齊大明,董誠(chéng)明, 2*,劉天亮,高啟國(guó),楊林林,侯文川
基于指紋圖譜對(duì)金銀花與山銀花的區(qū)分及各品種金銀花質(zhì)量評(píng)價(jià)
齊大明1,董誠(chéng)明1, 2*,劉天亮1,高啟國(guó)3,楊林林1,侯文川1
1. 河南中醫(yī)藥大學(xué),河南 鄭州 450046 2. 呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心,河南 鄭州 450046 3. 河南太龍藥業(yè)股份有限公司,河南 鄭州 450001
建立金銀花和山銀花指紋圖譜,對(duì)河南封丘金銀花與湖南不同基原山銀花進(jìn)行區(qū)別比較,并對(duì)封丘不同品種金銀花進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。利用HPLC法構(gòu)建金銀花和山銀花藥材的指紋圖譜;利用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012版)”進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)、以“SIMCA13.0”軟件進(jìn)行主成分分析(principal component analysis,PCA)分析;通過(guò)HPLC法測(cè)定河南封丘不同品種金銀花成分含量。河南封丘產(chǎn)金銀花相似度均在0.95以上,湖南各基原山銀花相似度在0.97以上,金銀花和山銀花相似度在0.57~0.79,豫金二號(hào)與金銀花及山銀花藥材相似度均在0.6以下,共有多成分PCA分析也能顯著區(qū)分金銀花和山銀花。金銀花各品種中北花1號(hào)酚酸類以綠原酸、異綠原酸A和異綠原酸C之和為5.1%,比其他品種高約15%;木犀草苷豫金1號(hào)含0.062%、北花1號(hào)0.064%,比四季花高約25%、比羊角花高約50%。該化學(xué)指紋圖譜方法能顯著區(qū)分金銀花和山銀花,二者間的化學(xué)成分差異亦能為金銀花指標(biāo)性成分的選擇提供參考。金銀花不同栽培品種成分含量差異明顯,豫金1號(hào)和北花1號(hào)藥材質(zhì)量較優(yōu),是具有進(jìn)一步開發(fā)利用的潛在優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源。
金銀花;品種;山銀花;HPLC指紋圖譜;質(zhì)量評(píng)價(jià);綠原酸;異綠原酸A;異綠原酸C;質(zhì)量標(biāo)志物
金銀花是忍冬科植物忍冬Thunb.的花蕾或帶初開的花。山銀花為灰氈毛忍冬Hand.-Mazz.、紅腺忍冬Miq.、華南忍冬DC.或黃褐毛忍冬Hsu et S. C. Cheng的干燥花蕾或帶初開的花。自《中國(guó)藥典》2005年版起,金銀花與山銀花分開單列。
中藥材質(zhì)量及臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)是化學(xué)成分[1],化學(xué)成分種類及含量的差異會(huì)造成療效的差異。中藥材多靶點(diǎn)、多成分的整體性表明以某一種或者幾種化學(xué)成分來(lái)判定品質(zhì)優(yōu)劣是不科學(xué)的[2]。中藥化學(xué)指紋圖譜是一種能夠全面體現(xiàn)化學(xué)成分的方法,能夠全面清晰地表現(xiàn)出中藥材成分種類差異及成分間的量比關(guān)系?,F(xiàn)有金銀花及山銀花化學(xué)指紋圖譜區(qū)別的研究[3]。
遺傳物質(zhì)對(duì)中藥材品質(zhì)影響巨大,種質(zhì)種源是遺傳物質(zhì)的體現(xiàn),遺傳物質(zhì)是藥用植物品種的內(nèi)在特性,它決定了中藥品種的基本品質(zhì)[4]。種質(zhì)種源對(duì)中藥材規(guī)范化種植意義重大,優(yōu)質(zhì)種源是藥材品質(zhì)及臨床療效的基本保證[5]。金銀花種質(zhì)資源豐富、栽培品種繁多,且各品種間成分含量差異明顯[6]。金銀花品種間質(zhì)量評(píng)價(jià)對(duì)金銀花的品種改良、生產(chǎn)實(shí)踐和引種等均具有重要意義[7]。
本課題組建立金銀花和山銀花的指紋圖譜,全面比較金銀花與山銀花二者間成分種類及含量的差異,為金銀花及山銀花的鑒別及成分差異研究提供依據(jù)。也能為金銀花的質(zhì)量標(biāo)志物研究提供部分參考。此外課題組還對(duì)當(dāng)前河南封丘具有一定栽培面積的各忍冬栽培品種進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià),為金銀花的優(yōu)質(zhì)育種和金銀花規(guī)范化種植基地選種提供理論依據(jù)。
Waters2695型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司),IMS105DU型半微量天平(瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)),KQ-500DV型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲波清洗器)等。
綠原酸(批號(hào)140322),中國(guó)食品藥品檢定研究院;香豆酸(批號(hào)wkq17110212)、蘆?。ㄅ?hào)wkq16101104)、新綠原酸(批號(hào)wkq18030107)、獐牙菜苷(批號(hào)wkq18042610)、異綠原酸A(批號(hào)wkq18041207)、異綠原酸C(批號(hào)wkq18050905)、異綠原酸 B(批號(hào)wkq19012301)均購(gòu)于維克奇生物科技有限公司;斷馬錢子酸(批號(hào)DST190719-136)、異槲皮苷(批號(hào)DST191012- 006)、忍冬苷(批號(hào)DST190708-048)均購(gòu)于德思特生物科技有限公司;幼枝含斷氧化馬錢子苷(批號(hào)P27N8L49194)、木犀草苷(批號(hào)Y26A9H59973)均購(gòu)于源葉生物科技有限公司;咖啡酸(批號(hào)MUST-16060613)、莫諾苷(批號(hào)MUST-15102911)均購(gòu)于成都曼斯特生物科技有限公司。所用對(duì)照品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%。色譜甲酸(北京邁瑞達(dá)公司),色譜甲醇、色譜乙腈(Fisher Scientific公司),甲醇(分析純,天津富宇公司),超純水等。
供試樣品經(jīng)由河南中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)科董誠(chéng)明教授鑒定,樣品1~4為忍冬科植物忍冬Thunb.,5為忍冬變種(不做藥用),6~7為紅腺忍冬Miq.,8為華南忍冬DC.,9為灰氈毛忍冬Hand.-Mazz.。信息詳見表1。
2.1.1 色譜條件 以Symmetry C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,以乙腈(A)-0.2%甲酸水溶液(B)為流動(dòng)相,梯度洗脫:0~10 min,8%~9% A;10~15 min,9% A;15~20 min,9%~10% A;20~25 min,10%~11% A;25~30 min,11%~14% A;30~50 min,14%~16% A;50~60 min,16%~20% A;60~65 min,20%~22% A;65~70 min,22%~24% A;70~80 min,24%~40% A。進(jìn)樣體積10 μL,檢測(cè)波長(zhǎng)245 nm,體積流量0.6 mL/min,柱溫38 ℃。
表1 金銀花及山銀花采集信息及性狀描述
2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱定香豆酸、新綠原酸、莫諾苷、綠原酸、斷馬錢子酸、咖啡酸、當(dāng)藥苷、斷氧化馬錢苷、蘆丁、異槲皮素、木犀草苷、忍冬苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C,以50%甲醇溶解,配制成質(zhì)量濃度分別為0.570、0.252、0.966、0.480、0.460、0.420、0.825、0.550、0.954、0.271、0.373、0.284、0.448、0.430、0.672 mg/mL的貯備液,再分別精密量取各貯備液200 μL,即得混合對(duì)照品溶液。
2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取金銀花粉末1 g置具塞錐形瓶中,加入50%甲醇50 mL,稱定記錄質(zhì)量,室溫超聲提取30 min(功率250 W、頻率35 kHz),冷卻后以50%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量,搖勻過(guò)濾,即得。
2.1.4 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液,在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下,連續(xù)進(jìn)樣6次,15個(gè)峰面積的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于2%,相對(duì)峰面積RSD均小于3%,證明該法精密度良好。
2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取四季花粉末6份,按“2.1.3”項(xiàng)下制備供試品溶液,在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定。15個(gè)峰面積的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于2%,相對(duì)峰面積RSD均小于3%,證明該法重復(fù)性良好。
2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取四季花供試品溶液,在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下,分別在0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣,15個(gè)峰面積的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于2%,相對(duì)峰面積RSD均小于3%
參照《中國(guó)藥典》2020年版金銀花項(xiàng)下含量測(cè)定并進(jìn)行線性關(guān)系考察,線性關(guān)系見表2。
表2 成分線性關(guān)系
2.3.1 金銀花及山銀花指紋圖譜相似度評(píng)價(jià) 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012.130723版)”對(duì)樣品圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià),相似度數(shù)據(jù)見表3。但是為了清晰看出樣品間差別,將金銀花和山銀花重疊圖譜放在了不同圖上,見圖1~3。
由圖1、2可知,不同品種金銀花藥材共有峰22個(gè),已知化合物15個(gè);不同基原山銀花共有峰16個(gè),與金銀花共有峰15個(gè),共有已知化合物9個(gè),分別為新綠原酸、綠原酸、斷馬錢子酸、當(dāng)藥苷、斷氧化馬錢子苷、異槲皮素、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C。由圖3可知金銀花有而山銀花沒(méi)有的峰有5、10、13、15(木犀草苷)、16(忍冬苷)、17、22號(hào)峰。金銀花含量較山銀花較高的的有7號(hào)峰(斷馬錢子酸)和12號(hào)峰,山銀花較金銀花含量高的有1(新綠原酸)、6(綠原酸)、11(斷氧化馬錢苷)、14(異槲皮素)、19(異綠原酸A)和21(異綠原酸C)號(hào)峰。
四季花、豫金1號(hào)、北花1號(hào)和羊角花相似度超0.95;但豫金1號(hào)、四季花含有少量香豆酸及蘆丁,相似度達(dá)0.994,北花1號(hào)和羊角花則不含有。山銀花樣品相似度均在0.97以上,白米花和青米花(同屬紅腺忍冬)相似度達(dá)0.993,其中山白花(灰氈毛忍冬)與紅腺忍冬及華南忍冬峰有些許差異,尤其以4號(hào)峰(莫諾苷)和J2號(hào)峰(蘆?。┖枯^高。
表3 各樣品間相似度
1-新綠原酸 4-莫諾苷 6-綠原酸 7-斷馬錢子酸 8-咖啡酸 9-當(dāng)藥苷 11-斷氧化馬錢苷 14-異槲皮素 15-木犀草苷 16-忍冬苷 18-異綠原酸 B 19-異綠原酸 A 21-異綠原酸 C J1-香豆酸 J2-蘆丁
豫金2號(hào)與藥用的金銀花和山銀花兩者差別較大,和每個(gè)樣品相似度都低于0.60,可以完全獨(dú)立出來(lái),故而該忍冬變種在產(chǎn)地不做藥用。由圖4可知豫金2號(hào)環(huán)烯醚萜類中11號(hào)峰斷氧化馬錢苷含量較金銀花與山銀花高。
圖2 山銀花樣品HPLC指紋圖譜疊加圖
圖3 金銀花與山銀花對(duì)照指紋圖譜
2.3.2 金銀花及山銀花已知共有化學(xué)成分主成分分析(principal component analysis,PCA) 就樣品中已知的9個(gè)共有峰面積(表4),分別為新綠原酸、綠原酸、斷馬錢子酸、當(dāng)藥苷、斷氧化馬錢子苷、異槲皮素、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C,采用SIMCA13.0對(duì)樣品進(jìn)行PCA分析,模型檢驗(yàn)R=0.95、2=0.654,表明該模型預(yù)測(cè)信度很好。結(jié)果如圖5所示,與相似度評(píng)價(jià)結(jié)果一致,金銀花與山銀花各聚為一類,且四季花與豫金1號(hào)相似度高,白米花與青米花相似度高。
圖4 豫金2號(hào)HPLC指紋圖譜
2.3.3 金銀花及山銀花已知共有化學(xué)成分含量差異分析 以封丘種植歷史較久的四季花中9個(gè)共有已知成分作為參照,比較各藥材間化學(xué)成分差異,用各藥材對(duì)應(yīng)峰面積除以四季花對(duì)應(yīng)峰面積,數(shù)值大于1表示含量高,小于1表示含量低。由表5可知山銀花中新綠原酸峰面積是金銀花的5.05~14.16倍,山銀花較金銀花中綠原酸偏高、異綠原酸B是金銀花的2.00~5.06倍、異綠原酸A是金銀花的2.29~4.85倍、異綠原酸C是四季花的1.29~7.86倍。金銀花是山銀花中斷馬錢子酸峰面積的3.33~10倍,金銀花是山銀花中當(dāng)藥苷峰面積的1.14~5.24倍。豫金2號(hào)斷氧化馬錢子苷較其他樣品高15倍左右。由圖6可知金銀花聚為一類時(shí)起主要作用的成分為當(dāng)藥苷和斷馬錢子酸;山銀花聚為一類的成分有異槲皮素和有機(jī)酸類成分;豫金2號(hào)與其他樣品差異性大的主要原因就是斷氧化馬錢子苷。
表4 金銀花和山銀花已知共有化合物峰面積
圖5 樣品PCA得分分布圖
2.3.4 不同品種金銀花質(zhì)量評(píng)價(jià) 由表6可知,不同品種金銀花間成分量存在顯著性差異,含酚酸類以綠原酸、異綠原酸A和異綠原酸C三者之和計(jì)北花1號(hào)較高;就木犀草苷而言,豫金1號(hào)和北花1號(hào)量較高。
指紋圖譜的建立過(guò)程中,本課題組對(duì)提取溶劑種類:水及不同濃度的甲醇和乙醇進(jìn)行比較,最后發(fā)現(xiàn)50%甲醇提取出的化學(xué)成分種類較多。課題組也對(duì)提取方式(回流及超聲)進(jìn)行比較,因差異性不大,故選擇了超聲提取。而后對(duì)料液比、超聲功率、提取時(shí)間、都進(jìn)行過(guò)考察;確定了供試品的提取方法。同時(shí)對(duì)流動(dòng)相梯度變化、檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱溫、體積流量等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,最終確定了該色譜指紋圖譜條件。該色譜條件在能較全面分離金銀花化學(xué)成分的同時(shí)較現(xiàn)有金銀花指紋圖譜時(shí)間也有所縮減。
表5 金銀花和山銀花已知共有化合物峰面積比
圖6 樣品PCA品名、成分雙標(biāo)圖
在化學(xué)指紋圖譜相似度計(jì)算時(shí),將大面積峰對(duì)應(yīng)的高含量的化學(xué)成分進(jìn)行嚴(yán)格的控制,次要峰和小峰則允許有較大變化或直接忽略不計(jì),這對(duì)評(píng)價(jià)有效成分不明確的中藥并不合適。有研究稱指紋圖譜間的細(xì)微差異可能才是質(zhì)量評(píng)價(jià)的關(guān)鍵[8]。劉昌孝院士[9-10]提出的質(zhì)量標(biāo)志物其具有“有效性”“特有性”“傳遞與溯源性”“可測(cè)性”及“相關(guān)配伍”等特點(diǎn)。而實(shí)際情況下標(biāo)志物的選擇很難兼顧所有特性。以金銀花中綠原酸為例,現(xiàn)代藥理研究表明綠原酸具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化和抗炎的作用,這就是有效性的體現(xiàn),可測(cè)性是質(zhì)量標(biāo)志物的基礎(chǔ),但綠原酸大多數(shù)中藥材中都含有,比如山銀花、菊花、蒼耳等,相對(duì)于金銀花綠原酸的專屬性就不強(qiáng)。通過(guò)對(duì)比金銀花及山銀花指紋圖譜,可以發(fā)現(xiàn)5、10、13、15(木犀草苷)、16(忍冬苷)、17和22號(hào)峰,均是金銀花有而山銀花沒(méi)有的峰,現(xiàn)代研究表明木犀草苷具有抑菌、抗炎、抗病毒、抗腫瘤、抗皮膚老化、抗局部缺血的生物活性[11]。相對(duì)于綠原酸來(lái)說(shuō)木犀草苷在有效性的基礎(chǔ)之上專屬性也更強(qiáng)一些。而除木犀草苷和忍冬苷外,5、10、13、17和22這5個(gè)未知峰或許也能夠?yàn)榻疸y花的質(zhì)量標(biāo)志物提供參考。
表6 不同品種金銀花含量測(cè)定
不同小寫字母表示差異顯著(<0.05)
Different lowercase letters indicate significant differences (< 0.05)
基因是指通過(guò)有性繁殖或無(wú)性繁殖在親代與子代間傳遞的遺傳物質(zhì),不同藥用植物栽培品種來(lái)源的藥材可能具有各自相對(duì)穩(wěn)定的核酸序列,也具有各自獨(dú)特的蛋白表達(dá)。生物指紋圖譜是從基因水平上對(duì)藥用植物進(jìn)行種質(zhì)親緣關(guān)系檢測(cè)的有效工具[12]。在產(chǎn)地調(diào)查中了解到豫金1號(hào)是四季花芽變選育出的新品種,故而這2個(gè)品種相似度達(dá)0.994,而且相對(duì)于北花1號(hào)及羊角花都多含有J1號(hào)峰(香豆酸)、J2號(hào)峰(蘆?。?。白米花和青米花雖然顏色性狀差異較大,但是同屬紅腺忍冬,可能是采收花期及干燥方式不同造就了顏色的差異,但后期的這些因素并不會(huì)對(duì)基因序列造成影響,而兩者化學(xué)指紋圖譜相似度達(dá)0.993,在一定程度上也表現(xiàn)了基因序列的信息。化學(xué)指紋圖譜與DNA指紋圖譜必然存在一定相關(guān)性,故而采用DNA指紋圖譜表征藥效組分含量及化學(xué)指紋圖譜特征,挑選忍冬優(yōu)良品種也不失為一條研究路線。
忍冬各品種間成分含量有明顯差異,據(jù)本課題組調(diào)研,現(xiàn)河南封丘確實(shí)存在部分金銀花木犀草苷含量低于藥典要求的情況,排除金銀花花期和茬期的影響,其中品種是一個(gè)不可忽視的問(wèn)題。本課題組前期研究表明,不同生長(zhǎng)期金銀花中木犀草苷含量由高到低依次為大白期>二白期>三青期>銀花期>金花期[8]。金銀花采花時(shí)期一般分為四茬,木犀草苷含量與金銀花茬期的關(guān)系也表現(xiàn)為頭茬含量最高。為了避免金銀花茬期間差異的影響,這4個(gè)忍冬品種均采收于同一時(shí)期。排除前面這些因素,化學(xué)成分含量偏低的原因可能就是品種退化,封丘產(chǎn)地現(xiàn)栽培面積最大的就是四季花,多年的無(wú)性繁殖很可能引起品種退化。4個(gè)品種中四季花和豫金1號(hào)直立性好、花期長(zhǎng)、產(chǎn)量穩(wěn)定;羊角花稍次之;北花1號(hào)的特點(diǎn)是花期持續(xù)時(shí)間短,長(zhǎng)時(shí)間不開花,采摘較為方便,但是花期短也就造成產(chǎn)量偏低,而且烘干后的花蕾多開裂,市場(chǎng)認(rèn)可度不高。而在木犀草苷含量上占據(jù)優(yōu)勢(shì)的有豫金1號(hào)和北花1號(hào)。本課題組對(duì)忍冬品種間質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究能夠?yàn)榻疸y花的優(yōu)質(zhì)育種和金銀花規(guī)范化種植基地選種提供理論依據(jù)。
綜上所述本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建的金銀花和山銀花的化學(xué)指紋圖譜可對(duì)二者進(jìn)行顯著區(qū)分,且指紋圖譜相似度的結(jié)果與共有化學(xué)成分PCA分析結(jié)果一致,由金銀花及山銀花已知共有化學(xué)成分PCA分析及指紋圖譜相似度聯(lián)合分析,可知多成分同時(shí)測(cè)定也能在一定程度上反映藥材的整體性,多指標(biāo)定量評(píng)價(jià)模式較適合于中藥的質(zhì)量控制[13]。木犀草苷、忍冬苷、5、10、13、17和22這7個(gè)峰或許能為金銀花的質(zhì)量標(biāo)志物提供參考。河南封丘現(xiàn)種植忍冬品種中豫金1號(hào)和北花1號(hào)質(zhì)量較優(yōu),四季花產(chǎn)量占些許優(yōu)勢(shì),雖各有部分缺陷,但仍是具有進(jìn)一步開發(fā)利用的潛在種質(zhì)資源。
利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突
[1] 路俊仙, 呂凌, 張才波. 金銀花和灰氈毛忍冬多成分定性的指紋圖譜比較 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2019, 34(7): 3215-3219.
[2] 王智民. 中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的系統(tǒng)研究是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2003, 28(12): 1111-1113.
[3] 劉亞楠, 石典花, 雷留成. 金銀花與山銀花的HPLC指紋圖譜鑒別研究 [J]. 中草藥, 2017, 48(4): 773-776.
[4] 索風(fēng)梅, 宋經(jīng)元, 陳士林, 等. AFLP分析唐古特大黃、掌葉大黃和藥用大黃的親緣關(guān)系研究[J]. 中草藥, 2010, 41(2): 292-296.
[5] 王彩云, 侯俊, 王永, 等. 黔西北優(yōu)質(zhì)半夏種源篩選 [J]. 北方園藝, 2019(7): 127-132.
[6] 雷華平, 秦韋, 劉純一, 等. 不同品種金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量測(cè)定 [J]. 中國(guó)野生植物資源, 2015, 34(5): 30-32.
[7] 王湘瑩, 何鋼, 王曉明, 等. 金銀花不同品種間遺傳變異的ISSR分析 [J]. 中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 33(11): 77-82.
[8] 詹雪艷, 史新元, 段天璇, 等. 色譜指紋圖譜相似度方法的研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2011, 17(2): 248-251.
[9] 劉昌孝, 陳士林, 肖小河, 等. 中藥質(zhì)量標(biāo)志物(Q-Marker): 中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制的新概念 [J]. 中草藥, 2016, 47(9): 1443-1457.
[10] 劉天亮, 董誠(chéng)明, 齊大明. 基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物(Q-marker) 的金銀花指紋圖譜體系的構(gòu)建思路 [J]. 中草藥, 2020, 51(1): 229-235.
[11] 楊麗軍, 王丹丹, 張?jiān)史? 等. 金銀花中木犀草苷的研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2017, 14(24): 58-61.
[12] 楊飛, 張敏, 彭興揚(yáng), 等. 金銀花五個(gè)品系的RAPD分析及DNA指紋圖譜的建立 [J]. 武漢植物學(xué)研究, 2007, 25(3): 235-238.
[13] 熊艷, 王智民, 林麗美, 等. 金銀花質(zhì)量控制方法研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志, 2009, 16(4): 103-105.
Identification ofandbased on fingerprint and quality evaluation of different varieties of
QI Da-ming1, DONG Cheng-ming1, 2, LIU Tian-liang1, GAO Qi-guo3, YANG Lin-lin1, HOU Wen-chuan1
1. Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China 2. Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China 3. Taloph Pharmaceutical Co., Ltd., Zhengzhou 450001, China
To establish the HPLC fingerprint ofJinyinhua () and Shanyinhua (). The differences ofin Fengqiu of Henan Province andin Hunan Province were compared based on the HPLC fingerprint and the quality of different varieties ofin Fengqiu was evaluated.Fingerprints ofandwere establishd by HPLC. The Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 version) was used for similarity evaluation, and the PCA analysis was performed by (SIMCA13.0). HPLC was used to detect the content of different varieties ofin Henan.The similarity of all varieties ofin Fengqiu was above 0.95, similarity offrom different origins was above 0.97. The similarity ofandwas 0.57—0.79. The similarity between the Yujin No.2 andandwere less than 0.6. PCA analysis can distinguishandsignificantly. The total contents of chlorogenic acid, isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid C in the Beihua No.1 was 5.1%, which was 15% higher than other varieties of. The content of luteoloside in the Yujin No.1 was 0.062% and in the Beihua No. 1 was 0.064%, which were about 25% higher than that in the Sijihua and about 50% higher than that in the Yangjiaohua.The HPLC fingerprint can significantly distinguishand, and the difference of chemical components between them could also provide reference for the selection of Q-markers of. The content of components in different varieties ofwas significantly different. The Yujin No.1 and the Beihua No.1 have better quality, which were potential germplasm resources for further development and utilization.
; variety;; HPLC fingerprint; chlorogenic acid; isochlorogenic acid A; isochlorogenic acid C; Q-Markers
R286.2
A
0253 - 2670(2023)06 - 1946 - 07
10.7501/j.issn.0253-2670.2023.06.027
2022-09-06
國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81603232)
齊大明(1995—),男,碩士研究生,研究方向?yàn)橹兴庂Y源與鑒定。Tel: 18838963870 E-mail: 809735897@qq.com
董誠(chéng)明,教授,主要從事藥用植物學(xué)、中藥資源學(xué)研究。Tel: 13592508163 E-mail: dcm371@sohu.com
[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]