郭旭佳

（保定冀中藥業(yè)有限公司，河北 保定 071000）

雞大腸桿菌病是一種局部或全身感染性疾病，由不同血清型的大腸桿菌引起。該病在養(yǎng)殖場中發(fā)病率45%～60%，常見主要類型有：氣囊炎、輸卵管炎、心包炎及敗血癥。病雞和污染的環(huán)境為雞大腸桿菌病的主要傳染源，以水平傳播和垂直傳播為主要傳播途徑。水平傳播主要為消化道傳播和呼吸道傳播，飲水、飼料及糞便為主要的消化道傳播，環(huán)境中的粉塵和氣體主要為呼吸道傳播。垂直傳播主要為輸卵管或種蛋被大腸桿菌感染。雞大腸桿菌病常見的臨床癥狀為雞群拉黃白糞，雞只閉目、炸毛及腳爪干癟，個(gè)別雞只出現(xiàn)仰頭、角弓反張等神經(jīng)癥狀。剖檢癥狀為胸部出淺黃白色渾濁的腹水，心包膜增厚，內(nèi)有渾濁液體滲出，肝臟腫大形成纖維素性滲出，病程長的雞只出現(xiàn)包心包肝。腸道和氣囊有充血點(diǎn)和出血點(diǎn)。隨著雞養(yǎng)殖業(yè)集約化的發(fā)展及大腸桿菌耐藥菌株的增加，大腸桿菌病在養(yǎng)殖領(lǐng)域的發(fā)生流行率呈現(xiàn)逐年增高的態(tài)勢，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。臨床中大腸桿菌病防控不理想的原因主要包括大腸桿菌血清型多，導(dǎo)致疫苗交叉保護(hù)差。由于臨床中抗生素的不合理使用，導(dǎo)致雞源性大腸桿菌耐藥嚴(yán)重，特別是對(duì)硫酸新霉素可溶性粉、氨芐西林及復(fù)方阿莫西林粉等。因此，尋求高效經(jīng)濟(jì)的防治大腸桿菌病方法具有重要意義。

四黃止痢顆粒（主要成分黃連、黃芩、黃柏、大黃、板藍(lán)根及甘草）收錄于2020 版《中國獸藥典》二部，具有清熱瀉火、止瀉的功效，主要用于濕熱泄痢，雞大腸桿菌病?，F(xiàn)代藥理表明四黃止痢顆粒中的中藥材具有抗病原微生物、拮抗細(xì)菌內(nèi)毒素及保護(hù)腸道黏膜和上皮細(xì)胞的作用。本研究采用2 倍梯度稀釋法測定四黃止痢顆粒聯(lián)合復(fù)方阿莫西林粉對(duì)雞源性大腸桿菌抑制作用，以期為治療大腸桿菌病提供參考和數(shù)據(jù)支撐。

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 試劑和藥物

LB 液體培養(yǎng)基、LB 固體培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基。四黃止痢顆粒（主要成分為黃連、黃柏、黃芩、大黃、板藍(lán)根及甘草）和復(fù)方阿莫西林粉（主要成分為阿莫西林和克拉維酸鉀）由保定冀中藥業(yè)有限公司提供；大腸桿菌(臨床分離并經(jīng)生理生化和16sRNA 鑒定為大腸桿菌)。

2.2 方法

2.2.1 大腸桿菌O101 菌液的制備

將試管斜面保存的大腸桿菌O101 進(jìn)行活化培養(yǎng)，活化后的菌株接種至LB 培養(yǎng)基并于37℃，180 轉(zhuǎn)/分鐘培養(yǎng)12 小時(shí)，即為菌株O101菌液。

2.2.2 四黃止痢顆粒聯(lián)合復(fù)方阿莫西林粉對(duì)大腸桿菌的抑菌率測定

試驗(yàn)分為5 組，分別為空白組、菌液對(duì)照組、四黃止痢顆粒組（100 克/150 千克水）、復(fù)方阿莫西林粉組（100 克/200 千克水）、白頭翁+新霉素組 （100 克/150 千克水+100 克/200 千克水），每組設(shè)置3 個(gè)重復(fù)。每組試管中先加入8毫升的LB 培養(yǎng)基，空白組不接種菌液，其他組以2%劑量接種大腸桿菌O101 菌液，并根據(jù)每組藥物的劑量添加藥物，配制完成后于37℃，180 轉(zhuǎn)/分鐘培養(yǎng)24 小時(shí)，測定600 納米波長下的吸光度值，抑菌率：（對(duì)照吸光度值-試驗(yàn)吸光度值）/對(duì)照吸光度值×100。

2 試驗(yàn)結(jié)果

不同藥物組作用于大腸桿菌O101 的抑菌率如圖，由圖可知，四黃止痢顆粒對(duì)雞源性大腸桿菌具有一定的抑菌效果，復(fù)方阿莫西林粉對(duì)雞源性大腸桿菌的抑菌率為48.92%，說明臨床分離的大腸桿菌對(duì)復(fù)方阿莫西林有很高的耐藥性，而四黃止痢顆粒組聯(lián)合復(fù)方阿莫西林組對(duì)禽源性大腸桿菌的抑菌率為94.54%，顯著高于四黃止痢顆粒組和復(fù)方阿莫西林粉組，說明四黃止痢顆粒能夠降低大腸桿菌對(duì)復(fù)方阿莫西林粉的敏感性，提高復(fù)方阿莫西林粉的殺菌效果。

圖 不同藥物對(duì)大腸桿菌抑菌率

3 討論

雞源大腸桿菌為條件致病菌，其廣泛存在于自然界環(huán)境和雞只體內(nèi)。雞大腸桿菌病的發(fā)病原因主要有以下幾點(diǎn)：雞免疫抑制疾?。浑u支原體感染、新城疫病毒、禽流感病毒、傳染性支氣管炎病毒病的繼發(fā)感染；飼養(yǎng)管理和飼料營養(yǎng)差。雞大腸桿菌病可以通過流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢變化及實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行確定。

臨床中可通過加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生，嚴(yán)格消毒，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激及提高雞只免疫預(yù)防雞大腸桿菌病。隨著養(yǎng)殖業(yè)集約化的發(fā)展及抗生素的不合理使用，雞源大腸桿菌耐藥性非常嚴(yán)重，大腸桿菌產(chǎn)生耐藥的機(jī)理主要為：通過產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶、細(xì)胞膜通透性的改變，阻礙抗生素進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)、作用靶位的改變及主動(dòng)外排泵等機(jī)制產(chǎn)生耐藥性。大腸桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)，給臨床中防控大腸桿菌病帶來很大困難。

中獸藥制劑的作用特點(diǎn)為多種有效成分通過不同的作用途徑作用于不同的靶點(diǎn)，且制劑安全、毒副作用小，菌株對(duì)中藥不易出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象。同時(shí)，研究證明許多中藥材，例如板藍(lán)根、黃芩及黃連等通過不同機(jī)制降低大腸桿菌的耐藥性。以黃連、黃柏及大黃等藥材為處方的四黃止痢顆粒在臨床中主要用于濕熱瀉痢，雞大腸桿菌病，其組方由黃連、黃芩、大黃、黃柏、板藍(lán)根及甘草組成，黃連瀉火燥濕、熱瀉腹痛，為君藥；黃芩、黃柏清熱燥濕、解毒，為臣藥；大黃瀉熱毒，破積滯，板藍(lán)根清熱解毒，涼血利咽，共為佐藥；甘草和中緩急、潤肺，解毒，調(diào)和諸藥，為使藥。諸藥合用，共奏清熱瀉火，涼血止痢之功。由于臨床中抗生物使用過程中劑量、配伍及方法的不正確，導(dǎo)致大腸桿菌嚴(yán)重耐藥，因此，臨床中應(yīng)用抗生素防治大腸桿菌效果不理想。本試驗(yàn)采用二倍梯度稀釋法研究四黃止痢顆粒聯(lián)合復(fù)方阿莫西林粉對(duì)大腸桿菌抑制作用，試驗(yàn)結(jié)果表明四黃止痢顆粒能夠降低大腸桿菌對(duì)復(fù)方阿莫西林粉耐藥性，因此，臨床中可以用四黃止痢顆粒配合復(fù)方阿莫西林粉治療雞大腸桿菌病。