃芪、當歸、肉蓯蓉、火麻仁組成的益氣活血通便方，針對年老體弱、產后、久病引起的氣血虧虛，腸道濡潤失司的STC人群，有明顯的補氣養(yǎng)血、潤腸通便作用，臨床治療效果顯著。

益氣活血通便組方臨床劑型為湯劑，存在服用口感差，服用量大，難以保存、運輸等問題。為了更好地服務于患者，本課題組運用傳統(tǒng)煎藥方法，結合現代中藥顆粒劑制備技術對該組方進行顆粒劑制備，以期獲得一種服用、攜帶方便的中藥顆粒。本試驗以輔料配比、干燥溫度、乙醇體積分數、乙醇用量、輔料與浸膏用量比例進行單因素考察，在單因素試驗的基礎上，選擇乙醇體積分數、輔料配比（糊精∶可溶性淀粉）、輔料與浸膏用量比例為考察對象，以吸濕率、成型率、溶化時間、休止角作為考察指標，結合星點設計-響應面法和CRITIC法，研究益氣活血通便顆粒的最佳成型工藝，為其臨床應用及制劑生產提供技術支撐。

1 材料

1.1 儀器

EX224ZH型電子分析天平、EX2202ZE電子天平（奧豪斯儀器常州有限公司）；DHG-9123A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）；HH-4型數顯恒溫水浴鍋（江蘇金壇市環(huán)宇科學儀器廠）；16目尼龍篩（孔徑1.25 mm）、1號及5號藥典標準篩（上海寶藍試驗儀器制造有限公司）。

1.2 試藥

黃芪（批號：20220402）、當歸（批號：20220203）、肉蓯蓉（批號：21080601）、火麻仁（批號：22032802）飲片由甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院提供，經甘肅中醫(yī)藥大學王明偉副教授鑒定分別來源于豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao的根、傘形科植物當歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根、列當科植物肉蓯蓉Cistanche deserticolaY.C.Ma的干燥帶鱗葉的肉質莖、?？浦参锎舐镃annabis sativaL.的干燥成熟果實。

糊精（批號：20191101B，曲阜市藥用輔料有限公司）；可溶性淀粉（批號：20201115）、無水乙醇（批號：20210301）、硫酸銨（批號：20180623）（天津市大茂化學試劑廠）；益氣活血通便處方浸膏（自制）。

2 方法與結果

2.1 益氣活血通便處方稠浸膏的制備

依據處方配伍，分別精密稱取黃芪15 g、當歸15 g、肉蓯蓉18 g、火麻仁30 g，加適量蒸餾水浸泡后，熱回流裝置密閉提取，將提取液趁熱用紗布濾過，即得煎煮液。合并煎煮液，65℃減壓濃縮至相對密度在1.21左右的浸膏，即得。

2.2 顆粒的制備工藝

采用濕法制粒的方法，精密稱取益氣活血通便處方浸膏和輔料，輔料按“等量遞增法”充分混勻，再逐次適量加入浸膏，并加入適量乙醇，制軟材，過16目篩制粒，60℃常壓干燥1 h，整粒，即得。

2.3 成型率的測定

采用雙篩分法測定[10]。取所制的益氣活血通便顆粒，質量記為M，依次通過一號和五號篩，收集通過一號篩但未通過五號篩的顆粒，質量記為M1，按照公式（1）計算成型率。

2.4 吸濕性的測定

參照《中國藥典》2020年版（四部）通則（9103）“藥物引濕性試驗指導原則”[10]，取恒重干燥后的稱量瓶（外徑為50 mm，高為15 mm），于試驗前24 h置于（25±1）℃的恒溫干燥器內，底部放置硫酸銨飽和溶液，稱重記為M1。取益氣活血通便顆適量，平鋪于稱量瓶底部，顆粒厚度約1 mm，稱重記為M2。打開瓶塞，將稱量瓶置于上述恒溫恒濕條件下24 h。蓋好瓶塞，稱重記為M3。按照公式（2）計算吸濕率。

2.5 流動性的測定

采用固定漏斗法測定[11]。將漏斗固定于水平放置的白紙上方，使漏斗下口與白紙的距離為H，將益氣活血通便顆粒緩慢地沿漏斗壁倒入，直至漏斗下方形成的圓錐體接觸到漏斗下口時停止，測量圓錐體底部的直徑R。則tanα＝2H/R，α即為休止角。重復測定3次，求平均值。

2.6 溶化性的測定

參照《中國藥典》2020年版（四部）顆粒劑（0104）中可溶顆粒溶化性檢查[10]。稱取益氣活血通便顆粒約10 g，加入80℃熱水200 mL，攪拌，直至顆粒全部溶化，記錄溶化時間。

2.7 CRITIC法確定各指標權重系數

對各指標試驗數據進行線性插值處理，對于越大越好的指標（如成型率）采用公式[12]：標準化數據（%）＝（實測值-最小值）/（最大值-最小值）×100%。

對于越小越好的指標（如吸濕率、溶化時間、休止角）采用公式：標準化數據（%）＝（最大值-實測值）/（最大值-最小值）×100%。

數據標準化處理后，將數據轉換為SPSS數據格式，通過數據分析平臺SPSSAU輸入數據，選擇功能欄“綜合評價”，選用方法“CRITIC權重”，即可獲得各項考察指標的權重系數。

2.8 綜合評分的計算

根據“2.7”項下獲得的標準化數據和權重系數，綜合評分等于對應的指標權重系數乘以各考察指標標準化數據，總和相加即得[13]。

2.9 單因素試驗

2.9.1 輔料配比對益氣活血通便顆粒影響 稱取約10 g益氣活血通便處方浸膏，選擇輔料為糊精與可溶性淀粉，比例為1∶1、3∶1、5∶1、7∶1、9∶1進行考察，設定輔料與浸膏比例為2.5∶1，乙醇體積分數為60%，乙醇用量為浸膏與輔料的比重為10%，干燥溫度為60℃，干燥時間為1 h。分別以吸濕率、成型率、休止角、溶化時間作為評價指標，計算綜合評分作為最終評價指標。將數據標準化處理后，得到成型率、休止角、吸濕率、溶化時間的權重分別為20.83%、24.07%、32.63%、22.47%。當糊精與可溶性淀粉比例為5∶1時，所制顆粒成型率為93.24%，休止角為41.98 °，吸濕率為14.58%，溶化時間為24 s，綜合評分為58.87（見表1）。因此選擇糊精與可溶性淀粉的比例為5∶1。

表1 輔料配比對益氣活血通便顆粒影響Tab 1 Effect of excipients ratio on Yiqi Huoxue Tongbian granules

2.9.2 輔料與浸膏用量比例對益氣活血通便顆粒影響 稱取約10 g益氣活血通便處方浸膏，選擇輔料與浸膏比例為2∶1、2.5∶1、3∶1、3.5∶1、4∶1，糊精與可溶性淀粉比例為5∶1，其他條件不變。以所制顆粒的吸濕率、成型率、溶化時間、休止角作為評價指標。將數據標準化處理后，得到成型率、休止角、吸濕率、溶化時間的權重為39.61%、20.57%、23.78%、16.04%。當浸膏與輔料比例為1∶3時，所制顆粒成型率為94.45%，休止角為41.02°，吸濕率為13.25%，溶化時間為22 s，綜合評分為71.85（見表2）。故選取浸膏與輔料比1∶3為最佳比例。

表2 輔料與浸膏用量比例對益氣活血通便顆粒影響Tab 2 Effect of the ratio of extract to excipients on Yiqi Huoxue Tongbian granules

2.9.3 乙醇體積分數對益氣活血通便顆粒影響由于藥材浸膏含糖類成分較多，黏性較大，用水作為潤濕劑制粒成型率低、質硬，故不選用水作為潤濕劑，在查閱文獻的基礎上，確定以乙醇作為潤濕劑。稱取約10 g益氣活血通便處方浸膏，輔料與浸膏比例為3∶1，糊精與可溶性淀粉比例為5∶1，選用體積分數10%、30%、50%、70%、90%的乙醇作為潤濕劑，其余條件不變。以顆粒的吸濕率、成型率、溶化時間作為考察指標，計算綜合評分作為最終評價指標。將數據標準化處理后，得到成型率、吸濕率、溶化時間的權重為25.58%、38.11%、36.31%。當乙醇體積分數為50%時，所制顆粒成型率為93.71%，吸濕率為14.04%，溶化時間為45 s，綜合評分為58.14（見表3）。因此制備益氣活血通便顆粒的潤濕劑最佳體積分數為50%。

表3 乙醇體積分數對益氣活血通便顆粒影響Tab 3 Effect of ethanol volume fraction on Yiqi Huoxue Tongbian granules

2.9.4 乙醇用量對益氣活血通便顆粒影響 稱取約10 g益氣活血通便處方稠浸膏，輔料與浸膏比例為3∶1，糊精與可溶性淀粉比例為5∶1，乙醇體積分數為50%，加入占浸膏與輔料比重5%、10%、15%、20%、25%的乙醇，其他條件不變。以所制顆粒的吸濕率、成型率、溶化時間進行測定作為評價指標，計算綜合評分作為最終評價指標。將數據標準化處理后，得到成型率、吸濕率、溶化時間的權重為50.68%、24.37%、24.96%。當乙醇用量為浸膏與輔料比重的15%時，所制顆粒成型率為94.83%，吸濕率為12.35%，溶化時間為51 s，綜合評分為54.63（見表4）。選取用量為浸膏與輔料比重的15%的乙醇作為最佳潤濕劑用量。

表4 乙醇用量對益氣活血通便顆粒影響Tab 4 Effect of ethanol consumption on Yiqi Huoxue Tongbian granules

2.9.5 干燥溫度對益氣活血通便顆粒影響 稱取約10 g益氣活血通便處方稠浸膏，輔料與浸膏比例為3∶1，輔料配比糊精與可溶性淀粉比例為5∶1，乙醇體積分數為50%，乙醇用量為浸膏與輔料比重的15%，干燥溫度分別為60、80、100、120、140℃，干燥時間為1 h。以所制得顆粒的吸濕率、成型率、溶化時間進行測定作為評價指標，計算綜合評分作為最終評價指標。將數據標準化處理后，得到成型率、吸濕率、溶化時間的權重為38.53%、35.29%、26.18%。當干燥溫度為60℃時，所制顆粒成型率為93.07%，吸濕率為12.96%，溶化時間為70 s，綜合評分為66.09（見表5）。所以選取60℃作為益氣活血通便顆粒成型工藝的最佳干燥溫度。

表5 干燥溫度對益氣活血通便顆粒影響Tab 5 Effect of drying temperature survey on Yiqi Huoxue Tongbian granules

2.10 星點設計-響應面法優(yōu)選益氣活血通便顆粒的成型工藝

在單因素試驗的基礎上，選擇乙醇體積分數、輔料配比（糊精∶可溶性淀粉）、輔料與浸膏用量比例作為影響益氣活血通便顆粒質量的主要因素，以吸濕率、成型率、溶化時間、休止角作為考察指標，運用CRITIC法確定各指標權重系數，計算綜合評分作為最終評價指標。運用Design Expert 8.0.6軟件進行三因素五水平的星點設計，因素水平見表6，試驗設計及各指標測量結果見表7。按照“2.7”項下計算方法對考察指標吸濕率、成型率、溶化時間、休止角的數據進行線性插值處理，獲得各考察指標的標準化數據。通過SPSSAU數據分析平臺運用CRITIC法處理獲得各指標權重系數，結果得到成型率、休止角、吸濕率、溶化時間的權重為19.80%、26.54%、33.10%、20.55%。最后通過“2.8”項下方法計算綜合評分。

表6 因素水平Tab 6 Factor and level

表7 星點設計及各指標檢測結果Tab 7 Design of star points and test results of various indicators

2.10.1 模型擬合 運用Design-Expert 8.0.6軟件進行多元線性回歸，得到回歸方程：綜合評分＝76.94+3.29A+3.56B+2.47C-0.79AB-0.61AC-5.64BC-11.47A2-7.18B2-8.04C2。通過方差分析（見表8）顯示，失擬項P＞0.05，說明方程擬合度較好[14]，無失擬因素存在，所選的二次回歸模型適當；同時，回歸方程的顯著性檢驗P＜0.0001，表明模型預測情況良好，與實際情況十分吻合[15]。A、B、C三因素對綜合評分的影響程度依次為 B＞A＞C[16]。表明輔料與浸膏用量比例、輔料配比和乙醇體積分數均能顯著影響益氣活血通便顆粒的成型工藝，并且輔料配比、輔料與浸膏用量比例影響較大。

表8 響應面二次模型方差分析Tab 8 ANOVA of the secondary model of the effect surface

2.10.2 響應面分析 運用Design-Expert 8.0.6軟件，繪制綜合評分與輔料與浸膏用量比例、輔料配比（糊精∶可溶性淀粉）、乙醇體積分相交互的三維效應面曲線圖（見圖1～3），由圖可知各因素對益氣活血通便顆粒的成型的影響都比較明顯，輔料配比（糊精∶可溶性淀粉）與乙醇體積分數的重合面積最小，其交互作用最為顯著。通過疊加各個效應面的較優(yōu)區(qū)域，篩選較優(yōu)取值范圍[17]。得到益氣活血通便顆粒成型工藝的最佳條件為：乙醇體積分數為50.74%；輔料配比（糊精∶可溶性淀粉）為5.21∶1；輔料與浸膏用量比例為3.07∶1，預測綜合評分為77.56。

圖1 輔料與浸膏用量比例和輔料配比對綜合評分影響的交互作用Fig 1 Interaction between the proportion of excipients and extract dosage and the ratio of excipients on the comprehensive score

2.10.3 最佳成型工藝驗證試驗 由于考慮到實際生產過程的合理性和操作的可行性，確定益氣活血通便顆粒的最佳成型工藝為：乙醇體積分數為50%；輔料配比（糊精∶可溶性淀粉）為5∶1；輔料與浸膏用量比例為3∶1。為驗證模型可靠性，按上述最佳成型工藝進行驗證試驗，共進行3組平行試驗，結果見表9。結果顯示，3組平行試驗的平均綜合評分為76.28，與模型預測的綜合評分77.56相比，相對誤差1.65%，表明模型預測性良好，可靠穩(wěn)定。

表9 驗證試驗結果Tab 9 Verification tests

圖2 輔料與浸膏用量比例和乙醇體積分數對綜合評分影響的交互作用Fig 2 Interaction of excipients with extract dosage ratio and ethanol volume fraction on the effect of comprehensive score

3 討論

本研究中運用傳統(tǒng)煎藥方法進行益氣活血通便組方合煎，制得浸膏，結合現代中藥顆粒劑制備方法，采用濕法制粒制備顆粒，研究穩(wěn)定可行的益氣活血通便顆粒最佳成型工藝。

圖3 輔料配比和乙醇體積分數對綜合評分影響的交互作用Fig 3 Interaction of excipient ratio and ethanol volume fraction on the effect of comprehensive score

由于組方中含黃芪、當歸兩味中藥，制備過程中發(fā)現水煎液中含多糖類成分較多，濃縮制備浸膏甜度適宜，無需再添加矯味劑，所制得的顆?？诟羞m宜，氣味易于接受。益氣活血通便組方浸膏黏性較強，故用乙醇作潤濕劑。糊精和淀粉價格低廉，是常用的輔料?？扇苄缘矸叟c浸膏混合，黏連情況較嚴重，無法達到制粒要求；而糊精具有穩(wěn)定性好、溶解性好、黏性低、吸濕性低等優(yōu)點，故將兩種輔料混合使用。

星點設計-效應面法在中藥制劑工藝優(yōu)化過程中運用廣泛，客觀賦值的CRITIC權重法適用于計算成型工藝中的吸濕率、成型率、溶化時間、休止角的權重賦值，可作為益氣活血通便顆粒的評價標準。本研究通過星點設計-響應面法結合CRITIC權重法，優(yōu)選益氣活血通便顆粒的最佳成型工藝，結果所建模型預測準確，并且重復性較好，所制顆粒質量穩(wěn)定，可用于益氣活血通便顆粒的生產。