李思潔，寧 巍，王養(yǎng)才

男性生殖障礙疾病已成為普遍問題，與人類基因的易感性、生存環(huán)境的嚴(yán)峻性及生活方式的變化都有著密切關(guān)系[1,2]。隱睪作為小兒泌尿外科常見病之一，是男性不育及引起睪丸癌變的重要危險(xiǎn)因素。文獻(xiàn)[3]指出暴露環(huán)境內(nèi)分泌干擾物嚴(yán)重影響男性生殖系統(tǒng)的發(fā)育,環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的激素效應(yīng)是通過激素受體介導(dǎo)的[4]。雌激素受體基因多態(tài)性決定其對(duì)雌激素相關(guān)疾病的易感性，雌激素受體α基因(estrogen receptor alpha gene，ERα)是其較為重要的一個(gè)基因。關(guān)于ERα基因SNP12(rs6932902)位點(diǎn)多態(tài)性與隱睪發(fā)生的危險(xiǎn)因素仍存在較大爭(zhēng)議，這可能與研究背景及研究方法有關(guān)。相關(guān)文獻(xiàn)的總結(jié)分析報(bào)道較少，本研究對(duì)已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析，以評(píng)估ERα基因rs6932902位點(diǎn)的多態(tài)性與隱睪的關(guān)聯(lián)。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) (1)公開發(fā)表的病例-對(duì)照研究；(2)病例組為經(jīng)臨床確診的隱睪患者，對(duì)照組為健康人群；(3)對(duì)同一作者的重復(fù)發(fā)表文獻(xiàn)，選擇質(zhì)量最高且樣本量最大的一篇；(4)統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用恰當(dāng)，數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠，結(jié)果表達(dá)明確，有各種基因型頻率的數(shù)據(jù)。

1.2 檢索策略 以“SNP12、Estrogen Receptor 1、Receptor alpha, Estrogen、cryptorchidism”為英文檢索詞檢索PubMed、Embase、EBSCO；同時(shí)以“SNP12、雌激素受體基因多態(tài)性”和“隱睪”為中文關(guān)鍵詞檢索中國知網(wǎng)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫、維普及萬方數(shù)據(jù)庫，檢索時(shí)限1990-01至2021-05，查找關(guān)于ERα基因SNP12多態(tài)性與隱睪疾病相關(guān)性的病例對(duì)照研究，文種限制英文、中文。

1.3 文獻(xiàn)評(píng)價(jià) 兩名研究者根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)篩選、文章質(zhì)量評(píng)價(jià)及資料提取。根據(jù)文獻(xiàn)[5]評(píng)分表進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，0～6分為低質(zhì)量研究，>9分為高質(zhì)量研究。若兩人對(duì)文獻(xiàn)評(píng)價(jià)有異議時(shí)，則由第3名研究者共同討論并做出評(píng)判。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用STATA 12.0軟件進(jìn)行Meta分析。對(duì)納入文獻(xiàn)對(duì)照組進(jìn)行擬合優(yōu)度檢驗(yàn)(χ2檢驗(yàn))，以P>0.05來判斷是否符合Hardy-Weinberg平衡。納入文獻(xiàn)之間的異質(zhì)性采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析(檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.10)，并結(jié)合I2統(tǒng)計(jì)量以判斷異質(zhì)性大小。若無統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性(P>0.10，I2≤50%)[6]，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行Meta 分析，若存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性，在排除明顯臨床異質(zhì)性后，可采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行Meta分析。隨后對(duì)ESRαSNP12多態(tài)性位點(diǎn)各基因模型計(jì)算合并比值比(odds ratio，OR)以及95%可信區(qū)間(confidence intervals，CI )，以α=0.05為Meta分析的檢驗(yàn)水準(zhǔn)?；蚰Ｐ桶ǖ任换蚰Ｐ?Avs.G)、顯性模型(AA+AGvs.GG)、隱性模型(AAvs.AG+GG)、共顯性模型(AAvs.GG和AGvs.GG )以及超顯性模型(AA+GGvs.GA)。采用逐一剔除單個(gè)研究的方法進(jìn)行敏感性分析，觀察各項(xiàng)研究對(duì)合并效應(yīng)量的影響，繪制Begg漏斗圖對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行發(fā)表偏倚檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果 最初檢索出相關(guān)文獻(xiàn)58篇，逐層篩選后，總共有4篇病例對(duì)照研究符合納入標(biāo)準(zhǔn)，共包括病例組347例，對(duì)照組555例。

2.2 隱睪癥Mate研究納入文獻(xiàn)基本特征及質(zhì)量評(píng)價(jià) 見表1。

表1 隱睪癥Meta研究納入4篇文獻(xiàn)基本特征以及質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果

2.3 異質(zhì)性分析 對(duì)于納入的4篇文章的ESR基因rs6932902多態(tài)位點(diǎn)與各個(gè)基因模型進(jìn)行異質(zhì)性分析見表2。

表2 隱睪癥Meta研究納入4篇文獻(xiàn)的異質(zhì)性檢測(cè)

2.4 敏感性分析和發(fā)表偏倚評(píng)估 通過逐一剔除單項(xiàng)研究的方法進(jìn)行敏感性分析，以找出影響合并效應(yīng)量的主要文獻(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致異質(zhì)性高的文獻(xiàn)。采用Begg 漏斗圖對(duì)各基因模型進(jìn)行發(fā)表偏倚評(píng)估，未發(fā)現(xiàn)有發(fā)表偏移(圖1)。

圖1 隱睪癥Meta研究各基因模型發(fā)表偏倚漏斗圖

2.5 ERα基因rs6932902位點(diǎn)多態(tài)性與隱睪疾病相關(guān)性的Meta分析 (1)等位基因模型(AvsG)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析，以等位基因A為暴露因素，等位基因G為非暴露因素，結(jié)果提示：等位基因A與等位基因G在人群隱睪發(fā)病之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[OR=0.987，95%CI(0.594，1.612)，P=0.931](圖2A)。(2)顯性模型(AA+GAvsGG)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行合并分析，結(jié)果顯示，顯性模型AA+GAvsGG組人群在隱睪發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[OR=0.845，95%CI(0.494，1.446)，P=0.539](圖2B)。(3)隱性模型(AAvsGA+GG)，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行合并分析，結(jié)果顯示，隱性模型AAvsGA+GG組人群在隱睪發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，AA基因型組人群隱睪發(fā)病高于GA+GG型基因人群[OR=1.946，95%CI(1.005，3.767)，P=0.048](圖2C)。(4)共顯性模型(GAvsGG)：采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行合并分析，結(jié)果顯示：共顯性模型GAvsGG組人群在隱睪發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[OR=0.729，95%CI(0.451，1.180)，P=0.198](圖2D)。(5)共顯性模型(AAvsGG)：采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行合并分析，結(jié)果顯示，AA型基因型人群與GG型基因型人群發(fā)病率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異[OR=1.863，95%CI(0.947，3.663)，P=0.071](圖2E)。(6)超顯性模型(AA+GGvsGA)，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行合并分析，結(jié)果顯示，超顯性模型AA+GGvsGA組人群在隱睪發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，AA+GG基因型人群隱睪發(fā)生率較GA型基因型人群高[OR=1.549，95%CI(1.150，2.209)，P=0.005](圖2F)。

圖2 ERα基因rs6932902位點(diǎn)多態(tài)性與隱睪疾病相關(guān)性的Meta分析

3 討 論

隱睪是小兒泌尿系常見的先天性生殖系統(tǒng)畸形，發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，內(nèi)分泌因素、解剖因素、環(huán)境因素以及自身基因等因素都與隱睪的發(fā)生有密切關(guān)系[11-13]。有研究表明，ERα缺失導(dǎo)致男性不育，部分原因是對(duì)生精上皮和精子產(chǎn)生不利影響[14]。Rie等[8]首次分析了日本人ERα基因rs6932902位點(diǎn)多態(tài)性以及4種單體型與隱睪的關(guān)系后，相繼還有多國學(xué)者進(jìn)行了相關(guān)分析。

本研究最終納入4 篇病例對(duì)照研究，共包括347例患者及555例對(duì)照。各研究對(duì)照組基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，且研究質(zhì)量較高，可以認(rèn)為本研究基本可信。合并分析后得出最終結(jié)果，ERα基因rs6932902位點(diǎn)多態(tài)性在隱性模型以及超顯性模型中都與隱睪的發(fā)病相關(guān)。異質(zhì)性分析發(fā)現(xiàn)基因頻率模型以及隱性基因模型異質(zhì)性較大，這兩種基因模型采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。敏感性分析提示：所納入的文獻(xiàn)異質(zhì)性較好。可排除單一文獻(xiàn)引起的異質(zhì)性差異。利用各基因模型探討ERα基因rs6932902位點(diǎn)多態(tài)性與隱睪疾病的關(guān)系，結(jié)果顯示，在隱性模型以及超顯性模型中AA基因型及AA+GG基因型可增加隱睪風(fēng)險(xiǎn)，基因頻率、共顯性模型、顯性模型中個(gè)基因型與隱睪發(fā)病無關(guān)。

本研究的局限性：(1)納入本次Meta分析的研究只有4篇，沒有納入正在發(fā)表或者是未發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，限制為英文和中文，缺少了其他語言的相關(guān)文獻(xiàn)；(2)本文由于文獻(xiàn)數(shù)據(jù)原因，沒有根據(jù)種族進(jìn)行亞組分析，更缺少了其他種族的文獻(xiàn)報(bào)道；(3)由于文獻(xiàn)數(shù)據(jù)報(bào)道情況，未能對(duì)單雙側(cè)隱睪、年齡等因素進(jìn)行亞組分析。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)，ERα基因rs6932902位點(diǎn)多態(tài)性與隱睪的發(fā)生有關(guān)，并且在隱性遺傳或超顯性遺傳中AA基因型或AA+GG基因型可增加隱睪患病的風(fēng)險(xiǎn)。這一結(jié)論仍需遺傳學(xué)深入分析基因型，尋找大樣本證據(jù)來驗(yàn)證。